生骨补肾胶囊显微及薄层鉴别研究*

谢嘉驰，朱 金，杨 宁，罗纯清，毛文点，罗黎霞

(湘潭市中医医院药学部，湖南 湘潭 411100)

生骨补肾胶囊处方来源于湘潭市中医医院的临床经验方，由西洋参、丹参、白芷、木香等7味中药组成。具有活血祛瘀、行气止痛、益气养阴等功效。主要治疗各种关节骨折后期，加速骨折愈合。为保证临床用药安性，有必要对其制剂进行严格质量控制。本文参考药典、制剂规范[1-3]，对制剂中的白芷、木香、牛膝、西洋参4味药进行了显微鉴别，对丹参、白芷、木香3 味药材建立了薄层色谱(TLC)鉴别。结果表明，该方法简便可靠、专属性强，可作为生骨补肾胶囊的质量控制。

1 材料与仪器

西洋参、丹参、白芷、牛膝等7味药中药均购自湖南亚飞中药饮片有限公司，经湘潭市中医医院药学部钟喜光副主任中药师鉴定，均符合2020版《中华人民共和国药典》(《中国药典》)规定。欧前胡素对照品，批号：110826-201918；丹参酮IIA对照品，批号：110766-201721；木香对照药材，批号：110948-201815，以上均由中国药品生物检定所提供。

SKG-01电热恒温鼓风干燥箱，湖北省黄石市恒丰医疗器械有限公司；DZKW-S-4电热恒温水浴锅，北京市永光明医疗仪器有限公司；DS-0405超声波清洗机，深圳品凰科技有限公司；CX23LEDRFSIC显微镜，奥林巴斯(中国)有限公司；CP214 型电子天平，美国Ohaus公司；ZF-2型三用紫外仪，上海市安亭电子仪器厂。

硅胶G、硅胶GF254，青岛海洋化工厂；石油醚(60～90 ℃)(批号：20190822)、石油醚(30～60 ℃)(批号：20190921)，以上试剂均购自于天津市富宇精细化工有限公司；乙醚(批号：10014118)、甲苯(批号：20180111)、香草醛(批号：20150730)、甲酸乙酯(批号：20141024)，以上试剂均购自国药集团；甲醇(批号：200304)、甲酸(批号：20170328)、水合氯醛(批号：20210110)，以上试剂均购自天津科赛欧；乙酸乙酯(广东光华科技有限公司，批号：20181129)；环己烷(湖南汇虹，批号：20210521)；硫酸(衡阳市凯信化工试剂股份有限公司；批号：20100516)，以上试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 显微鉴别

查阅相关文献[4-7]，对生骨补肾胶囊中4味药进行显微鉴别。随机取生骨补肾胶囊内容物粉末适量，置于载玻片上，滴加1～2滴水合氯醛试液，搅拌均匀，加热透化后用镊子将盖玻片从一侧轻轻放下，用吸油纸吸除溢出的液体，置于显微成像系统的显微镜载物台上，于10 倍镜下观察，必要时可调至40倍高倍镜。结果可见：白芷中淀粉粒较多，单粒呈圆球形、多角形、椭圆形，直径3～20 μm，复粒多由2～10粒组成。网纹导管、螺纹导管直径为12～70 μm。油管多破碎，含淡黄棕色分泌物。木香中菊糖多见，呈红棕色，表面呈放射状纹理。牛膝薄壁细胞中含有少量的草酸钙砂晶。西洋参薄壁细胞中含有少量的草酸钙簇晶，木质部可见单个或者2～3个的梯纹导管，径向排列。树脂道碎片含有黄色块状分泌物。具体见图1。

图1 显微鉴别

2.2 丹参、白芷、木香的薄层色谱鉴别

查阅相关文献[8-13]，考虑试剂安全性、样品处理过程简单原则，对处方中丹参、白芷、木香三药味进行了薄层色谱鉴别。

2.2.1 丹参的鉴别

(1)对照品溶液配制：取丹参酮ⅡA对照品，加入乙酸乙酯溶解，制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。(2)供试品溶液配制：取3批本品内容物5 g，分别加入加乙酸乙酯10 mL，超声处理30 min，过滤，滤液挥发至2 mL，作为3批供试品溶液。(3)阴性对照品溶液配制：按处方及本品的制备方法制成不含丹参的生骨补肾胶囊，提取方法同(2)供试品溶液配制。预实验中参照2020版中国药典薄层色谱法(通则0502)试验，分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各12 μL、16 μL、12 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，采用石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯(4∶1)、甲苯-乙酸乙酯(19∶1)为展开系统，结果斑点均显色，但石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯(4∶1)展开系统中的斑点位置不一致。最终采用甲苯-乙酸乙酯(19∶1)为展开系统，展开，展至约8 cm，取出，晾干，置日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品溶液在色谱相应位置无干扰。见图2。

