医疗机构制剂加味双柏膏的质量研究

2023-06-07陈燕霞孙亦群李得堂

中国民族民间医药·下半月 2023年4期

关键词：大黄

陈燕霞孙亦群李得堂

【摘要】目的：对不同批次加味双柏膏进行质量研究。方法：采用显微鉴别法对大黄及关黄柏进行显微特征研究，采用薄层色谱法对大黄进行薄层色谱研究及其方法考察。结果：不同批次加味双柏膏的大黄及关黄柏显微特征明显易见；大黄的薄层色谱分离效果良好，色谱斑点清晰，阴性对照无干扰。结论：该实验方法简便可行，重现性好，可用于加味双柏膏的质量控制。

【关键词】加味双柏膏；大黄；关黄柏；显微鉴别；薄层色谱鉴别

【中图分类号】R917 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2023）08-0050-04

Abstract：Objective Studies on the qualities of different batches of Modified Shuangbai Ointment.Methods The Microscopical Identification was used to study the microscopic characters between Rheum Officinale and Cortex Phellodendri Amurensis， the TLC Identification was used to study the thin-layer chromatogram of Rheum Officinale， etc.Results There were obvious differences in microscopic characters between Rheum Officinale and Cortex Phellodendri Amurensis. The separation effect of the thin-layer chromatogram in Rheum Officinale is good， the TLC spots developed were fairly clear， and the blank test showed no interference.Conclusion This is a simple and reproducible testing method to be used to control the quality of Modified Shuangbai Ointment.

Key words：Modified Shuangbai Ointment；Rhei Radix et Rhizoma；Phellodendri Amurensis Cortex；Microscopical Identification；TLC Identification

“院有专科、科治专病、病有专药、药有特色”，医疗机构中药制剂是医院各科室名老中医在长期的临床使用过程中总结出来的智慧结晶，是医院重点专科检查项目的重要指标，是大型中医医院彰显重点专科核心竞争力的重要体现之一。医疗机构中药制剂不仅能满足临床需求、弥补已上市中成药品种的不足，还为中药新药的创新、转化过程中提供了宝贵的临床实践基础［1-5］。

加味双柏膏是广州中医药大学第一附属医院骨伤科的专科制剂，由大黄、关黄柏、侧柏叶等5 味中药组成，软膏的基质为黄凡士林。大黄主要含有蒽醌类等，具有泻下攻积、清热泻火、凉血解毒、逐瘀通经、利湿退黄之功效［6-10］。关黄柏主要含有小檗碱等，具有清热燥湿、泻火除蒸、解毒疗疮之功效［11-12］。薄荷主要含有挥发油等，具有疏散风热、清利头目、利咽、透疹、疏肝行气之功［13-14］。泽兰主要含有挥发油等，具有活血调经、祛瘀消痈、利水消肿之功［15］。侧柏叶主要含有挥发油等，具有凉血止血、化痰止咳、生发乌发之功效［16］。方中大黄、关黄柏清热解毒，祛瘀生新；侧柏叶、泽兰活血祛瘀；薄荷清凉祛瘀；全方具有活血祛瘀、消肿之功，主要治疗扭伤、挫伤等外伤。该医疗机构制剂临床使用效果良好，年销售量约为28.5 万贴，是我院骨伤科的特色治疗制剂，深受广大患者喜爱。近年来国家相关部门对于医疗机构制剂质量要求不断提高。为确保质量可控，保证用药安全，本文对医疗机构制剂加味双柏膏进行质量研究，以进一步提高及完善其质量标准。

1 材料与方法

1.1 仪器试药显微镜摄镜头仪（CX41，奥林巴斯Olympus）；半自动点样仪（Linomat-5，瑞士卡玛CAMAG）；全自动展开仪（ADC2，瑞士卡玛CAMAG）；

1.2 试药大黄对照药材（中国药品生物制品检定所，批号120984-200301）；大黄酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号110757-200206）；关黄柏对照药材（中国药品生物制品检定所，批号120937-201007）；黄柏酮对照品（中国药品生物制品检定所，批号111923-201303）；加味双柏膏（广州中医药大学第一附属医院制剂中心）；大黄阴性对照样品（按工艺制成不含大黄的样品）；关黄柏阴性对照样品（按工艺制成不含关黄柏的样品）；硅胶H预制板（烟台市化学工业研究所，批号20140403；青岛海洋化工厂，批号20140108）；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 显微鉴别法

2.1.1 处方显微特征分析加味双柏膏为大黄、关黄柏等五味药材细粉混匀后，加入适量凡士林后制得的软膏剂。经过处方显微特征分析（见表1），方中大黄、关黄柏粉末具有专属性特征，可作为显微鉴别依据。

