广西壮族自治区柳州市壮族高胆红素血症新生儿G6PD 缺陷及基因突变特点分析

刘艳萍 李可成 黄 婷 谢梦月 潘莉珍 陈大宇

1.广西壮族自治区柳州市人民医院检验科，广西柳州 545001；2.广西壮族自治区柳州市妇幼保健院遗传科，广西柳州 545001

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（glucose-6-phosphate dehydrogenase，G6PD）缺乏症是由于人体红细胞表面膜的G6PD 被破坏，导致发生溶血的一种遗传病证，该病存在一定的地域性与民族特异性[1]。新生儿如果患有这种病症会增加高胆红素血症发生的可能，一旦患儿并发了高胆红素血症，黄疸水平会持续严重，如果不及时救治，发生胆红素脑病概率较大[2]。为探究G6PD缺乏症与高胆红素血症的关联性，本研究回顾性分析广西壮族自治区柳州地区353 例不同程度高胆红素血症的壮族患儿G6PD 活性及基因突变特点。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2018 年6 月至2021 年6 月广西壮族自治区柳州市妇幼保健院（以下简称“我院”）新生儿病区确诊为高胆红素血症的壮族足月新生儿353 例为研究对象，年龄1～15 d，平均（7.26±1.38）d；男247 例，女106 例；疾病程度：重度76 例，中度119 例，轻度158 例。纳入标准：①足月新生儿；②确诊为高胆红素血症。排除标准：①合并肝炎病史；②合并梗阻性疾病史；③生理性黄疸。本研究经我院伦理委员会审批同意（20170221 032；快审-科研-2018-088）。

1.2 高胆红素血症诊断及分级评价标准

按照《新生儿高胆红素血症诊断和治疗专家共识》[3]，诊断及分级标准如下：

①诊断标准。已足月的新生儿符合以下情况之一的即可诊断为新生儿高胆红素血症：新生儿血清总胆红素24 h 单位数值＞102.6 μmol/L，48 h 单位数值＞154 μmol/L，单位数值＞220.6 μmol/L（以间接胆红素为主）＞3d；血清总胆红素每天上升单位数值＞85 μmol/L；黄疸症状持续加重或黄疸超过两周。②分级评价标准。新生儿血清总胆红素170～256 μmol/L 为轻度高胆红素血症，＞256～342 μmol/L 为中度高胆红素血症，＞342 μmol/L 为重度高胆红素血症。

1.3 研究方法

1.3.1 血清总胆红素检测

血清总胆红素检测使用重氮法，仪器为美国Roche Modular DDP 全自动生化分析仪及配套试剂盒（批号：42553201）。

1.3.2 G6PD 活性分析

使用葡萄糖-6-磷酸底物定量法，仪器为美国Roche Cobas C702 全自动生化分析仪，试剂由北京利德曼公司提供（批号：20181210）。

1.3.3 G6PD 基因突变检测

使用2019 年发布的《新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症筛查与诊断实验室检测技术专家共识》[4]中推荐的G6PD 基因检测手段—多色探针荧光PCR 熔解曲线法。试剂盒由厦门致善有限公司提供（试剂批号：18052001、19031501、20011101、20122001），检测：c.95A＞G、c.383T＞C、c.392G＞T、c.487G＞A、c.517T＞C、c.592C＞T、c.871G＞A、c.1004C＞A、c.1024C＞T、c.1360C＞T、c.1376G＞T、c.1388G＞A 等12 种在我国出现频率较高的G6PD基因突变类型。

1.3.3.1 DNA 提取 采用厦门致善生物科技股份有限公司Lab-Aid 820 全自动核酸提取仪及配套的磁珠法核酸提取试剂盒对血滤纸片样本进行核酸提取。

1.3.3.2 多色探针荧光PCR 熔解曲线法检测G6PD 基因突变 样本需通过两个PCR 体系进行检测，每个体系含四色荧光探针，根据靶序列与探针杂交体熔点的变化检测G6PD 基因突变，可同时检测中国人中常见的12 个位点的基因突变及对应的野生型，PCR 扩增结果分析在美国Bio-Rad CFX96 实时荧光PCR 仪完成。参照试剂盒说明书进行样本基因型判读。

1.4 统计学方法

采用SPSS 24.0 软件进行数据分析。计量资料用均数±标准差（）表示；计数资料用例数或百分率表示；相关性分析采用Spearman 秩相关系数。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 353 例高胆红素血症患儿G6PD 活性缺乏检出率

