羊腧穴Telocytes形态特征及其与周围结构的关系

2023-04-10张迎鑫杨敏白雪兵陈畅吴睿智杨平陈秋生

中国农业科学 2023年7期

张迎鑫，杨敏，白雪兵，陈畅，吴睿智，杨平，陈秋生

张迎鑫，杨敏，白雪兵，陈畅，吴睿智，杨平，陈秋生

南京农业大学动物医学院，南京 210095

【】经络是中医理论的基石，而腧穴又是经络线路上的关键节点部位，为中医针灸的实施位点。但是关于腧穴的结构基础与形态组成众说纷纭，未能科学阐明。远细胞（telocytes，TCs）是近年来发现的一种新型间质细胞，最新研究表明其可能是潜在的经络实质细胞，但腧穴处TCs的特征及其分布需要进一步阐明。【】分析腧穴和非穴皮肤结构差异，探究腧穴TCs的形态特征，解析TCs与其周围成分的结构联系，为中医针灸治疗的细胞机制研究提供理论支撑。【】选择5只成年健康湖羊为试验对象，采集百会（Du20）、曲池（LI11）、三阴交（Sp6）、膻中（Ren17）、承浆（Ren24）、耳尖（EP4）等腧穴以及背部和腹部非穴皮肤组织。使用蛋白标记物CD34和Vimentin标记TCs及其突起（telopodes, Tps）、TPS标记肥大细胞、PGP9.5标记神经、TSG101标记胞外囊泡。利用H.E染色和免疫组化技术分析皮肤腧穴和非穴处的结构和微细成分组成，并使用ImageJ和Image-Pro Plus统计软件对数据进行形态定量分析，探讨TCs及其相关结构在腧穴和非穴的分布差异。在此基础上利用透射电子显微镜、扫描电子显微镜和免疫荧光双标技术观察TCs的形态特征和立体结构特点，进一步分析TCs与这些结构之间的形态联系，从而确定腧穴的超微形态和物质基础。【】腧穴与非穴的皮肤均具有毛囊、皮脂腺、汗腺、竖毛肌等皮肤衍生物以及神经、血管、肥大细胞、胶原纤维束等结构，但腧穴处神经、血管、肥大细胞的分布数量显著多于非穴（＜0.05）。更为重要的是，在腧穴皮肤中分布着具有细长管线状突起的TCs，并且显著多于非穴（＜0.05）。作为腧穴间质的整合者，TCs之间以及TCs与各形态之间具有广泛联系（包括缝隙连接以及胞外囊泡等），形成一个结构网络体系。超微水平上观察到TCs突起的典型串珠样外观，由膨大部（podom，Pd）和细长狭窄部（podomer，P）交替排列组成。膨大部胞质中分布着发达的线粒体，加上Tps之间的细胞连接，以及TCs表面及其周围的大量胞外囊泡（显著多于非穴（＜0.05）），保证了TCs在腧穴结构中的核心作用。同时TCs与皮肤衍生物之间的结构联系，也在细胞水平上验证了《黄帝内经》中腧穴与皮肤衍生物的关系。【】腧穴与非穴的结构组成基本相同，但腧穴TCs及其Tps、胞外囊泡、神经、血管、肥大细胞等的分布数量显著多于非穴；TCs及其Tps具备联络各系统成分的形态功能，是腧穴不同结构的介导者或整合者；TCs之间的细胞连接、发达的线粒体以及胞外囊泡等具有细胞通讯和能量产生的结构基础，与中医“气血”的形态物质相对应。