2.1.2 实验内容与结果取三个不同批次的加味双柏膏（S1，S2，S3）各 1 g，加二氯甲烷50 mL，搅拌使其完全溶解，静置分层，弃去上层溶液，下层沉淀物用二氯甲烷分次洗涤至上层溶液近无色，棄去上层溶液，下层沉淀物滤过，取滤渣，挥干溶剂，取适量粉末置于载玻片，滴加水合氯醛试液1～2 滴，透化2 次，滴加稀甘油1～2 滴，加盖玻片，置显微镜下观察。

2.1.3 实验结果三个不同批次加味双柏膏显微鉴别结果中均有一下特点：草酸钙簇晶大，直径20～140 μm（大黄）；纤维鲜黄色，周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维；含晶细胞壁木化增厚（关黄柏）。该显微鉴别方法操作简单，显微特征明显，可作为加味双柏膏质量控制标准之一。如图1所示。

2.2 大黄薄层色谱鉴别方法大黄是加味双柏膏的一味君药，主要成分为蒽醌类成分，其中大黄酸是鉴别大黄和土大黄的重要方法之一。本实验拟建立以大黄酸及大黄对照药材为对照的薄层色谱鉴别方法。参考《中国药典》2020版一部大黄项下的薄层鉴别方法［17］24，制备供试品溶液及对照药材溶液。

2.2.1 大黄供试品溶液的制备取三个不同批次的加味双柏膏（S1、S2、S3）各2 g，加20 mL二氯甲烷，搅拌溶解，倾去上清液；再加20 mL二氯甲烷，搅拌溶解，过滤，滤渣加30 mL甲醇，加热回流30 min，放冷，过滤，滤液蒸干，残渣加10 mL水使溶解；再加1 mL盐酸，加热回流30 min，立即冷却，用乙醚振摇提取2 次，每次20 mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加1 mL三氯甲烷使溶解，作为供试品溶液。

2.2.2 大黄对照药材溶液的制备另取大黄对照药材0.1 g，加20 mL甲醇，浸泡1 h，滤过，取10 mL滤液蒸干，残渣加10 mL水使溶解；再加1 mL盐酸，加热回流30 min，立即冷却，用乙醚振摇提取2 次，每次20 mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加1 mL三氯甲烷使溶解，作为对照药材溶液。

2.2.3 大黄酸对照品溶液的制备取大黄酸对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.2.4 大黄阴性对照液的制备取大黄阴性对照样品2 g，按“2.2.1”项下供试品溶液的制备方法，同法制成大黄阴性对照溶液。

2.2.5 具体实验方法吸取三个不同批次加味双柏膏的供试品溶液8 μL、大黄阴性对照溶液8 μL、大黄对照药材溶液10 μL和大黄素对照品溶液10 μL，分别点于同一硅胶H薄层板上，以石油醚（30～60 ℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏至斑点显色清晰，在日光下检视。

2.2.6 大黄薄层色谱鉴别结果三个不同批次的加味双柏膏供试品（S1、S2、S3）的色谱，在与大黄酸对照品色谱和大黄对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的红色斑点，且大黄阴性对照无干扰，故该方法可作为加味双柏膏质量控制标准之一。如图2所示。

2.3 关黄柏薄层色谱鉴别方法关黄柏系方中另一味君药，主要成分为黄柏酮。本实验拟建立以黄柏酮及关黄柏对照药材为对照的薄层色谱鉴别方法。参考《中国药典》2020版一部关黄柏项下的薄层鉴别方法［17］156，制备供试品溶液及对照药材溶液。

2.3.1 具体实验方法取三个不同批次加味双柏膏各 2 g（约含关黄柏0.2 g），加40 mL二氯甲烷，搅拌，使其溶解，静置分层，弃去上层液，取下层沉淀物滤过，滤渣挥干，加40 mL乙酸乙酯，超声处理30 min，滤过，滤液浓缩至1 mL，作为供试品溶液。另取关黄柏对照药材0.2g，加20 mL乙酸乙酯，超声处理30 min，滤过，滤液浓缩至1 mL，作为对照药材溶液，再取黄柏酮对照品，加乙酸乙酯制成每1 mL含0.6 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述三种溶液各5 μL和15 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯（1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。

2.3.2 关黄柏的薄层色谱鉴别结果试验设置了两个不同的点样量（5 μL和15 μL），供试品溶液点样量高达15 μL，为药典点样量的3倍，然而三个不同批次的加味双柏膏供试品（S1、S2、S3）溶液薄层色谱中与黄柏酮对照品相对应位置上的斑点仍较淡。这由于黄柏酮为脂溶性成分，使用二氯甲烷去除凡士林的同时也损耗了黄柏酮。故不将关黄柏鉴别方法列入标准正文。如图3所示。