图2 薄层色谱法鉴别

2.2.2 白芷的鉴别

(1)对照品溶液配制：取欧前胡素对照品，加乙酸乙酯制成每1 mL各含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。(2)供试品溶液配制：取3批本品内容物5 g，加甲醇20 mL，超声30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯2 mL使溶解，作为3批供试品溶液。(3)阴性对照品溶液配制：按处方及本药的制备方法制成不含白芷的生骨补肾胶囊，提取方法同(2)供试品溶液配制。预实验中参照2020版中国药典薄层色谱法(通则0502)试验，分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各8 μL、12 μL、8 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，采用石油醚(30～60 ℃)-乙醚(3∶2)、环己烷-乙酸乙酯(17∶3)为展开系统，结果斑点均显色，但石油醚(30～60 ℃)-乙醚(3∶2)展开系统分离度差且拖尾。最终采用环己烷-乙酸乙酯(17∶3)为展开系统，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性样品溶液在色谱相应位置无干扰。见图2。

2.2.3 木香的鉴别

(1)对照药材溶液配制：取1 g对照药材，加甲醇10 mL制成木香对照品溶液。(2)供试品溶液配制：取3批本品内容物5 g，加甲醇20 mL，超声30 min，滤过，滤液于60 ℃水浴锅中蒸干，残渣加2 mL甲醇使溶解，即为3批供试品溶液。(3)阴性对照品溶液配制：按处方及本药的制备方法制成不含木香的生骨补肾胶囊，提取方法同2)供试品溶液配制。参照2020版中国药典薄层色谱法(通则0502)试验，分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各2 μL、5 μL、1 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)、石油醚(60～90 ℃)-甲苯-乙酸乙酯(7∶2∶1)的上层溶液为展开系统，结果斑点均显色，但石油醚(60～90 ℃)-甲苯-乙酸乙酯(7∶2∶1)展开系统分离度差且拖尾。最终采用环己烷-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)为展开系统，展开，取出，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品溶液在色谱相应位置无干扰。见图2。

3 结 论

生骨补肾胶囊为我院经验方，有多年的临床应用基础，对治疗各种关节骨折后期，加速骨折愈合疗效较好。处方以传统汤剂的形式应用于临床，不便于患者携带、服用等，为了促进处方的应用与推广，规范用药剂量，保证疗效，将其制成生骨补肾胶囊。处方含有7味药材，缺乏质量控制标准。因此，本实验对生骨补肾胶囊的显微鉴别方法和薄层鉴别方法进行了研究。

生骨补肾胶囊以原粉入药，建立的粉末显微鉴别方法特征明显。从测定的结果显示：在显微鉴别方法中白芷的淀粉粒和油管、木香的菊糖、牛膝的草酸钙砂晶、西洋参的草酸钙簇晶和导管，都取得了较好的鉴别效果，重现性好，专属性强。该实验可作为生骨补肾胶囊质量控制标准的参考依据之一。但是，制片时要减少气泡，透化完全，切勿焦化，否则会影响淀粉粒的观察。在薄层鉴别中对生骨补肾胶囊中的丹参、白芷、木香进行鉴别，可见各供试品、对照品/药材分离度、重复性效果较好，斑点清晰明显，并且阴性对照没有干扰，可以作为生骨补肾胶囊有效定性的鉴别方法。其中，由于西洋参所在鉴别中有效成分不稳定，干扰较多，分离较难，故未能建立此药的薄层鉴别方法。本实验通过2种简单易行的鉴别方法对生骨补肾胶囊进行鉴别，为建立生骨补肾胶囊的质量标准提供依据，进而为其标准化、规范化生产提供必要条件，为下一步将进行含量测定方面的研究奠定基础。