腧穴；微细结构；Telocytes；胞外囊泡；羊

0 引言

【研究意义】腧穴是生物进化过程中形成的具有“健康信息密码”的体表区域，是靶器官病变牵涉性体表反应区，为针灸发挥效应的刺激点[1]。腧穴不仅可以治疗疾病，还可以辅助诊断[2-3]，但它的功能性结构一直悬而未决。【前人研究进展】多年来国内外学者在对腧穴物质基础的探讨中，主要从腧穴的组织形态、生理学、生物化学、物理学以及作用途径等方面进行试验探索，并提出了多种看法，主要以“神经传导学说”“生化体液学说”“结缔组织学说”和“肥大细胞理论”为主[4]，但是每种假说并不能完全阐释腧穴现象，它们之间有时甚至相互矛盾。所以，可能存在其他支持腧穴效应的形态基础。远细胞（telocytes，TCs）是由popescu团队发现和命名的一种新的细胞类型[5]，能在器官间质中形成支撑和联络性构架[6]。TCs可以发出2—3条极长而薄的突起，由膨大部（podom，Pd）结节和细长部（podomer，P）交替出现，形成串珠样外观[7]。由于TCs突起极其细长，微细结构在光镜下难以分辨鉴别，目前透射电镜是鉴定TCs最为准确的方法，同时，免疫组化和免疫荧光技术是鉴定TCs的常用方法。已经在鱼类、两栖类[8]、爬行动物[9]、鸟类[10]和哺乳动物[11-12]等各纲脊椎动物及人类[13]的不同器官组织中发现TCs的分布。TCs与多种生理功能和疾病发生有关[14]，在结构支持[15-16]、免疫监测[17]、调控干细胞微环境及干细胞分化[18]、促进组织血管的生成[19]、协调组织损伤的再生与修复方面发挥作用[20]。新近，研究者提出“TCs是经络潜在实质细胞”的新观点[21-22]，但TCs在腧穴处的形态特征及其与周围结构的关系有待明确。【本研究切入点】在前人研究的基础上，探究腧穴TCs的形态特征，解析TCs与其周围成分的结构联系。【拟解决的关键问题】通过HE、免疫组化、免疫荧光和电镜分析，探究TCs在腧穴和非穴皮肤筋膜中的分布特征及其与其他系统的结构关系，为中医针灸疗法的机制研究提供形态依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物

从南京青龙山养殖基地购买5只成年公湖羊，2020年5月在南京农业大学动物房解剖室完成组织采样。适应性饲养3 d后，静脉注射戊巴比妥（60 mg·kg-1）后放血处死。根据《兽医针灸学》羊穴位图谱，按图1所示，迅速采集百会（Du20）、曲池（LI11）、三阴交（Sp6）、膻中（Ren17）、承浆（Ren24）、耳尖（EP4）穴位以及背部和腹部非穴位皮肤，一部分置于4%多聚甲醛溶液用于制作石蜡切片（厚度为7 μm），另一部分固定于4℃的2.5%戊二醛溶液，用于电镜观察研究。

1.2 切片染色

切片经二甲苯脱蜡后梯度酒精下行至水，苏木精染色5 min，流水冲5 min。伊红染色40 s，上行梯度酒精脱水后二甲苯透明，中性树胶封片，DP73-Olympus显微镜观察并拍照记录。

1.3 免疫组化

二甲苯脱蜡后切片经梯度酒精下行至水；3%过氧化氢裂解12 min，蒸馏水洗3次，5 min /次；于枸橼酸钠缓冲溶液中进行抗原修复，煮沸4 min，冷却至室温后0.2 mol·L-1PBS洗3次，5 min /次；5%BSA37℃封闭40 min；滴加CD34（1﹕100，博士德）或TPS（1﹕100，proteintench）或PGP9.5（1﹕100，arigo），4℃孵育过夜；0.2 mol·L-1PBS洗5次，5 min /次，滴加二抗（兔抗或鼠抗，博士德），37℃1 h；0.2 mol·L-1PBS洗5次，5 min /次，DAB（博士德）显色5 min，蒸馏水洗3次，3 min /次；苏木精复染10 s，流水冲洗5 min，梯度酒精上行脱水，中性树胶封片，DP73-Olympus显微镜观察并拍照。