353 例高胆红素血症患儿G6PD 活性缺乏86 例（24.36%），其中男67 例，女19 例。

2.2 353 例高胆红素血症患儿基因突变分析

353 例高胆红素血症患儿基因突变检出率为32.29%（114/353）。其中，男性半合子占比为19%（70/353），女性纯合子占比为1%（4/353），女性复合杂合子占比为2%（9/353），女性杂合子占比为8%（31/353）。高发突变位点为c.1388G＞A，其次为c.1376G＞T、c.95A＞G。复查杂合突变类型分别是c.1376G＞T/c.1388G＞A，c.95A＞G/c.1388G＞A、c.1004C＞A/c.1388G＞A、c.95A＞G/c.1024C＞T、c.95A＞G/c.1360C＞T、c.392G＞T/c.1360C＞T、c.517T＞C/c.871G＞A。见表1。高频次突变类型熔解曲线见图1。

图1 G6PD 高频次基因突变类型曲线图

表1 353 例高胆红素血症患儿G6PD 突变位点检测结果（次）

2.3 血清总胆红素水平与G6PD 活性相关性

114 例G6PD 基因突变的患儿中，重度高胆红素血症占比为22%（26/114），中度占比为25%（29/114），轻度占比为51%（59/114）。总胆红素水平与G6PD 活性呈负相关（r=-0.65，P＜0.05）。

3 讨论

广西壮族自治区是一个多民族相聚而居的地区，壮族人口占比超过1/3，民族人群G6PD 致病基因的种族异质性表达与其他民族存在一定差别。研究显示，广西地区壮族人群G6PD 缺乏症发病风险高于非壮族人群[5-6]。在广西百色及崇左地区，G6PD 缺乏症在壮族人群中的发生率为各民族中最高[7-8]。

高胆红素血症在新生儿疾病中的占比非常高，它的发生可能由于多种因素导致，如果没有及时诊治重症患者，会导致胆红素脑病的发生，造成体内各系统损害，严重者可导致死亡[9]。高胆红素血症对患儿的多脏器有很大程度损伤，对儿童的正常生长发育及地区人口素质构成有很大影响，G6PD 缺乏是其中最主要的病理因素之一。研究显示，近1/3 的永久性神经损伤都是G6PD 缺乏引起的[10]。

G6PD 基因定位于Xq28，基本构成为12 个内含子及13 个外显子。G6PD 缺乏症是X 染色体隐性遗传疾病。其生理特点参与到旁路代谢途径，提供还原型辅酶Ⅱ，可维持人体血红蛋白及红细胞膜的相对平衡[11-12]。在不同地区的不同种族中，G6PD 基因突变存在一定差别。数据显示，正常人群G6PD 缺乏症在两广地区发生率较高，主要是地域性因素导致，广东潮州、珠海、江门，广西钦州等地发病率为3.36%～10.18%[13-16]。而在新生儿高胆红素群体中，G6PD 缺乏症的发生率比正常人群高。本研究结果显示，353 例高胆红素血症患儿基因突变检出率为32.29%，比成都地区（15.33%）、厦门地区（17.35%）高[17-18]。本研究结果显示，353 例高胆红素血症患儿G6PD 高频次突变类型依次是c.1388G＞A、c.1376G＞T、c.95A＞G，与国内相关报道[19-22]存在一定差别。G6PD 基因的编码产物单体由515 个氨基酸组成，外显子的错义突变造成转录产物异常，进而改变氨基酸序列，是影响酶活性的最常见原因。本研究中高频次的3 种突变类型均属于该结果，但不同突变基因型与酶活性临床表型的相关程度，还需要进行更深研究如蛋白功能实验。

因新生儿的出生多伴随生理性黄疸，而患有G6PD缺乏症的新生儿常常会与之混淆，如果将此类型的黄疸视为生理性黄疸，那么高胆红素血症发生的风险将会增大[23]。虽然因G6PD 缺乏导致的高胆红素血症发生的概率只占一小部分[24]，但其是新生儿脑损伤发生的一个很重要的病理因素，临床中预防新生儿胆红素脑病是新生儿黄疸诊疗工作的重点。而对于高胆红素血症的诊疗，首要是监测血清胆红素的水平是否持续降低[25]。本研究结果显示，总胆红素与G6PD 活性呈负相关。临床在治疗疾病过程中，应同时结合G6PD 突变位点、酶活性及胆红素动态水平的评估，及时处置疾病，可预防严重并发症的发生[26]。

综上，G6PD 缺乏症在广西壮族自治区柳州市存在高发病率，壮族人群的民族异质性在G6PD 缺乏症中的表达比较明显，因此壮族聚居地区，在诊疗高胆红素血症过程中，检测新生儿的G6PD 活性和基因突变位点是非常有必要的，其不仅可以提前预防新生儿高胆红素血症的发生，而且对胆红素脑病发病率的降低也很有帮助，对提升本地区人口素质具有指导性意义。