一株禽流感（H9 亚型）病毒细胞毒与鸡胚毒的免疫效力对比试验

2023-03-31郭林涛闫红涛

北方牧业 2023年2期

郭林涛，闫红涛

（河北省馆陶县农业农村局，河北邯郸 056000）

为了解禽流感（H9 亚型）病毒鸡胚毒接种获得的细胞毒抗原与鸡胚毒抗原免疫效力的差异，本试验分别采用禽流感（H9 亚型）病毒HA效价≥1∶256 或病毒含量≥107.5EID50/0.1 毫升的细胞毒抗原和禽流感（H9 亚型）病毒鸡胚毒抗原制备成两批灭活疫苗，分别免疫SPF 鸡，进行免疫效力比较试验。对比试验结果显示，禽流感（H9 亚型）病毒细胞毒灭活疫苗与禽流感（H9 亚型）病毒鸡胚毒灭活疫苗免疫SPF 鸡后HI 抗体效价均高于鸡新城疫、禽流感（H9 亚型）二联灭活疫苗禽流感部分质量标准，且两者免疫效力无显著差异。禽流感（H9 亚型）病毒细胞毒与禽流感（H9 亚型）病毒鸡胚毒的免疫效力对比试验证明了，禽流感（H9 亚型）病毒鸡胚毒接种MDCK 细胞繁殖的细胞毒，没有改变毒株本身的特性，保持了毒株较好的免疫原性，能够用于本制品的研究；禽流感（H9 亚型）病毒HA 效价≥1∶256 或病毒含量≥107.5EID50/0.1 毫升的细胞毒，制备的灭活疫苗均合格。

1 材料

1.1 制苗用种毒、细胞

1.1.1 种毒

禽流感（H9 亚型）病毒鸡胚毒，E5 和E7 代，由河北农业大学繁殖传代。

1.1.2 生产种毒

禽流感（H9 亚型）病毒鸡胚毒。

1.1.3 生产种细胞

全悬浮MDCK 细胞由河北农业大学实验室制备。

1.2 主要试剂

1.2.1 诊断试剂

禽流感病毒H9 亚型血凝抑制试验抗原及禽流感病毒H9 亚型阳性血清，来源于哈尔滨维科生物技术开发公司。

1.2.2 MDCK 全悬浮无血清培养基

MS01 无血清培养基来源于苏州沃美生物技术有限公司，产品批号41241701。

1.2.3 制苗用油相

来源于河南通商进出口有限公司，批号：701195。

1.3 试验动物

SPF 鸡胚和SPF 鸡均来源于北京勃林格殷格翰维通生物技术有限公司。

1.4 高剪切分散乳化机

型号：FA25；生产厂家：上海弗鲁克科技发展有限公司。

2 方法

2.1 疫苗的配制

2.1.1 细胞毒灭活疫苗制备

使用禽流感（H9 亚型）病毒E5 和E7 代鸡胚毒，接种MDCK 细胞，繁殖得到2 批禽流感（H9 亚型）病毒细胞病毒液，HA 效价均为1∶256，病毒含量分别为107.68EID50/0.1 毫升、107.5EID50/0.1 毫升。两批细胞毒抗原灭活后，按照油相∶水相=2∶1 的比例，分别配制成两批灭活疫苗。

2.1.2 鸡胚毒灭活疫苗的制备

使用禽流感（H9 亚型）病毒E5 和E7 代鸡胚毒，接种SPF 鸡胚，繁殖得到禽流感（H9 亚型）病毒鸡胚毒，HA 效价均为1∶256，病毒含量分别为108.5EID50/0.1 毫升、108.68EID50/0.1 毫升。两批鸡胚毒抗原灭活后，按照油相∶水相=2∶1 的比例，分别配制成两批灭活疫苗。

2.2 分组与免疫

使用45 只鸡，四组疫苗分别免疫10 只，每只鸡颈部皮下注射疫苗0.3 毫升。另5 只SPF鸡，不接种作为对照，同等条件下隔离饲养。免疫21 日后。连同对照鸡5 只分别采血，分离血清，按现行《中国兽药典》三部附录3404 测定各组血清HI 抗体效价。

3 结果

3.1 将HA 血凝价均为1∶256 的两批禽流感（H9 亚型）病毒细胞毒配制疫苗，免疫SPF 鸡产生的HI 平均抗体滴度分别为1∶588 （9.2log2）和1∶676（9.4log2）。因此，免疫后鸡新城疫HI 抗体水平远高于鸡新城疫、禽流感（H9 亚型）二联灭活疫苗禽流感部分质量标准要求（HI 不低于1∶64）。不免疫对照组HI 抗体均不高于1∶4 （见表）。

3.2 将HA 血凝价均为1∶256 的禽流感（H9亚型）病毒鸡胚毒配制疫苗，免疫SPF 鸡产生的HI 平均抗体效价分别达到1∶724（9.5log2）和1∶832（9.7log2）；因此，免疫后抗体水平远高于鸡新城疫、禽流感（H9 亚型）二联灭活疫苗禽流感部分质量标准要求（HI 不低于1∶64）。不免疫对照组HI 抗体均不高于1∶4（见下表）。

通过对比试验，表明禽流感（H9 亚型）病毒细胞毒HA 效价1∶256 或病毒含量为107.5EID50/0.1 毫升，均可达到鸡新城疫、禽流感（H9 亚型）二联灭活疫苗制苗的标准。两批细胞毒配制的疫苗，免疫SPF 鸡后，抗体效价与两批鸡胚毒配制的疫苗效力相当，且四组疫苗免疫SPF 鸡后抗体效价均远高于鸡新城疫、禽流感（H9 亚型）二联灭活疫苗禽流感部分质量标准。因此，禽流感（H9 亚型）病毒细胞毒HA 效价1∶256 或病毒含量为107.5EID50/0.1 毫升均可用于制苗。

4 结论

综上所述，通过禽流感（H9 亚型）病毒细胞源与鸡胚源病毒液的免疫效力对比试验，禽流感细胞源灭活疫苗接种SPF 鸡可以获得与禽流感鸡胚源病毒灭活疫苗相近的抗体效价，两者具有相同的免疫效力。禽流感（H9 亚型）病毒细胞毒与鸡胚毒的免疫效力对比试验证明了，禽流感病毒鸡胚接种MDCK 细胞，制备的细胞毒，没有改变毒株本身的特性，保持了毒株较好的免疫原性，能够用于本制品的研究；禽流感（H9亚型）病毒HA 效价不低于1∶256 或病毒含量≥107.5EID50/0.1 毫升的细胞毒，制备的灭活疫苗均合格。