招远地区规模化种鸡场禽白血病流行病学调查

苏兴海

（招远市动物疫病预防控制中心 山东烟台 265400）

禽白血病（avian leukosis，AL）是养鸡业中主要的病毒性传染病之一，该病主要由不同亚群（A～E、J、K）的禽白血病病毒（avian leukosis virus，ALV）引起以多种内脏器官中多种细胞肿瘤为主要临床特征的一类病毒传染性疾病[1]。相关研究表明ALV 可以感染不同的鸡群（祖种鸡、父母代鸡、商品代鸡等），当不同的鸡群感染该病毒后可以导致机体严重的机体免疫（细胞免疫与体液免疫）抑制，导致相关疫苗免疫失败，同时导致雏鸡的生长缓慢与抑制，使其母鸡导致性成熟延迟与生殖系统器官生长不良，严重影响其种鸡的产蛋率、种蛋受精率及孵化率，严重者可以导致其死亡[2,3]。临床中ALV 没有有效疫苗免疫接种和药物预防，且在鸡群中可以通过多种传播方式进行传播，尤其是可以通过垂直传播（经卵传播）代代相传，且成为水平传播的主要来源，对养鸡业危害较高[4]。ALV被列为《国家中长期动物疫病防治规划（2012—2020 年）》中重要的净化和消除的疾病，因此，对种鸡场中ALV 进行有效的控制、净化具有重要的意义。临床中对ALV 检测方法具有很多种，如RT-PCR方法、PCR 方法、鸡胚成纤维细胞接种法、免疫荧光试验、病毒分离鉴定、酶联免疫吸附试验（EILSA）等多种方法用于其中用ALV 的临床检测，其在临床中检测最常用的、简单的方法就是EILSA 检测，EILSA 检测主要用于检测ALV p27 抗原最常见，该方法主要用于种鸡场祖代鸡、父母代及商品蛋鸡的ALV 的检测[5-7]。为了解招远地区规模化种鸡场中祖种鸡、父母代鸡及种蛋中禽白血病（ALV）携带情况及流行亚群，用EILSA 方法对采集的样品进行ALV p27抗原及亚群的检测。为地区规模化种鸡场中ALV 净化和防控提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 病料来源

2020—2022 年采集招远地区规模化种鸡场中肛拭子、血清及蛋清样品1 375 份品（表1），其中2020 年采集组织样品（肛拭子、血清、蛋清）431 份、2021 年采集组织样品（肛拭子、血清、蛋清）462份，2022 年采集组织样品（肛拭子、血清、蛋清）482 份。

表1 样品采集统计结果

1.2 病料组织的处理

将采集自招远地区规模化种鸡场中的肛拭子、血清及蛋清样品1 375 份样品进行处理，肛拭子样品用中等量的无菌PBS 进行高速离心（12 000 r/min 10 min）后取上清分装，血液用离心形式进行制备血清，蛋清样品进行分装，处理完的样品在-80 ℃低温冰箱中保存备用。

1.3 ALV p27 抗原

按照EILSA 检测ALV p27 抗原试剂盒说明书对采集自招远地区规模化种鸡场中的肛拭子、血清及蛋清样品1 375 份样品进行处理，将处理过的样品进行反复冻融3～5 次后进行ALV p27 抗原和亚群检测，并分析其感染率。

1.3 ALV 亚群检测

对采集自招远地区规模化种鸡场中的肛拭子、血清及蛋清样品1,375 份样品中ALV p27 抗原检测阳性样品，按照EILSA 检测ALV 亚群（A、B、C、D、E、J）试剂盒说明书进行ALV 亚群检测，并分析其ALV p27 抗原检测阳性样品的亚群携带情况。

2 结果

2.1 ALV p27 抗原的检测结果

对2020 年采集的组织样品（肛拭子、血清、蛋清）431 份、2021年采集的组织样品（肛拭子、血清、蛋清）462 份，2022 年采集的组织样品（肛拭子、血清、蛋清）482 份等样品进行ALV p27 抗原阳性率在不同种类样品感染情况统计，结果由表2 可知，2020—2022 年共计采集1 375 份样品，检测的阳性样品243 份，阳性率为17.8%，2020—2022 年中肛拭子、蛋清的ALV p27 抗原阳性率均高于血清的ALV p27 抗原阳性率，且呈现逐年上升的趋势。

表2 ALV p27抗原的检测结果

2.2 ALV 亚群的检测结果

对2020 年采集的组织样品（肛拭子、血清、蛋清）431 份、2021年采集的组织样品（肛拭子、血清、蛋清）462 份，2022 年采集的组织样品（肛拭子、血清、蛋清）482 份等样品进行ALV 亚群的测定，并统计在（肛拭子、血清、蛋清）样品中的分布情况。结果由表3 可知，2020—2022 年中规模化种鸡场中ALV 亚群流行情况有A/B 亚群、J 亚群2 种亚群，检测率分别为14.%、85.6%，以ALV J 亚群流行为主，2020—2022 年中肛拭子、蛋清的ALVA/B 亚群的检测率也出现升高的趋势。

表3 ALV亚群的检测结果

3 讨论

禽白血病是养鸡业中常见免疫抑制的疾病之一，该病的检测方法很多如酶联免疫吸附试验（ELISA）、RT-PCR、间接免疫荧光（IFA）等[7,8]。许多研究表明，采用ELISA 检测ALV p27 抗原是最有效的检测方法，该ELISA 法具有快捷、便于操作、敏感性高并且适用于大面积检测，因此，在种鸡群中ALV 检测与净化中广泛应用[9]。相关研究表明在我国不同的种鸡场中禽白血病病毒主要有6 种亚群（A、B、C、D、E、J）流行，其中最常见的亚群为A/B 亚群和J 亚群，但是禽白血病病毒其他的亚群也逐渐出现[10]。目前ALV 没有有效的预防与治疗的方法，主要通过检测，淘汰阳性的种鸡群，建立健康的种鸡群。相关研究表明ALV 在我国鸡场中广泛流行。李珂等[11]研究表明云南省滇东、滇西、滇中、滇南和滇北5 个区域8 个地方品种鸡群的2 295 份血清样品进行了禽白血病病毒（ALV）检测，结果表明，ALV 检出率为27.02%。邢林林等[10]报道了从山东地区采集7 个种鸡场的1 000 份蛋清，用ELISA 方法检测蛋清的ALV p27 抗原，1 298 份血清样品进行ALV-A/B 和ALV-J 亚群的携带情况的检测，结果显示，山东地区采集7 个种鸡场中的1 000 份蛋清ALV p27 抗原检测的阳性率为0.1%～1.0%之间，1 298 份血清样品中A/B 亚群阳性率为6.39%、ALV-J 亚群阳性率为19.80%。张浩等[9]报道了伊犁河谷地区不同来源黄羽父母代肉种鸡禽白血病病毒以A/B 亚群和J 亚群感染为主。本试验研究表明，2020—2021 年采集1 375 份样品中ALV 阳性率为17.8%，且肛拭子、蛋清的ALV p27 抗原阳性率均高于血清，且呈现逐年上升的趋势，说明该地区规模化种鸡场中ALV 流行严重，应该引起注意，定期进行检测，淘汰阳性鸡群，进行有效的综合防控。国内外相关研究表明，ALV 以J 亚群流行为主，本研究通过ALV 亚群的检测，该地种鸡场中ALV 的A/B 亚群、J 亚群检测率分别为14.%、85.6%，以ALV J 亚群流行为主，且ALV 的A/B 亚群的检测率呈逐年上升的趋势。因此，在以后防控注意A/B 亚群的净化。