畜禽产品中β-受体激动剂检测能力验证总结与分析

◎ 韩 娇，刘元长，王梦云，钱 章，李 莹，董文婷

（1.武汉谱尼科技有限公司，湖北 武汉 430000；2.农业农村部畜禽产品质量安全监督检验测试中心（武汉），湖北 武汉 430000）

为提高质量控制及管理水平，维持检测能力，检验检测机构每年都会参加多项能力验证工作[1-4]。本文以湖北省农业厅2021—2022 两个年度组织的畜禽产品中β-受体激动剂检测能力验证[5]为例，从实际检测过程中遇到的问题入手，对能力验证中的前期准备、技术细节、数据传递进行总结，分析做好畜禽产品能力验证的经验及关键点。

1 实际检测中遇到的问题

1.1 莱克多巴胺回收率不稳定

2021 年度，进行猪肉中β-受体激动剂检测预实验时，莱克多巴胺回收率不稳定。选取猪肉样品，进行4 个不同添加量的加标实验（n=3），按照《动物源性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定 液相色谱串联质谱法》（GB/T 22286—2008）进行检测，沙丁胺醇和克伦特罗的平行性和回收率符合要求，而莱克多巴胺的回收率不稳定，回收率的RSD 数据见表1。

表1 沙丁胺醇、克伦特罗、莱克多巴胺不同添加量下回收率的RSD 表（n=3）

表1中的方法是内标法定量，而莱克多巴胺的内标是沙丁胺醇-D3，由克伦特罗和沙丁胺醇的数据可知，前处理本身没有问题，因此莱克多巴胺回收率不稳定可能是内标的影响。再次实验，三者分别采用自己的同位素内标定量，同一个浓度点的数据平行性良好，回收率稳定。三者回收率的RSD 数据见表2。

表2 沙丁胺醇、克伦特罗、莱克多巴胺不同添加量下回收率的RSD 表（n=3）

由表1、表2 的实验数据对比可知，进行兽药多残留检测时，内标的影响较大，用药物本身的同位素内标定量最为准确[6]。很多药物参考之前的旧标准采取同一种内标定量，大部分是因为很多物质没有同位素内标[7]，目前同位素内标的种类越来越多，检测时可以添加多种同位素内标[8]。

1.2 配标过程

在进行2021 年的能力验证时，因预实验反复多次，回收率良好，直接对盲样进行检测。前处理过程顺利，上机后，三者的标准曲线非线性，所有的样品空白、盲样、质控样及标样目标峰响应一致，无内标。经反复确认，这是因为配标过程中外标标签和同位素内标标签贴反，导致工作人员把外标误当成内标加入到考核样中，属于人为失误[9-10]。分析数据发现，添加15 μg·kg-1的混标，阴性基质空白和考核样中沙丁胺醇都在15 μg·kg-1左右，确认沙丁胺醇未添加；至于克伦特罗和莱克多巴胺，减去加入外标的量，推算考核样的大概添加范围，重新在猪肉样品中加标，模拟考核样的添加量，用内标法定量确认。最终上报结果3.72 μg·kg-1，考核样添加量4 μg·kg-1，结果较满意。

2 做好畜禽产品的能力验证

根据多次参加能力验证的经验，对做好畜禽产品的能力验证进行总结，最关键的工作是日常的实验室质量控制。而实验室质量控制贯穿检测活动的全部环节，人、机、料、法和环五大因素环环相扣，其中“人员”是贯穿检测各个环节的关键因素，检测人员的技术水平、能力和经验直接决定了检测结果的准确性。

2.1 前期准备

2.1.1 正确利用能力验证工作通知

在能力验证开始之前，省农业农村厅一般会提前1 ～2 个月发布能力验证工作通知，通知包括组织能力验证工作的时间、考核的基质和项目、推荐的方法、能力验证结果上报时间以及结果判定方式。在收到此通知时，根据考核时间、项目和推荐方法，有序进行人、机、料、法和环五大因素的核查准备工作。

（1）人员。选择有经验的分析人员，具备兽药残留痕量检测的操作意识、娴熟的操作技能、良好的操作习惯，清楚影响回收率的关键控制步骤。

（2）仪器。选择灵敏度、重现性等性能指标满足检测方法要求的液质联用仪，且通过校准、清洗离子源，根据调谐报告判断毛细管是否有污染，最终调整仪器状态至最佳。尽量选择新开封的色谱柱，保证柱效。大型精密仪器日常检测尽量专人专用、专人管理。

（3）物料。根据通知考核的基质、项目以及推荐方法，核查标准物质尤其是同位素内标，能力验证建议采纳进口、证书信息齐全、固体粉末状的标准物质，一般首选Dr.公司的固标。试剂、器具等耗材，需要再次确认是通过验收且满足实验要求的，避免出现污染或者吸附目标化合物。

