口服不同复方中药多糖对口蹄疫疫苗免疫反应的影响
2023-03-16李文娟何先林赵婵娟鄢行安陈亚强何航向邦全廖勤丰
李文娟,何先林,赵婵娟,鄢行安,陈亚强,何航,向邦全,廖勤丰
(重庆三峡职业学院动物科技学院 重庆 404155)
口蹄疫(foot and mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒感染引起的一种急性、热性、接触性传染病,主要危害偶蹄兽,常在猪群中发生大范围流行,口蹄疫大流行均会对畜牧业造成严重的经济损失[1]。目前,接种疫苗是控制口蹄疫流行最有效的方法,我国采用强制免疫口蹄疫疫苗的方式对该病进行控制。但是,多种原因造成口蹄疫疫苗的临床免疫效果并不理想,急需开发增强疫苗免疫效果的药物。诸多研究报道表明,药用植物多糖具有免疫增强功能,对机体的特异性和非特异性免疫均有显著的增强作用,因多糖易于提取纯化,且无毒副作用、使用安全等特点,已成为疫苗佐剂研究的一个热点[2-4]。本试验通过3 组复方多糖配合O 型口蹄疫疫苗免疫小鼠,通过测定FMDV 特异性IgG 水平,和细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-6、TNF-α 水平观察这3 种复方多糖对口蹄疫疫苗免疫反应的影响,旨在为开发复方多糖类免疫增强剂提供技术资料。
1 材料
1.1 试验动物
4~7 周龄健康ICR 小鼠36 只,体重18~22g,购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司,在动物房饲养1 周后,无异常即可进行试验。
1.2 主要药物及试剂
黄芪多糖、白术多糖、党参多糖、淫羊藿多糖、山药多糖,何首乌多糖,购于西安雅图生物科技有限公司;猪口蹄疫O 型灭活疫苗购自中牧实业股份有限公司;小鼠特异性抗体IgG 及IFN-γ、IL-2、IL-6、FMDV-O IgG、TNF-α ELISA 检测试剂盒,均购自厦门慧嘉生物科技有限公司。
2 方法
2.1 试验动物分组及免疫
将小鼠随机分成4 组,分别为疫苗(FMDV)组、疫苗+黄芪多糖+白术多糖(APS+PAMK+FMDV)组,疫苗+党参多糖+山药多糖(PPS+RDP+FMDV)组,疫苗+淫羊藿多糖+何首乌多糖(EPS+PPM+FMDV)组、每组9 只小鼠。按表1 进行处理.试验用多糖溶于去离子水中,灌胃给药,体积0.20mL/只;疫苗采用腹股沟皮下注射,2 次免疫后14d 检测小鼠免疫反应的水平。
表1 动物试验分组及免疫方法表
2.2 血液采集及免疫因子检测
第二次免疫后14d,小鼠眼眶采血,分离血清,通过ELISA 检测FMDV 特异性IgG、IFN-γ、IL-2、IL-6、TNF-α 水平。
2.5 数据统计分析
使用SPSS 22.0 软件对试验结果进行单因素方差分析,P<0.05表示差异显著,P<0.01 表示差异极显著。
3 结果与分析
3.1 不同复方多糖对受免小鼠血清IgG 含量的影响
由图1 可知,(APS+PAMK+FMDV)组和(CPPS+RDP+FMDV)组IgG 含量显著高于FMDV 组(P<0.05),(APS+PAMK+FMDV)组IgG含量显著高于(CPPS+RDP+FMDV)组(P<0.05);(EPS+PPM+FMDV)组IgG 含量与FMDV 组比较差异不显著;说明(APS+PAMK)和(PPS+RDP)复方多糖均能有效提高手面小鼠血清IgG 含量。
图1 复方多糖对血清中IgG 抗体水平的影响
3.2 不同复方多糖对受免小鼠血清IL-2、IL-6、TNF-α及IFN-γ 含量的影响
由图2 可知,(APS+PAMK+FMDV)组和(CPPS+RDP+FMDV)组及(EPS+PPM+FMDV)组小鼠血清中IL-2、IL-6、TNF-α 的含量显著高于FMDV 组(P<0.05),(APS+PAMK+FMDV)组小鼠血清中IL-2、IL-6、TNF-α 的水平显著高于其他复方多糖组(P<0.05);(APS+PAMK+FMDV)组和(EPS+PPM+FMDV)组小鼠血清中IFN-γ水平显著高于FMDV 组(P<0.05);(CPPS+RDP+FMDV)组较FMDV组小鼠血清中IFN-γ 水平差异不显著;说明(APS+PAMK)、(PPS+RDP)和(EPS+PPM)复方多糖不同程度的提高受免小鼠血清中IL-2、IL-6、TNF-α 及IFN-γ 含量的含量,其中(APS+PAMK)复方多糖效果最佳。
图2 复方多糖对血清中IL-2、IL-6、TNF-α 及IFN-γ 含量的影响
4 讨论
多糖又称多聚糖,是由醛糖或酮糖通过糖苷键连接起来的高聚物,分子量为数万至数百万。多糖是生物体内普遍存在的生物大分子,免疫调节是其最重要和最主要的生物活性作用[5,6]。近年来,活性多糖生物功能的报道主要包括免疫功能、抗病毒、抗菌、抗寄生虫、抗肿瘤、抗炎、抗衰老、抗辐射、降低血脂及改善动物生产性能等一系列作用[7]。
中药多糖,作为佐剂很好地提高了某些疫苗的免疫效果;作为生物效应调节剂,不仅促进多种免疫细胞的增殖与分化,还促进细胞因子的生成。在免疫应答过程中,细胞因子对于细胞间相互作用也有重要的调节功能[8,9]。本试验通过口服3 种复方多糖配合FMDV疫苗免疫小鼠,研究其对FMDV 疫苗免疫反应的影响。结果表明,受试的3 种复方多糖均能不同程度地提高小鼠血清中的特异性IgG 水平;显著增强小鼠血清中IL-2、IL-6、IFN-γ 和TNF-α 的水平,表明受试的3 种复方中药多糖能够不同程度增强疫苗的免疫反应,但这4 种多糖增强免疫反应的具体机理尚需要进一步证实。■