红花续断膏的皮肤安全性研究

韩苗苗，李君霞，刘金磊，赵晓辉*

（1. 山东明仁福瑞达制药股份有限公司，山东 济南 250104；2. 山东古金中医药科技有限公司，山东 济南 250104）

红花续断膏为红花、续断、蜈蚣、象皮、血竭、川乌、草乌等多味中药制成的黑膏药，具有活血化瘀，续筋接骨，消肿止痛，补益肝肾之功，对骨折后愈合具有促进作用。本研究采用家兔、大鼠动物试验对红花续断膏的皮肤刺激性、皮肤过敏性进行研究，探讨其皮肤安全性，为临床用药提供理论依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器

HWL-02D全光谱灯（霍尼韦尔）。

1.2 试药

红花续断膏 （山东古金中医药科技有限公司，批号：20200818）；空白基质（由麻油、铅丹熬制而成，山东古金中医药科技有限公司）；2, 4-二硝基氯苯（DNCB，北京化工厂，批号：20200710）；硫化钠（分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司，批号：20200109）；无水乙醇（分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司，批号：20190820）；麻油（食品级，聊城市金水城油脂食品有限公司，批号：200501）。

1.3 动物

新西兰兔，普通级，雌雄各2只，共4只，2.3～2.8 kg，济南西岭角养殖繁育中心提供，许可证号：SCXK（鲁）2015 0001；健康SD大鼠，SPF级，体重200～220 g，雌雄各半，济南市朋悦实验动物繁育有限公司提供，许可证号：SCXK（鲁）20190003；饲养环境：恒温26 ℃，相对湿度60 %。

2 方法与结果

2.1 家兔皮肤刺激性实验

取新西兰家兔4只，给药前24 h对其背部脊柱两侧脱毛，面积约为5 cm×10 cm（相当于家兔体表面积的10 %），随机分组；采用同体左右侧自身对比法，每只动物左侧背部皮肤给予空白基质作为对照组，右侧背部皮肤给予供试品作为供试品组。

将膏药加热，温度适宜后，贴敷于备皮处，用纱布、胶带固定。每只动物分笼饲养。空白对照组、供试品组均给药4次，每周贴敷1次，1次贴敷7日，连续4周持续贴敷[1-3]。

实验期间每周记录动物体重情况。观察给药前，给药1，2，3周去除残留药物后1 h，以及给药4周去除残留药物后1，24，48，72 h的皮肤情况。肉眼观察皮肤在各时间点的刺激反应包括：红斑、水肿、色素沉着、出血、皮肤粗糙、皮肤菲薄，并对红斑、水肿，按表1评分。计算每一观察时间点各项分值，然后计算皮肤刺激强度分值，按表2评价刺激强度[2]。

表1 皮肤刺激反应评分标准

表2 皮肤刺激强度评价标准

实验期间动物体重稳定增长（见表3），未见明显毒副作用。在全光谱灯光下肉眼观察皮肤反应。给药前动物皮肤未见异常。给药1，2，3周去除残留药物后1 h及给药4周并去除残留药物后1，24，48，72 h，4只实验兔均未见色素沉着、出血、皮肤粗糙、皮肤菲薄；去除残留药物后1 h可见轻度红斑或水肿，症状不持久。停药24，48，72 h后，空白基质组无刺激症状，供试品组皮肤症状恢复正常。供试品刺激强度积分为0.3125，该值介于无刺激判定标准0～0.49范围，依据皮肤刺激强度评价标准，认为供试品对皮肤无刺激性，结果详见表4、表5。

表3 实验期间兔体重/kg

表4 空白对照组皮肤评分统计结果

表5 供试品组皮肤评分统计结果

2.2 大鼠皮肤刺激性实验

取30只SD大鼠，随机分为空白组、观察组（完整皮肤组和破损皮肤组）, 每组10只。3组均于实验前24 h将大鼠脊柱两侧毛用8 %硫化钠淀粉糊脱净，去毛面积约为体表面积的10 %。去毛24 h后，破损皮肤组大鼠用细砂纸在脱毛部位造成擦伤，以皮肤出现轻度密集渗血点为度。

空白组使用空白基质，供试品组局部贴敷红花续断膏，用纱布、胶带固定，贴敷7 d，7 d后用麻油擦净药物，观察药物去除后1，24，48，72 h皮肤刺激反应，查看是否出现红斑及红肿，并观察恢复情况。结果见表6。

表6 大鼠皮肤刺激反应实验评分结果

大鼠皮肤刺激反应实验结果显示，空白组、供试品组（完整皮肤组和破损皮肤组）部分大鼠皮肤在1，24，48，72 h出现红斑和水肿，刺激反应平均分值分别为0.30，0.37，0.43，0.30，表明供试品无刺激性。

2.3 大鼠皮肤过敏实验

大鼠背部采取常规脱毛处理，局部碘伏消毒，保持皮肤完整，无损伤。剃毛面积3 cm×3 cm。取符合要求的大鼠30只，随机分为空白组，DNCB组和供试品组，每组10只。各组大鼠分别用相应试药进行去毛区皮肤致敏接触和激发接触[2-6]。

取空白基质、DNCB 0.2 ml和供试品，分别涂在空白组、DNCB组和供试品组的大鼠背部左侧去毛区，用纱布、胶带固定试药留置6 h。第7，14 d各组大鼠以同样的方法重复施用实验试药。

于末次致敏接触实验试药后14 d，用与致敏接触相同的方法，分别涂在相应组别大鼠右侧去毛区，用纱布、胶带固定试药留置。6 h后用麻油擦去试药，观察并记录擦去实验试药后0，24，48，72 h各组大鼠皮肤过敏反应情况。皮肤过敏反应评分标准见表7，药物皮肤致敏性评价标准见表8，各组评分结果见表9。

表7 皮肤过敏反应评分标准

表8 皮肤致敏性评价标准

表9 大鼠皮肤过敏反应实验评分结果

结果显示空白组、供试品组及DNCB组大鼠皮肤72 h内均未出现水肿，其中空白组擦除试药48 h后，有1只大鼠皮肤出现红斑，72 h内未消失，无致敏性（致敏率为10 %）；供试品组擦除试药48 h后，有1只大鼠皮肤出现红斑，72 h内未消失，无致敏性（致敏率为10 %）；DNCB组擦除试药24 h后，有1只大鼠皮肤出现红斑，48 h后有2只大鼠皮肤出现红斑，72 h内未消失，轻度致敏（致敏率为30 %）。研究表明红花续断膏对大鼠皮肤致敏性与空白组相当，DNCB有轻度致敏性。

3 结论

研究结果显示，红花续断膏对兔皮肤无刺激性（评分＜0.49），对大鼠皮肤无刺激性（评分＜0.49）。红花续断膏对大鼠稍有致敏作用（致敏率为10 %），停药后致敏反应消失，皮肤恢复正常。研究显示红花续断膏皮肤局部用药有较好的安全性。