3 讨论

3.1 大黄草酸钙簇晶《中国药典》大黄［17］24项下的显微特征包括草酸钙簇晶（直径20～160 μm，有的至190 μm）、导管、淀粉粒。《中国药典》中含大黄的复方制剂（“通幽润燥丸”和“跌打镇痛膏”）［17］1568，1724中大黄显微特征均描述为“草酸钙簇晶大，直径20～140 μm”，考虑到大簇晶所占比例不多，且只有大黄含草酸钙簇晶，因此，参考大黄复方的特征描述为20～140 μm。

3.2 关黄柏晶纤维《中国药典》关黄柏［17］153项下的显微特征包括晶纤维、石细胞及草酸钙方晶。《中国药典》中含（盐）关黄柏的复方制剂（“固经丸”）［17］1142中（盐）关黄柏显微特征均描述为“纤维鲜黄色，周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维；含晶细胞壁木化增厚”，因此，采用含关黄柏复方制剂中的描述特征。

3.3 大黄薄层色谱本研究还考察了大黄的薄层鉴别方法的专属性、耐用性，结果均证明本方法操作简便、专属性强、耐用性好，可用于该加味双柏膏的质量控制。试验中，曾把该方法的薄层板置紫外光灯（365 nm）下检视，但供试品中大黄酸的斑点与另一斑点未完全分离且阴性有干扰。氨熏显色后，供试品中的大黄酸等特征斑点显红色，分离度理想，阴性无干扰。因此未将置紫外光灯（365 nm）下检视未列入标准正文。鉴于本制剂在建立大黄薄层鉴别方法时，紫外灯（365 nm）下检视效果不理想，课题组参考文献［18］的大黄薄层鉴别方法，采用另一展开剂正己烷-乙酸乙酯-甲酸（12∶4∶0.2）進行研究，结果在供试品色谱中大黄酸的斑点与另一斑点也未完全分离，与药典法比较，其大黄酸的位置存在差异。故未将该展开剂列入标准正文。

3.4 关黄柏薄层色谱关黄柏系方中另一味臣药，主要成分为黄柏酮。本实验拟建立以黄柏酮及关黄柏对照药材为对照的薄层色谱鉴别方法。由于加味双柏膏中含有黄凡士林，实验试过用加硅藻土稀释，参照《中国药典》关黄柏鉴别方法进行试验，薄层色谱结果不理想，故不将关黄柏鉴别方法作为加味双柏膏的质量控制方法。

3.5 其它由于薄荷、泽兰、侧柏叶其显微并不具有专属性，因此薄荷、泽兰及侧柏叶显微特征也不能作为加味双柏膏的质量控制方法。且薄荷、泽兰、侧柏叶作为加味双柏膏处方中佐使药，该文并未对其进行薄层色谱研究。后续研究将对加味双柏膏中的大黄及关黄柏这两味君臣药进行含量测定，进一步提高其质量标准。

参考文献

［1］国家药品监督管理局．医疗机构制剂注册管理办法（试行）［EB/OL］. （2005-06-22）. https：//www.nmpa.gov.cn/xxgk/fgwj/bmgzh/20050622010101621.html.

［2］国家药品监督管理局．总局关于对医疗机构应用传统工艺配制中药制剂实施备案管理的公告［EB/OL］. （2018-02-12）. https：//www.nmpa.gov.cn/xxgk/ggtg/qtggtg/20180212143401381.html.

［3］陈家润，江映珠，孟兰贞，等.广东省医疗机构中药制剂注册申报存在问题及对策［J］.中国药事，2019，33（10）：1097-1101.

［4］吴湧. 医院制剂管理研究［D］.杭州：浙江工业大学，2020：10-11.

［5］郑厚平，黄贵庆，潘文桉. 医院制剂心脉舒一号口服液薄层色谱鉴别研究［J］. 广东化工，2021，12（48）：201-202.

［6］国家中医药管理局.中华本草（第五册）［M］．上海：上海科学技术出版社，1999：708.

［7］张依倩，王玉，张兰兰，等.大黄的质量评价方法研究进展与展望［J］.中药材，2010（10）：1663-1668.

［8］陈嘉倩，陈艳琰，唐于平，等.大黄不同功效的古今用药规律分析［J］.中草药，2019，50（6）：1485-1492.

［9］王玉，杨雪，夏鹏飞，等.大黄化学成分、药理作用研究进展及质量标志物的预测分析［J］.中草药，2019，50（19）：4821-4837.