1.4 免疫荧光双标

二甲苯脱蜡后梯度酒精下行至水；枸橼酸钠缓冲溶液抗原修复，煮沸4 min，冷却至室温后0.2 mol·L-1PBS洗3次，5 min /次；5%BSA37℃封闭30 min；滴加CD34（1﹕100）、Vimentin（1﹕100，博士德）或TPS（1﹕100）、Vimentin（1﹕100）或CD34（1﹕100）、PGP9.5（1﹕100）或TSG101（1﹕100，博士德）、Vimentin（1﹕100），4℃孵育过夜；0.2 mol·L-1PBS洗5次，5 min /次，避光滴加荧光二抗（1﹕1﹕100），37℃，1 h；0.2 mol·L-1PBS滴洗5次，5 min /次；加入DAPI（博士德）4 min；0.2 mol·L-1PBS滴洗5次，5 min /次；抗荧光淬灭剂（碧云天生物技术）封片，使用DP73显微镜观察并拍照。

1.5 扫描电镜样品的制备与观察

取固定于2.5%戊二醛溶液中的皮肤组织，磷酸缓冲液清洗干净；乙醇溶液梯度脱水后用叔丁醇置换；将样品干燥后粘到样品台上；用离子溅射仪给样品镀膜，Regulus-8100扫描电镜观察。

1.6 透射电镜样品的制备与观察

2.5%戊二醛溶液固定皮肤组织，1%四氧化饿溶液后固定60 min，乙醇溶液梯度脱水，Epon812包埋。超薄切片，柠檬酸铅和醋酸铀染色20 min，Hitach-7650透射电镜观察。

1.7 数据分析

随机选取5张图片，经Adobe Photoshop CS6处理，进行形态定量分析。

选取bar值50 μm TCs免疫荧光染色图片，用ImageJ 软件测量CD34（红色）和Vimentin（绿色）共定位黄色区域面积；选取bar值50 μm神经免疫组化染色图片，使用Image-Pro Plus 软件测量PGP9.5阳性标记的棕色区域面积。选取bar值50 μm H.E染色图片，对血管断面进行计数。选取bar值20 μm TPS免疫组化图片，对阳性肥大细胞进行计数。选取bar值1 μm电镜图片，对TCs周围胞外囊泡进行计数。

用GraphPad.Prism.7.0分析数据并作图，采用普通单因素方差分析，＜0.05 为显著性差异，＜0.01 为极显著性差异，所得数据采用平均值±标准差表示。

2 结果

2.1 TCs在皮肤中分布

免疫组化、免疫荧光双标以及电镜观察的结果均显示，腧穴与非穴皮肤筋膜结缔组织中TCs及其Tps分布于淋巴管（图2-d）、血管（图3-c）、肥大细胞（图4-d）、神经（图5-d）周围，且形态联系密切。毛囊（图2-b，f）、汗腺（图2-a，e）、皮脂腺（图2-c，g）、竖毛肌（图2-c，h）等皮肤衍生物周围也有TCs及其Tps围绕。胶原纤维束形成的组织微通道（图2-d，h）内观察到TCs及其Tps。电镜下TCs具有串珠样外观，由膨大部和细长部组成，膨大部胞质中有发达的线粒体（图4-c）。钙窖大多分布于Tps膨大部表面（图4-c）。不同Tps之间可直接接触，有时可见黏着连接或缝隙连接（图6-d）。TCs及其Tps表达CD34（红色）和Vimentin（绿色）的共定位（黄色）是鉴别TCs的有效方法之一，通过形态定量黄色荧光面积，发现百会、三阴交、耳尖和膻中穴的标记面积显著大于非穴位（＜0.05），而曲池和承浆穴的标记面积极显著大于非穴位（＜0.01）（图2-j）。

Sg. 汗腺，Hf. 毛囊，Ap. 竖毛肌，Seb. 皮脂腺，Lc. 淋巴管，Cb. 胶原纤维束， Bv. 血管。 *＜0.05，**＜0.01，下同

a-d. CD34免疫组化标记TCs：a-c. 腧穴，a. 耳尖，b. 三阴交，c. 承浆，d. 非穴。e-h. 透射电镜下皮肤衍生物周围TCs，e. 膻中，f.百会，g. 耳尖，h. 非穴，△. 组织微通道。i. 耳尖穴免疫荧光双标：CD34（红色）和Vimentin（绿色）标记TCs，虚框显示放大区域。箭头所示TCs及其Tps。j. 穴位与非穴位处TCs面积比较

