气相色谱-串联质谱法同时测定当归中35种禁用农药残留量

吴福祥 李坚 朱仁愿 闫君 陈婷 丁辉 张文

摘要  ［目的］利用气相色谱－串联质谱（GC-MS/MS）建立同时测定当归中35种禁用农药残留量的分析方法。［方法］色谱柱为HP-5MSUI（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；载气流量1.2 mL/min；进样量1 μL，不分流进样；进样口温度280 ℃；程序升温。样品以乙腈直接提取，采用GC-MS/MS的多反应监测分析模式，通过基质匹配标准溶液降低基质干扰，内标法定量。［结果］35种禁用农药在各自浓度范围内线性良好，相关系数均不低于0.985 2，检出限为0.155 5～7.173 9 μg/kg，定量限为0.513 2～23.673 9 μg/kg，精密度RSD均小于14%（n=6）。平均加樣回收率为83.86%～122.80%，RSD为3.8%～24.6%（n=5）。［结论］该方法快捷、准确，可用于当归中禁用农药残留的定性和定量分析。

关键词  当归；禁用农药残留量；气相色谱-串联质谱法

中图分类号  S 481+.8   文献标识码  A   文章编号  0517-6611（2023）05-0198-05

doi： 10.3969/j.issn.0517-6611.2023.05.045

开放科学（资源服务）标识码（OSID）：

Simultaneous Determination of 35 Banned Pesticide Residues in Angelica sinensis by GC-MS/MS

WU Fu-xiang， LI Jian， ZHU Ren-yuan et al

（Lanzhou Institute for Food and Drug Control/Key Laboratory of Pesticide and Veterinary Drug Monitoring for State Market Regulation /Gansu Engineering Research Center for Monitoring Exogenous Harmful Residues in Traditional Chinese Medicines， Lanzhou，Gansu 730050）

Abstract  ［Objective］ A method for simultaneous determination of 35 banned pesticide residues in Angelica sinensis was established by gas chromatography-tandem mass spectrometry （GC-MS/MS）. ［Method］ Chromatographic column was HP-5MSUI（30 m×0.25 mm，0.25 μm）;gas traffic was 1.2 mL/min;injection volume was 1 μL， no split injection;injection temperature was 280 ℃;the program heats up.The samples were extracted directly with acetonitrile， and the multi-reaction monitoring and analysis mode of GC-MS/MS was used. Matrix interference was reduced by matrix matching standard solution， and the internal standard method was used for quantification. ［Result］ The 35 banned pesticides had good linearity within their respective concentration range， the correlation coefficient was not less than 0.985 2，the limit of detection was 0.155 5-7.173 9 μg/kg， the limit of quantification was 0.513 2-23.673 9 μg/kg， the RSD of precisions were all less than 14%（n=6）， the average recovery rate was 83.86%-122.80%， and the RSDs were 3.8%-24.6%（n=5）. ［Conclusion］ The method is rapid and accurate， and can be used for qualitative and quantitative analysis of banned pesticide residues in Angelica sinensis.

Key words  Angelica sinensis;Banned pesticide residues;Gas chromatography tandem mass spectrometry （GC-MS/MS）

