胶体金农残快速检测技术应用初探

陆萍 顾心悦 仇婷婷 石国忠 林丽 房旖旎 蒋丽君

（1上海市松江区农产品质量安全中心，上海 201600；2上海市松江区新浜镇农业农村服务中心，上海 201605）

农残快速检测技术是排查产地和流通环节农产品安全隐患的一种重要手段，在村镇基层检测部门落实属地化农产品质量安全监管中发挥了重要作用[1]。目前，蔬菜农残快速检测方法基本按照《G B/T 5009.199-2003蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测》执行,其中，酶抑制法所能检测的项目仅局限于有机磷农药和氨基甲酸酯类农药，因此，检测项目的局限性、检测设备的精确性等问题已成为目前蔬菜农残快速检测中亟待解决的难题。胶体金是一种常用的标记技术，是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型免疫标记技术，近年来已在生物学、临床医学等领域中得到了广泛使用。胶体金农残快速检测的技术是一种操作简单的农残快速检测方法，其检测结果与色谱仪检测结果一致或相近似。为加快胶体金农残快速检测技术的推广应用，现将其技术原理以及在实验中的应用结果介绍如下，以期进一步提升蔬菜农残速测技术能力和实验室综合检测水平。

1 胶体金农残快速检测的技术原理

胶体金农残快速检测技术是综合胶体化学、有机合成化学、免疫学、物理学和材料学等，实现复杂的原理与简单的操作相统一。以啶虫脒农药的胶体金快速检测为例，采用了抗原抗体的特异性反应以及侧向层析和胶体金技术进行样本中啶虫脒分子的快速定性检测[2]。样本中啶虫脒残留农药在流动过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体相结合，抑制了抗体和NC膜检测线（T线）上的啶虫脒—BSA偶联物的结合，从而产生检测线颜色的变化。通过检测线与质控线（C）颜色深浅比较，从而实现对检测样品中啶虫脒残留情况的定性检测，见图1。

图1 样品待测液加入胶体金检测卡结果显示

结果判断：（1）阴性（一）：T线（检测线，靠近加样孔一端）显色比C线（对照线）深或一样深，表明样品中啶虫脒农药残留浓度低于检测限量值或无啶虫脒农药残留。（2）阳性（+）：T线显色比C线浅，表明样品中啶虫脒农药残留浓度高于检测限量值，且T线越浅表明样品中啶虫脒农药残留浓度越高。（3）无效：质控区（C）未出现紫红色条带，表明操作过程不正确或检测卡已变质损坏，在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的检测卡重新测试。

2 胶体金农残快速检测技术在实验中的应用

根据上海市农产品质量安全监管工作实施要求，对一些常规农药指标进行重点筛查，现以啶虫脒农药为例，开展免疫胶体金检测卡的操作实验应用[3]，以切实提高检测的靶向性和精准性。

2.1 仪器和试剂材料

上海瑞鑫科技仪器有限公司生产的C N Y-1218D多功能农药残留速测仪，电子天平，啶虫脒免疫胶体金检测卡，专用稀释液，移液枪，50 mL离心管，1.5 mL离心管，一次性滴管等。

2.2 样品前处理

选择有代表性的新鲜样品（若是采用冷藏样品，检测前需恢复至室温），从不同叶片或不同部位取样，剪碎成1 cm左右见方的碎片，称取2 g碎片样品于50 mL离心管中，加入5 mL专用稀释液，手动颠倒混匀（振幅50次/min），充分清洗样品2 min，静置1 min，得到样品待测液。

2.3 检测卡检测

从包装袋中取出免疫胶体金检测卡和一次性滴管。用滴管吸取3滴（约100 ul）待测液滴入样孔中，加样后开始计时，5～8 min后读取检测结果（其他时间检测的结果则判读无效），读取检测结果时，检测卡宜水平放置于观察者的正面，切勿将检测卡倒置。

2.4 上机测定

进入CNY-1218D多功能农药残留速测仪主页面，点击胶体金软件，在用户设置页面输入生产单位、样品名称、检验员等信息；点击检测界面，将2.3中的检测卡插入卡槽，启动检测，查看检测结果。

2.5 胶体金农残快检技术应用

2.5.1 添加啶虫脒农药检测实验

在空白对照胶体金检测结果为阴性的条件下，以啶虫脒为例进行农药添加实验，在50 uL 20%啶虫脒可溶液剂中加10 mL提取液，混匀作待测液，从包装袋中取出免疫胶体金检测卡和一次性滴管，用滴管吸取3滴（约100 uL）待测液滴入样孔中，加样后开始计时，5～8 min后读取检测结果（其它时间结果判读无效），重复做3次，若结果均为阳性,则表明检测定性准确。

2.5.2 胶体金技术样品检测实验

为了解胶体金快速检测技术在常规农药和不同蔬菜品种中的应用结果，笔者扩大了检测范围，对夜开花、茄子、尖椒、空心菜、米苋、黄瓜等6种蔬菜中的氯氟氰菊酯、哒螨灵、毒死蜱、啶虫脒、百菌清、灭蝇胺、蚍虫林等7种农药进行了检测，检测结果见表1。

表1 不同蔬菜品种的农残检测结果

3 结 论

实验证实，胶体金农残快速检测技术是农残快速检测上的一项突破性技术，该技术弥补了传统检测方法在检测参数、检测样品等方面的局限性。笔者以啶虫脒为例，从样品制作、样品检测、结果识别等方面做了检测技术介绍，并通过对不同蔬菜品种和不同农药进行免疫胶体金检测应用实验，进一步验证了该技术具有检测速度快、灵敏度高、稳定性好、操作便捷等性能优势。同时，有效开展蔬菜农残快速检测工作是适应新时期农产品质量安全的发展和趋势，胶体金检测技术有效提高了农药残留快速检测靶向性定性筛查的技术能力，提升了实验室综合检测水平，加强了蔬菜农残监管力度，同时也为保障农产品质量安全提供了新的检测技术手段。