Sg. sweat glands, Hf. hair follicle, Ap. arrector pili muscle, Seb. sebaceous gland, Lc. lymphatic vessel, Cb. Collagen fiber bundle, Bv. blood vessel. *＜0.05, **＜0.01. The same as below

a-d. IHC staining: CD34 label TCs, a-c. acupoints, a. Erjian, b. Sanyinjiao, c. Chengjiang, d. non-acupoint. e-h. TCs around epidermal derivatives under TEM, e. Danzhong, f. Baihui, g. Erjian, h. non-acupoint, △. tissue micro-channe. i. IF staining at Eejian: anti-CD34 (red) and anti-vimentin (green) antibodies label TCs, the imaginary box represents the enlarged area. Arrows indicate TC and Tps. j. Comparison of TCs areas of acupoints and non-acupoints

图2 TCs在皮肤穴位与非穴位的分布比较

Fig. 2 Comparison of the distribution of TCs at acupoints and non-acupoints in sheep skin

2.2 TC与血管的结构关系

小血管（包括微动脉，微静脉和毛细血管）广泛分布于皮肤筋膜中（图3-a，b）。H.E切片上，计数小血管断面，发现百会和膻中穴的血管断面数量显著多于非穴（＜0.05），而三阴交、承浆、耳尖和曲池穴极显著多于非穴（＜0.01）（图3-f），而且腧穴血管常成簇分布。电镜下，TCs围绕在血管周围，并伸出细长Tps将其包裹（图4-d），形态关系密切。部分Tps折叠盘绕，有时可见两层Tps围绕血管延伸（图3-e）。TCs及其Tps在血管周围的分布也得到免疫组化和免疫荧光双标结果的验证（图3-c，d）。

a-b. 腧穴和非穴的H.E染色：a. 耳尖穴，b. 非穴，箭头所示为血管。c. 耳尖穴CD34免疫组化标记TCs：箭头所示为TCs。d. 曲池穴免疫荧光双标：CD34（红色）和Vimentin（绿色）标记TCs，箭头所示为TCs。e. 膻中穴电镜下血管周围的TCs。f. 穴位与非穴位处的血管数目比较

2.3 TCs与肥大细胞的关系

类胰蛋白酶（TPS）特异标记肥大细胞。阳性细胞呈圆形或椭圆形，主要分布在血管附近（图4-a，b）。对阳性标记细胞计数后发现，三阴交、耳尖和膻中穴肥大细胞数显著多于非穴（＜0.05），而曲池、百会和承浆穴极显著多于非穴（＜0.01）（图4-f）。电镜和免疫荧光双标的结果进一步显示，肥大细胞周围有丰富的TCs分布，部分肥大细胞与TCs及其Tps直接接触（图4-c—e），并且在TCs膨大部观察到发达的线粒体和钙窖结构（图4-c）。

2.4 TCs与神经的结构关系

蛋白基因产物9.5（PGP9.5）是神经的一种特异性泛素羟基水解酶，可以与无髓神经和有髓神经相结合，为神经的标记物。PGP9.5免疫组化阳性反应物分布于皮肤（图5-a—b）。阳性神经的分布面积在曲池、膻中和百会穴显著大于非穴（＜0.05），三阴交、耳尖和承浆穴的极显著大于非穴（＜0.01）（图5-f）。CD34免疫组化结果显示神经束周围有TCs分布（图5-c）。而电镜和免疫荧光双标结果进一步显示，神经束内、外均有TCs及其Tps分布（图5-d—e），部分TCs与神经纤维接触或者将其包裹，有时TCs直接进入神经束内（图5-d）。

a-b．腧穴和非穴的PGP 9.5免疫组化反应结果，a. 膻中穴，b. 非穴。c. 百会穴CD34免疫组化标记TCs，Nb.神经束。d. 曲池穴电镜下神经束内、外的TCs，Mf. 有髓神经，Umf. 无髓神经，Nm. 神经膜。e.耳尖穴免疫荧光双标：CD34（红）和PGP9.5（绿）标记TCs和神经。箭头所示TCs。f. 穴位和非穴处的神经面积比较