中医药是我国文明的宝贵遗产，在几千年的历史中不断进步，为人类的健康作出了重大的贡献。中药作为中医药体系的核心组成部分，一直以来都受到人们的充分重视。甘肃省是我国中药材的主产区之一，素有“千年药乡”和“天然药库”的美誉，中药资源十分丰富。据2019年统计，甘肃省中药材种植面积31.33万hm2，产量52万t，产值超32亿元；其中，当归、板蓝根、党参等道地药材产量分别占全国市场的95%、65%、60%，种植面积及产量居全国前列［1］。近年来，中药的质量安全问题阻碍了我国中药产品进入国际市场，主要原因就是农药残留、重金属及真菌毒素等外源性污染问题。其中，农药残留污染主要有3个方面：一是种植过程中，施用农药防治病虫害，造成农药滥用的直接污染；二是土壤和空气中残留的农药造成的间接污染；三是采收加工、储存运输过程中造成的污染［2-6］。随着农药使用范围和使用量的不断扩大，农药造成的环境污染和食品药品安全问题逐渐暴露，如六六六、杀虫脒、除草醚、艾氏剂、狄氏剂、苯线磷等农药残留超标现象时有发生［7］。基于此，该试验采用GC-MS/MS建立同时测定当归中35种禁用农药的残留检测方法，以期为控制当归质量提供数据参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1    仪器。7890B-7000D气相色谱-串联质谱仪（美国安捷伦公司）；ME204/02万分之一电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；AH40全自动均质器（厦门睿科集团）；UPU-1-20T超纯水机（四川优普超纯科技公司）；5810R离心机（德国Eppendorf公司）；EVA50A氮吹仪（北京普立泰科仪器有限公司）。

1.1.2    试剂。35种农药对照品：甲基对硫磷（G163528，0.1 g，98.2%）、对硫磷（G130512，0.1 g，98.0%）、久效磷（G833027，0.1 g，98.0%）、α-六六六（G130554，0.1 g，98.1%）、β-六六六（G138918，0.1 g，98.6%）、γ-六六六（G129950，0.25 g，98.8%）、δ-六六六（G132134，0.05 g，99.2%）、4，4′-滴滴涕（G12082000，0.1 g，99.5%）、2，4′-滴滴涕（G12081000，0.1 g，99.6%）、4，4′-滴滴伊（G130552，0.1 g，99.7%）、4，4′-滴滴滴（G123407，0.25 g，98.7%）、杀虫脒（G150101，0.1 g，99.5%）、除草醚（G149884，0.1 g，98.1%）、艾氏剂（G16913910，100 ng/μL）、狄氏剂（H171083CY，100 ng/μL）、苯线磷（C13421000，0.25 g，99.5%）、蝇毒磷（G92054，0.1 g，98.0%）、治螟磷（G108121，0.1 g，98.9%）、特丁硫磷（G158932，0.1 g，97.8%）、甲拌磷（BCBZ5040，0.1 g，95.4%）、甲基異柳磷（G122317，0.05 g，97.5%）、O-内吸磷（993046CY，10 ng/μL）、S-内吸磷（G1045602，0.1 g，98.3%）、灭线磷（G150818，0.1 g，98.2%）、水胺硫磷（G126442，0.1 g，99.7%）、α-硫丹（G150002，0.1 g，98.1%）、β-硫丹（G139276，0.1 g，99.6%）、硫丹硫酸酯（G1042736，0.1 g，100%）、氟虫腈（G156586，0.1 g，96.5%）、氟甲腈（13-JQW68-5，0.01 g，98.0%）、氟虫腈砜（G153662，0.05 g，98.2%）、氟虫腈亚砜（G141212，0.025 g，99.3%）、o，p′-三氯杀螨醇（219071318，100 ng/μL）、p，p′-三氯杀螨醇（G139873，0.1 g，99.7%），均购自DrEhrenstorfer公司；甲基硫环磷（S033319，100.5 ng/μL），购自Achemtek公司。内标对照品：磷酸三苯酯（G1042718，0.1 g，100%）购自DrEhrenstorfer公司。乙腈为色谱纯（德国Merck公司）；氯化钠、冰醋酸为分析纯（国药集团化学试剂有限公司）；水为超纯水（Milli-Q）。

1.1.3    试材。23批当归（Angelica sinensis Radix）均采自甘肃省定西市岷县种植地，经兰州市食品药品检验检测研究院吴福祥主任药师鉴定。

