HPLC法测定人参脂溶性成分中亚油酸含量

2023-02-28岳显文孟凡娟王晓朦

人参研究 2023年1期

徐阳，岳显文，孟凡娟，王晓朦，周妍，吕鹏

（1.白城医学高等专科学校药学院，白城 137000；2.吉林省妇幼保健院吉林省产科质量控制中心，长春 130117；3.长春中医药大学药学院，长春 130117）

人参为五加科植物人参Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根和根茎。始载于《神农本草经》[1]，列为上品。味甘、微苦，性微温。归脾、肺、心、肾经。具有大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津养血，安神益智的功效。可用于治疗体虚欲脱，肢冷脉微，脾虚食少，肺虚喘咳，津伤口渴等症状[2]。人参为东北的道地药材，具有“百草之王”的称号，也被称之为“东北三宝”之一[3-4]。主产于吉林、黑龙江、辽宁等省，以吉林抚松县产量最大，质量最好，称吉林参。人参中含有大量成分，主要有人参皂苷、多糖、脂溶性成分等主要成分[5]，其中人参脂溶性成分大约占0.1%～0.5%[6]，人参脂溶性成分具有抑菌、抗肿瘤、改善心肌缺血的作用，还具有抗炎、镇咳、抗疲劳、降血脂、解酒防醉、兴奋中枢神经等作用[7-10]。亚油酸是一种必需脂肪酸，在生命体中表现出重要的作用[11]。亚油酸的药理作用重要表现在可以降低胆固醇、减少心血管疾病的风险和抗癌作用[12]。

本文应用HPLC法测定人参脂溶性成分中亚油酸的含量，以人参脂溶性成分为研究对象，亚油酸提取含量为指标。HPLC方法所测结果精密度、重复性、专属性和回收率等较好，而且操作简便，灵敏度高[13-15]，该方法为人参脂溶性成分的研究提供数据与理论支持。

1 仪器与材料

1.1 实验仪器

华谱（ACCHROM）S3000系列高效液相色谱仪（华谱科技（香港）有限公司委托；日立仪器（大连）有限公司生产）；AB135-S电子天平（梅特勒-托莱多国际有限公司，d=0.01mg）；AL204电子天平（梅特勒-托莱多（上海）有限公司，d=0.0001g）；R系列旋转蒸发器（上海申生科技有限公司）；SHB-循环水式真空泵Ⅲ（上海科升仪器有限公司）。

1.2 试剂与试药

人参药材（批号：20200901、20200902、20200903），购自吉林省靖宇县特产市场，经白城医学高等专科学校岳显文副教授鉴定符合《中国药典》2020年版一部项下规定；亚油酸对照品（批号C12703924，纯度≥95.0%），购于上海麦克林生物有限公司；色谱级甲醇（批号20200601）和乙腈（批号20200601)，购于美国Fisher公司；分析纯磷酸（批号20170408），购于天津光复科技发展有限公司；纯净水，购于杭州娃哈哈有限公司。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱分离采用Agilent TC C18色谱柱（4.6×250 mm，5μm）；以乙腈-0.1%磷酸溶液（65∶35，v∶v）为流动相；检测波长为203 nm；柱温为25℃；流速为1.0 mL/min；进样体积为10μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液

精密称定亚油酸对照品13.34 mg置于100mL容量瓶中，加适量乙腈超声溶解，定容至刻度，摇匀，制备成成每毫升含亚油酸0.1334 mg的对照品溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液

取人参药材适量，粉碎，过100目筛，备用。精密称取人参粉末5 g，加入石油醚50 mL，超声提取30 min（功率250 W，频率40 kHz），过滤，提取两次，合并两次滤液，40℃下旋至无石油醚，加入四氢呋喃定容至5 mL；再精密移取1 mL置10 mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 系统适应性试验，详见图1

图1 人参脂溶性成分HPLC色谱图（1亚油酸A对照品溶液B供试品溶液）

2.4 线性关系试验

精密称取亚油酸对照品5.25 mg，加乙腈溶解并定容至10 mL，制得每毫升含亚油酸0.525 mg的对照品原液，依次精密移取该对照品原液0.01、0.02、0.1、0.2、0.5和1.0 mL，加乙腈定容至1 mL，摇匀，制得6个不同浓度的对照品溶液。采用“2.1”项下色谱条件，依次进样分析，以峰面积为纵坐标（Y），亚油酸浓度为横坐标（X），进行线性回归。得到回归方程为Y=184.24X-76.769（r=0.999 7），表明亚油酸浓度在5.25～525μg/mL范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验

取亚油酸对照品溶液，依照“2.1”项下色谱条件，连续进样6次，记录各次峰面积。计算得到亚油酸峰面积的RSD值为1.12%，表明该仪器的精密度良好。

2.6 稳定性试验

取同一供试品溶液，在制备后0、2、4、6、8、12 h时，依次按照“2.1”项下色谱条件进样，记录各次峰面积。测得亚油酸峰面积的RSD值为0.98%，表明12 h内供试品溶液具有良好的稳定性。

2.7 重复性试验

按“2.2.2”项下方法平行制备6份供试品溶液，依照“2.1”项下色谱条件，依次进样分析，记录各次峰面积。测得供试品中亚油酸的平均含量为0.696 mg/g，RSD值为1.82%，表明该方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验

精密称取6份人参粉末，每份约2.5 g，每份精密加入浓度为1.764 mg/mL的亚油酸对照品溶液1 mL，继续按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，依据“2.1”项下色谱条件进行测定，记录各次峰面积。计算得到亚油酸的平均回收率为98.59%，RSD值为1.54%，表明该方法的准确度良好。

2.9 样品含量测定

取不同批号的人参样品3份，分别按照“2.2.2”项下方法制成供试品溶液，依照“2.1”项下色谱条件，依次进样分析，记录峰面积。采用外标法计算人参脂溶性成分中亚油酸的含量，结果见表1。

表1 人参脂溶性成分中亚油酸含量测定结果（mg/g，n=3）

3 结论与讨论

3.1 结论

本文通过建立HPLC法对人参脂溶性成分中的亚油酸含量进行测定，HPLC具有灵敏度高、重现性好、分析效率高、自动化程度高等优势，是质量检测的重要方法之一[13、14]。通过实验得到人参脂溶性成分中亚油酸含量测定最佳条件为：料液比为1∶25，梯度洗脱(0 min→55 min，乙腈65%-磷酸35%；55min→68min，乙腈100%-磷酸0%；68min→75min，乙腈65%-磷酸35%)；检测波长203 nm；柱温25℃；流速1 mL/min；进样体积为10μL。

该研究建立的HPLC测定方法简便快速、分离度好、稳定性强、灵敏度高、重现性好，用于测定的供试品溶液的浓度范围广，可以为人参脂溶性成分的深入研究提供科学依据和数据支持。

3.2 测定波长的选择

波长的选择是含量测定中的重要参数之一。在检测波长选择方面，有文献选择210nm[12]，也有选择205nm[13]，还有选择203nm[14]。本研究采用区间200～400 nm波长扫描，结果如图所示。通过对对照品溶液波长扫描，根据扫描结果，确定亚油酸在203 nm波长处有最大吸收。故选择波长为203nm。