血清VEGF、TGFβ1及PDCD4在慢性粒细胞白血病患者中的表达及相关性分析

黄远颖 杨秋敏 司徒健瑜 张湘兰

1.广东省阳江市人民医院血液内科，广东阳江 529500；2.广东省阳江市人民医院肝胆胰外科，广东阳江 529500

慢性粒细胞白血病（chronic myeloid leukemia，CML）是一种起源于多能造血干细胞的恶性骨髓增生性血液疾病，约占成年人白血病病例总数的20%[1]。根据CML疾病分期可将其分为慢性期、加速期以及急变期三种，其中慢性期CML患者病情进展较为缓慢，通常病程较长（可持续数年），且通过使用酪氨酸激酶抑制剂治疗可有效延长患者总生存期，而加速期以及急变期CML患者病情进展较为迅速，病程较短且普遍预后较差[2]。因此，实现对CML病情进展的准确评估，对于CML的治疗及预后改善均具有重要的临床价值[3]。近年来，血清学指标因具有检测快捷、方便等优点，常作为对CML患者疾病进展监测及预后评估的重要指标[4]。已有研究表明CML患者血清血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、转化 生 长 因 子β1（transforming growth factor β1，TGFβ1）及程序性细胞死亡因子4（programmed cell death factor 4，PDCD4）水平均呈异常表达，且表达水平与CML患者病情进展关系密切[5-6]，但血清VEGF、TGFβ1及PDCD4水平检测用于评估CML患者预后的相关报道却较为少见。鉴于此，本研究回顾性分析2014年5月至2017年5月阳江市人民医院（我院）收治的63例CML患者的临床资料，对血清VEGF、TGFβ1及PDCD4在CML患者中的表达及相关性进行探讨，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本研究已通过我院医学伦理委员会批准。回顾性分析2014年5月至2017年5月我院收治的63例CML患者（作为研究组）的临床资料，疾病分期：慢性期35例、加速期17例、急变期11例，另选同期体检的健康者30例作为对照组。纳入标准：参照《慢性粒-单核细胞白血病诊断与治疗中国指南（2021年版）》对本研究CML患者进行诊断[7]，并通过血常规、染色体、骨髓穿刺及融合基因检测确诊；所有CML患者均临床病理资料完整。排除标准：合并恶性肿瘤者；合并精神障碍者；合并免疫系统缺陷者；合并心肝肾等重要脏器功能障碍者[8]；妊娠期或哺乳期女性；随访过程中失访者。

1.2 观察指标及方法

收集所有CML患者（研究组）性别、年龄、是否高白细胞、有无髓外浸润、疾病分期（慢性期、加速期、急变期）、危险度分型（低、中危、高危）等临床资料，记录研究组患者入院 24 h内血清VEGF、TGFβ1及PDCD4水平；记录对照组体检健康者入院24 h内血清VEGF、TGFβ1及PDCD4水平。

空腹抽取研究组CML患者（于入院后次日清晨）及对照组体检健康者（于体检当日清晨）外周肘静脉血3～5 ml于肝素抗凝管中，离心10 min（转速3000 r/min，离心半径12 cm）后提取血清，于48 h内完成血清学指标检测，其中血清VEGF、TGFβ1及PDCD4水平均采用ELISA法进行测定。截断值选取：本研究以所有CML患者血清VEGF、TGFβ1及PDCD4水平中位数为分界线，其中血清VEGF水平中位数为168.72 pg/ml、血清VTGFβ1水平中位数为30.45 μg/L、血清VEGF PDCD4水平中位数为0.57 ng/ml。其中无病生存期（disease-free survival， DFS）定义为CML患者经治疗后至疾病复发或因任何原因病死之间的时间。