1.2 试验方法

1.2.1    混合对照品溶液的配制。分别称取35种对照品各10 mg，精密称定，置10 mL容量瓶中，用乙腈稀释配制成1 mg/mL的对照储备液，密封储存于-18 ℃冰箱中。根据各农药在仪器上的响应灵敏度，准确移取一定体积的对照储备液，置25 mL容量瓶中，用乙腈稀释配制成质量浓度为100～250 μg/L的混合对照品溶液，于4 ℃避光保存。精密量取空白基质溶液1.0 mL，平行6份，置氮吹仪上于39 ℃水浴浓缩至约0.4 mL，分别加入混合对照品溶液20、40、100、200、300、400 μL，以乙腈稀释至1 mL，摇匀即得2～100 μg/L 的6个级别浓度梯度的基质匹配混合对照品溶液［8］。

1.2.2    内标溶液的配制。精密称取磷酸三苯酯内标对照品0.010 44 g，置10 mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液9.58 μL，置100 mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，即得内标溶液。

1.2.3    供试品溶液的配制。取供试品粉末（过3号筛）5 g，精密称定，置50 mL离心管中，加1%冰醋酸水溶液15 mL，陶瓷均质子1颗，涡旋2 min，静置30 min后，加入乙腈50 mL和氯化钠1 g，立即摇散，12 000 r/min均质1 min，3 900 r/min离心10 min后取上清液，沉淀重复上述步骤，合并2次上清液，置氮吹仪上于39 ℃水浴氮吹至尽干，用乙腈复溶并稀释至5 mL，摇匀，过0.22 μm滤膜。

1.2.4    色谱条件。安捷伦HP-5MS UI气相色谱柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；载气为氦气，流量1.2 mL/min；程序升温：初始温度80 ℃，保持1 min，以40 ℃/min升至200 ℃，再以2 ℃/min升至230 ℃，最后以25 ℃/min升至320 ℃，保持3 min；进样量1 μL，进样口温度280 ℃，不分流进样。

1.2.5    质谱条件。EI离子源，多反应监测（multiple reaction monitoring，MRM）模式，离子源温度230 ℃，电子能量70 eV，溶剂延迟3.5 min，碰撞气（氮气）流速1.5 mL/min。

1.2.6    基质效应。对比10、25、50、75 μg/L的当归空白基质匹配标液与乙腈配制的标液的仪器响应值，以基质标样的响应值与溶剂标样响应值的比值计算基质效应。

1.2.7    方法学考察。

1.2.7.1    线性关系考察。取“ 1.2.1 ”项下当归空白基质配制的6个级别梯度的混合对照品溶液进行分析，以质量浓度为横坐标（x）、定量离子对峰面积为纵坐标（y）进行线性回归计算，绘制标准曲线。

1.2.7.2    检出限和定量限。选取基质匹配标准曲线最低浓度的混合对照品溶液进行稀释后进样，以3倍信噪比（S/N≥3）和10倍信噪比（S/N≥10）确定检出限（LOD）和定量限（LOQ）。

1.2.7.3    精密度试验。选取基质匹配标准曲线最高浓度的混合对照品溶液连续进样6次，以定量离子对峰面积RSD计算精密度。

1.2.7.4    加样回收率试验。采用加样回收法，取经测定未检出35种农药的当归阴性样品，分3组，精密加入混合对照品溶液适量，考察10、20、100 μg/kg 3个添加水平的加标回收率，每个水平均测定5次，计算RSD。

1.2.8    样品测定。按照“ 1.2.3 ”方法制备23批当归药材的供试品溶液，分别精密吸取“ 1.2.1 ”基质匹配混合对照溶液和“ 1.2.3 ”供试品溶液各1 mL，精密加入“ 1.2.2 ”内标溶液0.3 mL，混匀，滤过，取续滤液，注入气相色谱串联质谱仪，按照“ 1.2.4 ”色谱条件和“ 1.2.5 ”质谱条件进行测定，每个样品测定3次，以内标法计算样品中35种禁用农药的残留量。