2.5 TCs与胞外囊泡的关系

TSG101为胞外囊泡标记物，将TSG101（标记胞外囊泡）与Vimentin（标记TCs）进行免疫荧光双标，可用于研究胞外囊泡与TCs的形态关系（图6-a—c）。荧光双标和透射电镜结果显示，胞外囊泡分布于TCs及其Tps周围或表面（图6-a，b，d），胶原纤维束周围也可见胞外囊泡（图6-c）。透射电镜下对TCs周围的胞外囊泡进行计数，发现曲池、耳尖和膻中穴显著多于非穴（＜0.05），而百会穴和承浆穴极显著多于非穴（＜0.01）（图6-e）。根据囊泡大小，有些应为外泌体（30—150 nm）（图6-d）。

a-c. 膻中穴免疫荧光双标：Vimentin（红）和TSG101（绿）标记TCs和胞外囊泡，箭头所示胞外囊泡。d. 膻中穴电镜下TCs周围胞外囊泡（蓝色区域），波浪箭头所示缝隙连接。e. 穴位和非穴处的胞外囊泡数目比较

2.6 皮肤TCs的立体结构特点

扫描电镜下，TCs的胞体呈椭圆形、扁平形或梨形（图7-a—c）。TCs伸出细长的Tps在胶原纤维表面或胶原纤维束之间的间隙通道中形成网状，可见淋巴细胞分布于Tps表面（图7-b，d），可能沿着Tps运动。在Tps和胶原纤维束表面发现许多胞外囊泡（图7-a—d），这与荧光双标和透射电镜结果（图6）相一致。

3 讨论

腧穴是经络气血输注、出入体表的特定部位，与经络、脏腑、气血的活动有密切关系。腧穴可以反映脏腑经络的生理功能和病理变化，并可接受外界的各种刺激并将其传至体内，以调整内部功能[23]。为什么针刺腧穴会产生效果？要回答这个问题就必然涉及到腧穴和非穴的结构组成差异。而且阐明腧穴的形态特点也有助于揭示中医治疗的内在机制。所以，这方面研究受到国内外众多学者重视，也先后提出各种观点[24]。但由于试验本身存在缺陷或证据不足，腧穴的物质基础与细胞形态尚未有明确定论[25]，造成了传统医学一直未被现代医学所接受的现实。

a-b. 百会，c-d. 非穴，Tp. 突起，Pd. 膨大部，P. 细长部，箭头所示胞外囊泡

3.1 腧穴与非穴结构组成的异同与形态学意义

本试验利用不同的试验方法，观测了羊腧穴与非穴形态组成及其差异。腧穴与非穴的结构成分基本相同，均主要包括血管、肥大细胞、神经、皮肤衍生物和胶原纤维束等，这也得到前人研究结果的验证[26]。这一特点也支持了李永明等[27-28]提出的泛穴现象，即人体无处不是穴，针刺皮肤腧穴和非穴，都会产生生物学效应，这暗示腧穴与非穴皮肤组织的结构成分基本相似。但这些试验结果只是组织水平上的描述，电镜下的超微结构如何，有待进一步细胞学分析。