（4）方法。按照能力验证推荐的标准方法农业部1025 号公告-18—2008 制定实验方案，将方法性能优化至最佳；若未指定检测方法，选用本实验室日常熟悉的检测方法。

（5）环境。环境管理方面，最重要的是常量分析与痕量分析区域、检测设备、实验器具应相对隔离，避免交叉污染。这个工作重在日常，能力验证的时候需特别注意，以免污染盲样。

2.1.2 预实验

对五大因素核查完毕后，按照CATL 能力验证鲜样加标的模式开展预实验。选取同品种考核基质进行加标，加标量一般在检出限、2 倍检出限、5 倍检出限，每个浓度点3 个平行样，冷冻保存，预实验的次数可参考日常的回收率决定。

2.2 技术细节

技术细节贯穿于五大因素的各个环节，紧密相连，不分别讨论，仅从经验中总结重要细节。

2.2.1 明确作业指导书的要求

每个能力验证计划的作业指导书都有很强的指导意义，一定要仔细通读作业指导书，明确检测注意事项和结果上报的时限及要求，有疑问及时与组织单位进行沟通。例如，农业农村部畜禽产品中β-受体激动剂能力验证样品，是称好的鲜样直接进行加标，不能分取。而有的机构不熟悉制样流程，也没有仔细研读作业指导书，为了多做两次进行分取，导致结果不满意；样品不能分取，但是样品提取液可以先称取质量，按质量进行分取，开展二次试验确认；另外，药物属于外部添加，不需要酶解；标准方法是外标法定量，但是作业指导书上明确写了建议同位素内标法定量，这些要求与检测标准不一致，需按作业指导书进行。

2.2.2 标准溶液

关于标准溶液的配制，称量标准物质时一定要折算单体、纯度；标准溶液尽量不要用纯有机溶剂稀释使用，否则易挥发引起体积不准确，造成溶剂效应。此外，配标一定要双人配标，一人配标，一人监督全过程，并做好相应记录。

进行兽残能力验证时，建议使用空白基质添加标准曲线。另外，标准曲线的线性范围非常重要，最低点为检出限浓度的1/2 最为恰当，但是这个要根据仪器的灵敏度而定；浓度点不少于5 个点，相关系数尽量在0.999 以上。初次实验后根据样品浓度调整线性范围，尽量让测定浓度落在中间，内标的峰面积尽量接近中间点的峰面积，这样定量更为准确。

2.2.3 样品前处理及质控样品的设置

提前准备空白基质，设置阴性对照和阳性对照；阳性对照添加药物种类要和考核项目一致，添加浓度在未知情况下，可以按照限量使用的药物和禁用药物分别设计，进行几组不同浓度的添加量。质控样品至少包括试剂空白1 个、样品空白1 个、阳性添加3 个。根据农业农村部多年来畜禽产品中β-受体激动剂能力验证的结果统计，禁用药物添加量一般不会超过10 μg·kg-1。考核中心一般是提前一天加标，然后通知考核机构去领取样品。建议模拟考核流程，提前一天加标，第2 天解冻，与盲样同步开展实验，保持同步性。

2.2.4 避免交叉污染

整个实验的前处理过程及仪器测定过程都应该避免交叉污染，因能力验证样品均为阳性样品，前处理浓缩时，两个样品之间用空白提取溶剂清洗旋蒸仪整个管路或者氮吹仪的导气针，避免交叉污染，见图1；仪器测定时进样序列的设计如图2，必须在阳性样品间穿插试剂空白，避免污染。

图1 避免交叉污染环节图

图2 进样序列设计图

2.3 数据传递

上报数据前，明确有效数字的保留要求，按照时限要求上报。原始记录至少要求包含样品名称、样品编号、检验项目、检验依据、检验日期、环境条件、标准溶液相关信息、前处理过程、仪器相关信息（仪器型号、色谱柱、流动相、流速以及进样体积等）以及图谱等基本信息，重视原始记录的溯源性和规范性。

畜禽产品中β-受体激动剂能力验证判定依据是定性准确，回收率在70%～120%。根据日常检测水平及本次质控样的回收率，确认上报数据是否按照回收率校正。一般药物残留不建议按回收率校正，但若回收率偏低或偏高，检测过程肯定存在不容忽视的问题，不可视而不见。

3 结语

本文以猪肉中β-受体激动剂检测为例，对遇到的问题及解决方案进行归纳，对做好能力验证的流程进行总结，并明确日常实验室质量控制的重要性，而人员是重中之重。检测机构可以选择检测经验丰富、操作熟练的技术骨干成立能力验证考核小组，最大程度地保证考核结果满意。因每年考核项目不一样，所以日常检测回收率不合格的项目，要查阅相关文献，与同行多交流，保证回收率。只有充分准备、防止污染、记录严谨，才能保证能力验证满意率，提高检测能力。