2 结果与分析

2.1 质谱分析参数

35种禁用农药的质谱分析参数见表1，总离子流图见图1。

2.2 基质效应

从表2可以看出，α-六六六、o，p′-三氯杀螨醇和p，p′-三氯杀螨醇的基质效应均小于1.0，说明存在基质抑制效应；δ-六六六和氟虫腈的基质效应接近1.0，说明当归基质对这2个农药没有明显的抑制或增强效应；其他30种农药的基质效应均大于1.0，说明存在基质增强效应。因此，为降低基质效应的影响，该试验采用基质匹配法配制标准溶液并绘制标准曲线［9］。

2.3 方法学考察

2.3.1    线性关系。按“ 1.2.7.1 ”方法操作，35种禁用农药的线性方程见表3，相关系数（r）均不低于0.985 2，表明35种禁用农药在各自的浓度范围内呈良好的线性关系。

2.3.2    检出限与定量限。按“ 1.2.7.2 ”方法操作，测得35种禁用农药的检出限为0.155 5～7.173 9 μg/kg，定量限为0.513 2～23.673 9 μg/kg，具体结果见表3，表明该方法满足痕量检测的要求。

2.3.3    精密度。按“ 1.2.7.3 ”方法操作，测得35种禁用农药定量离子对峰面积的RSD为2.2%～13.4%，具体结果见表3，表明仪器精密度良好。

2.3.4    加样回收率。按“ 1.2.7.4 ”方法操作，计算35种禁用农药的平均加样回收率为83.86%～122.80%，RSD为3.8%～24.6%，具体结果见表4，表明该方法回收率良好，可用于当归中35种禁用农药残留量的测定。

2.4 样品测定

按“ 1.2.8 ”方法对23批当归药材进行测定，结果显示（表5），有10批药材检出O-内吸磷、治螟磷、α-六六六、β-六六六、氟虫腈亚砜、对硫磷和甲基异柳磷7种禁用农药。按照《中国药典》2020版限量标准［10］进行判定，均未超出标准规定。

3 结论

该试验建立了气相色谱-串联质谱同時测定当归中35种禁用农药残留量的检测方法，具有前处理简单、灵敏度高、准确快速的优点，同时符合残留分析的要求，可用于当归中禁用农药残留的定性和定量分析。

参考文献

［1］  杨陇军.甘肃当归产业发展优势明显［EB/OL］.（2019-12-23）［2021-07-29］.http：//www.yidaiyilutcm.org.cn/index.php？m=content&c=index&a=show&catid=52&id=368.

［2］ 庞国芳.农药残留高通量检测技术：第1卷 植物源产品［M］.北京：科学出版社，2012：530.

［3］ 金红宇，王莹，孙磊，等.中药中外源性有害残留物监控的现状与建议［J］.中国药事，2009，23（7）：639-642.

［4］ 李慧君，张文生，吴洁珊，等.中药材农药残留研究现状［J］.中国中药杂志，2019，44（1）：48-52.

［5］ 高倩，花日茂，汤锋，等.中药材农药残留研究现状［J］.安徽农业科学，2008，36（23）：10147-10151.

［6］ 窦亚洁，刘慧，李晓萌，等.中药中外源性有害物的残留现状及风险评估的研究进展［J］.中草药，2023，54（2）：396-407.

［7］ 何佩雯，赵海誉，杜钢，等.气相色谱技术在中药农药残留检测中的应用［J］.中国实验方剂学杂志，2010，16（2）：126-134.

［8］ 陈婷，续艳丽，张文，等.全自动QuEChERS样品制备系统结合高效液相色谱-串联质谱法检测植物源性食品中34种农药残留［J］.色谱，2019，37（9）：1019-1025.

［9］ 朱仁愿，刘兴国，白雯静，等.超高效液相色谱-串联质谱法同时测定党参中18种植物生长调节剂残留量［J］.分析试验室，2020，39（12）：1450-1455．

［10］  国家药典委员会.中华人民共和国药典：2020年版 四部［S］.北京：中国医药科技出版社，2020：30-31.