越来越多的学者认为，经络现象是人体内各种生命物质之间互相作用复杂活动的综合反映，不是某种组织的单一功能，是神经、血管、肥大细胞、皮肤衍生物等以及未知元素共同构成的复合功能系统[24]。表明，可能存在一种细胞或结构（未知元素）能够联系这些不同结构成分，并使其成为网络。本研究首次发现TCs分布于腧穴，而且利用超微电镜技术观测到其细长突起（Tps）与神经、血管、肥大细胞、以及皮肤衍生物联系密切，分布于它们周围或表面，可以介导这些结构构成形态网络，所以，具备调节腧穴各种结构系统的细胞学基础。本试验进一步的形态定量分析发现，虽然非穴也有TCs、神经、血管、肥大细胞等，但腧穴TCs和其他相关结构成分显著多于非穴。表明，虽然腧穴与非穴的结构组成基本相同，但腧穴的各成分的含量差异明显，这可能就是腧穴特异性和敏感性的形态基础。更为重要的是，腧穴TCs能够联络和整合不同结构系统（尤其是神经、血管循环和肥大细胞），应该是腧穴结构的核心成分。以TCs为核心的这种广泛联系性，也是中医“整体观”的细胞机制。

3.2 TCs具备腧穴“气-血”物质基础的细胞学证据

通过免疫荧光双标记技术，观察到腧穴TCs周围存在大量胞外囊泡（包括外泌体），有些胞外囊泡甚至直接位于TCs及其Tps表面。这些结构特点也得到电镜超微结构研究的支持。进一步发现曲池、耳尖和膻中穴胞外囊泡与非穴相比差异显著（＜0.05），而百会穴和承浆穴与非穴相比差异极显著（＜0.01），表明TCs在腧穴与非穴的胞外囊泡具有量的差异。有资料报道认为，TCs不仅与胞外囊泡关系密切，其本身也可以分泌胞外囊泡[29]。TCs被视为细胞间交流的位点[30]，能够通过同型连接、异型连接或以旁分泌的形式释放胞外囊泡（尤其是外泌体）参与细胞间信息交流[31]。胞外囊泡及其外泌体能携带脂质、蛋白质以及核酸等信息物质[32-33]，可作为机体第三种信息通讯方式，即TCs通过引导胞外囊泡的定向转运来与周围组织进行信息交流，调节局部微环境。这也得到最近的一项研究证实，TCs释放的外泌体miRNA进入附近的毛细血管，发挥内分泌作用，从而抑制微血管内皮细胞凋亡[34]。与此同时，Tps膨大的结节中存在许多发达线粒体，而线粒体是能量细胞器。这些线粒体再加上胞外囊泡, 就可成为中医“气血”的物质体现，因为“气血”实际对应于现代生物医学的能量与信息[22]。

3.3 TCs与腧穴处皮肤衍生物的关系

《黄帝内经》中提到“是故虚邪之中人也，始于皮肤，皮肤缓则腠理开，开则邪从毛发入，入则抵深，深则毛发立……”，表明腧穴与毛囊等皮肤衍生物有密切联系。刘里远等[35]也认为腧穴的实质形态学基础与皮肤衍生物相关，提出毛囊、立毛肌是腧穴的动力靶器官，立毛肌的收缩为针刺信号的长距离传递提供了动力。本试验观察到羊的毛囊、汗腺、皮脂腺、竖毛肌等皮肤衍生物周围均有TCs及其Tps围绕，TCs网络分布在皮肤衍生物之间，网络中分布着血管、肥大细胞和神经等结构。TCs通过细长Tps和释放胞外囊泡来将皮肤衍生物与这些结构联系到一起，参与不同信息的处理和组织稳态的协调以响应各种功能需求，并且TCs发达的线粒体能够为针刺信号长距离传递提供动力。

4 结论

羊腧穴和非穴的结构组成基本相似，但腧穴TCs、神经、血管、肥大细胞和胞外囊泡显著多于非穴，推测是腧穴特异性和敏感性的细胞基础；首次发现的腧穴TCs与其他结构系统（神经、血管、肥大细胞和胞外囊泡等）的联系，是腧穴形态网络的核心，能够在组织水平上诠释中医治疗的“整体观”理念；丰富的胞外囊泡（包括外泌体）及其与具有发达线粒体的TCs的关系，切合经穴“气血”内涵所指的信息和能量特点。

