口服不同复方中药多糖对口蹄疫疫苗免疫反应的影响

李文娟，何先林，赵婵娟，鄢行安，陈亚强，何航，向邦全，廖勤丰

（重庆三峡职业学院动物科技学院 重庆 404155）

口蹄疫（foot and mouth disease，FMD）是由口蹄疫病毒感染引起的一种急性、热性、接触性传染病，主要危害偶蹄兽，常在猪群中发生大范围流行，口蹄疫大流行均会对畜牧业造成严重的经济损失[1]。目前，接种疫苗是控制口蹄疫流行最有效的方法，我国采用强制免疫口蹄疫疫苗的方式对该病进行控制。但是，多种原因造成口蹄疫疫苗的临床免疫效果并不理想，急需开发增强疫苗免疫效果的药物。诸多研究报道表明，药用植物多糖具有免疫增强功能，对机体的特异性和非特异性免疫均有显著的增强作用，因多糖易于提取纯化，且无毒副作用、使用安全等特点，已成为疫苗佐剂研究的一个热点[2-4]。本试验通过3 组复方多糖配合O 型口蹄疫疫苗免疫小鼠，通过测定FMDV 特异性IgG 水平，和细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-6、TNF-α 水平观察这3 种复方多糖对口蹄疫疫苗免疫反应的影响，旨在为开发复方多糖类免疫增强剂提供技术资料。

1 材料

1.1 试验动物

4～7 周龄健康ICR 小鼠36 只，体重18～22g，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，在动物房饲养1 周后，无异常即可进行试验。

1.2 主要药物及试剂

黄芪多糖、白术多糖、党参多糖、淫羊藿多糖、山药多糖，何首乌多糖，购于西安雅图生物科技有限公司；猪口蹄疫O 型灭活疫苗购自中牧实业股份有限公司；小鼠特异性抗体IgG 及IFN-γ、IL-2、IL-6、FMDV-O IgG、TNF-α ELISA 检测试剂盒，均购自厦门慧嘉生物科技有限公司。

2 方法

2.1 试验动物分组及免疫

将小鼠随机分成4 组，分别为疫苗（FMDV）组、疫苗+黄芪多糖+白术多糖（APS+PAMK+FMDV）组，疫苗+党参多糖+山药多糖（PPS+RDP+FMDV）组，疫苗+淫羊藿多糖+何首乌多糖（EPS+PPM+FMDV）组、每组9 只小鼠。按表1 进行处理.试验用多糖溶于去离子水中，灌胃给药，体积0.20mL/只；疫苗采用腹股沟皮下注射，2 次免疫后14d 检测小鼠免疫反应的水平。

表1 动物试验分组及免疫方法表

2.2 血液采集及免疫因子检测

第二次免疫后14d，小鼠眼眶采血，分离血清，通过ELISA 检测FMDV 特异性IgG、IFN-γ、IL-2、IL-6、TNF-α 水平。

2.5 数据统计分析

使用SPSS 22.0 软件对试验结果进行单因素方差分析，P＜0.05表示差异显著，P＜0.01 表示差异极显著。

3 结果与分析

3.1 不同复方多糖对受免小鼠血清IgG 含量的影响

由图1 可知，（APS+PAMK+FMDV）组和（CPPS+RDP+FMDV）组IgG 含量显著高于FMDV 组（P＜0.05），（APS+PAMK+FMDV）组IgG含量显著高于（CPPS+RDP+FMDV）组（P＜0.05）；（EPS+PPM+FMDV）组IgG 含量与FMDV 组比较差异不显著；说明(APS+PAMK）和（PPS+RDP）复方多糖均能有效提高手面小鼠血清IgG 含量。

图1 复方多糖对血清中IgG 抗体水平的影响

3.2 不同复方多糖对受免小鼠血清IL-2、IL-6、TNF-α及IFN-γ 含量的影响

由图2 可知，（APS+PAMK+FMDV）组和（CPPS+RDP+FMDV）组及（EPS+PPM+FMDV）组小鼠血清中IL-2、IL-6、TNF-α 的含量显著高于FMDV 组（P＜0.05），（APS+PAMK+FMDV）组小鼠血清中IL-2、IL-6、TNF-α 的水平显著高于其他复方多糖组（P＜0.05）；(APS+PAMK+FMDV）组和（EPS+PPM+FMDV）组小鼠血清中IFN-γ水平显著高于FMDV 组（P＜0.05）；（CPPS+RDP+FMDV）组较FMDV组小鼠血清中IFN-γ 水平差异不显著；说明(APS+PAMK）、（PPS+RDP）和（EPS+PPM）复方多糖不同程度的提高受免小鼠血清中IL-2、IL-6、TNF-α 及IFN-γ 含量的含量，其中（APS+PAMK）复方多糖效果最佳。

图2 复方多糖对血清中IL-2、IL-6、TNF-α 及IFN-γ 含量的影响

4 讨论

多糖又称多聚糖，是由醛糖或酮糖通过糖苷键连接起来的高聚物，分子量为数万至数百万。多糖是生物体内普遍存在的生物大分子，免疫调节是其最重要和最主要的生物活性作用[5,6]。近年来，活性多糖生物功能的报道主要包括免疫功能、抗病毒、抗菌、抗寄生虫、抗肿瘤、抗炎、抗衰老、抗辐射、降低血脂及改善动物生产性能等一系列作用[7]。

中药多糖，作为佐剂很好地提高了某些疫苗的免疫效果；作为生物效应调节剂，不仅促进多种免疫细胞的增殖与分化，还促进细胞因子的生成。在免疫应答过程中，细胞因子对于细胞间相互作用也有重要的调节功能[8,9]。本试验通过口服3 种复方多糖配合FMDV疫苗免疫小鼠，研究其对FMDV 疫苗免疫反应的影响。结果表明，受试的3 种复方多糖均能不同程度地提高小鼠血清中的特异性IgG 水平；显著增强小鼠血清中IL-2、IL-6、IFN-γ 和TNF-α 的水平，表明受试的3 种复方中药多糖能够不同程度增强疫苗的免疫反应，但这4 种多糖增强免疫反应的具体机理尚需要进一步证实。■