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Morphological Characteristics of Telocytes at Sheep Acupoints and Its Relationship with Surrounding Structures

ZHANG YingXin, YANG Min, BAI XueBing, CHEN Chang, WU RuiZhi, YANG Ping, CHEN QiuSheng

College of Veterinary Medicine, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095

【】 Meridian theory is the cornerstone of Traditional Chinese Medicine (TCM), and acupoints are the key sites on the meridian, which are the implementation location of the acupuncture. However, there are different opinions on the structural basis and morphological composition of acupoints,which cannot be scientifically clarified. As a newly found type of interstitial cells, Telocytes (TCs) were suggested to be the potential essence cells of the meridian by morphological study recently, but the characteristics and distribution of TCs at acupoints need to be further elucidated. 【】 This study aimed to analyze the structural differences between acupoints and non-acupoints, and to explore the morphological characteristics of TCs at acupoints. The structural relations between TCs and its surrounding components were also analyzed, so as to provide theoretical support for the study of the cellular mechanism of TCM acupuncture treatment. 【】 The skin tissues of Baihui (Du20), Quchi (LI11), Sanyinjiao (Sp6), Danzhong (Ren17), Chengjiang (Ren24), Erjian (EP4) and non-acupoints on the back and abdomen were collected from five adult healthy Hu sheep. TCs and Tps (telopodes) were stained by specific markers CD34 and Vimentin, the mast cells were labeled by TPS, and nerves were identified by PGP9.5. Extracellular vesicles were marked by TSG101. The structure and fine composition of skin acupoints and non-acupoints were analyzed by H.E and immunohistochemical techniques (IHC), and the morphological quantitative analysis of the data was carried out by using ImageJ and Image-Pro Plus statistical software. The distribution differences of TCs and its related structures at acupoints and non-acupoints were analyzed. On this basis, the morphological characteristics and stereoscopic structure of TCs were observed by transmission electron microscope (TEM), scanning electron microscope (SEM) and immunofluorescence (IF) double labeling technique, and the morphological relationship between TCs and these structures was further analyzed, thus determining the ultramorphology and material basis of acupoints.【】 There were such structures as hair follicles, sebaceous glands, sweat glands and arrector pili muscle, as well as nerves, blood vessels, mast cells, collagen fiber bundles at the acupoints and non-acupoints. However, the number of nerves, blood vessels and mast cells distribution at acupoints was significantly more than that at non-acupoints (＜0.05). More importantly, TCs with slender tubular processes (telopodes, Tps) were distributed in the skins, and the distribution of TCs at the acupoints was significantly different from that of non-acupoints (＜0.05).TCs could be used as the integrator of acupoints stroma. There were extensive relationships between TCs themselves or TCs and surrounding morphological structures (including gap junctions and extracellular vesicles, etc.), which could develop a structural network system.At the ultramicro level, it was observed that the Tps was a typical beaded appearance, which was composed of alternating arrangement of the inflated part (podom, Pd) and the slender stenotic part (podomer, P).The well-developed mitochondria in the cytoplasm of podom, the cellular connection between Tps and Tps, and a large number of extracellular vesicles on or around TCs (significantly more than non-acupoints (＜0.05)) ensured the core role of TCs in the structure of acupoints.Moreover, the structural connection between TCs and epidermal derivatives also verified the relationship between acupoints and epidermal derivatives in the classic book() at the cellular level. 【】Structural compositions at the acupoints and non-acupoints were basically the same, while the number of TCs and Tps, nerves, blood vessels, mast cells, extracellular vesicles at acupoints was significantly more than that at non-acupoints; TCs and Tps had the functional structures of connecting and integrating various morphological components, which might be mediators or integrators of different systems at the acupoints. The cell connections among TCs, developed mitochondria and extracellular vesicles had the structural basis for cell communication and energy generation, which corresponds to the “Qi-Xue” in TCM.

acupoints; microstructure; telocytes; extracellular vesicles; sheep