1.3 统计学处理

使用统计学软件SPSS 23.0处理本研究数据资料，其中计量资料均符合正态分布（使用Shapiro-wilk法检验）用均数±标准差（）表示，行t检验，多个计量资料比较采用F检验，计数资料用[n（%）]表示，行χ2检验，CML患者预后病死危险因素采用单因素与多因素logistic回归分析，并绘制生存曲线探讨CML患者整体生存情况，P＜ 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血清VEGF、TGFβ1及PDCD4水平比较

研究组患者血清VEGF水平明显高于对照组，而血清TGFβ1、PDCD4水平均明显低于对照组，差异有统计学意义（P＜ 0.05）。见表1。

表1 两组血清VEGF、TGFβ1及PDCD4水平比较（±s）

表1 两组血清VEGF、TGFβ1及PDCD4水平比较（±s）

注 VEGF：血管内皮生长因子；TGFβ1：转化生长因子β1；PDCD4：程序性细胞死亡因子4

组别 n VEGF（pg/ml）TGFβ1（μg/L） PDCD4（ng/ml）研究组63 166.32±22.14 32.21±4.68 0.63±0.11对照组30 71.24±8.93 75.46±9.15 1.02±0.31 t值 25.081 23.216 6.373 P值 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

2.2 血清VEGF、TGFβ1及PDCD4水平与CML患者临床病理指标的关系

不同性别、年龄与是否高白细胞的CML患者血清VEGF、TGFβ1及PDCD4水平比较，差异无统计学意义（P＞ 0.05）；而有无髓外浸润、不同疾病分期与危险度分型的CML患者血清VEGF、TGFβ1及PDCD4水平比较，差异有统计学意义（P＜ 0.05）。见表2。

表2 血清VEGF、TGFβ1及PDCD4水平与CML患者临床病理指标的关系（n=63，±s）

表2 血清VEGF、TGFβ1及PDCD4水平与CML患者临床病理指标的关系（n=63，±s）

注 VEGF：血管内皮生长因子；TGFβ1：转化生长因子β1；PDCD4：程序性细胞死亡因子4

指标 n VEGF（pg/ml） t/F值 P值 TGFβ1（μg/L） t/F值 P值 PDCD4（ng/ml） t/F值 P值性别 男 36 167.94±22.29 0.673 0.504 31.86±4.66 0.688 0.494 0.62±0.10 0.753 0.455 女 27 164.15±21.93 32.68±4.71 0.64±0.11年龄（岁） ＜60岁 42 163.81±21.79 1.271 0.209 32.75±4.72 1.278 0.206 0.64±0.11 1.021 0.312 ≥60岁 21 171.33±22.82 31.15±4.61 0.61±0.11高白细胞 是 32 169.06±23.13 0.997 0.323 31.92±4.52 0.508 0.613 0.62±0.10 0.756 0.453 否 31 163.49±21.11 32.52±4.85 0.64±0.11髓外浸润 有 29 201.36±25.42 11.502 ＜0.001 24.48±3.25 11.024 ＜0.001 0.42±0.08 13.332 ＜0.001 无 34 136.43±19.33 38.81±5.91 0.81±0.13疾病分期 慢性期 35 131.19±18.32 54.357 ＜0.001 39.28±5.69 37.941 ＜0.001 0.73±0.13 22.015 ＜0.001 加速期 17 196.41±25.47 27.93±3.88 0.61±0.09 急变期 11 231.58±29.12 16.35±2.72 0.33±0.06危险度分型 低、中危 47 145.88±19.41 9.672 ＜0.001 36.54±5.19 13.444 ＜0.001 0.71±0.12 10.629 ＜0.001 高危 16 226.35±30.14 19.51±3.18 0.39±0.08

2.3 死亡组与存活组CML患者血清VEGF、TGFβ1及PDCD4水平比较

根据CML患者5年随访结果将其分为死亡组19例与存活组44例，死亡组患者血清VEGF水平均明显高于存活组，而血清TGFβ1、PDCD4水平均明显低于存活组，差异有统计学意义（P＜ 0.05）。见表3。

表3 死亡组与存活组CML患者血清VEGF、TGFβ1及PDCD4水平比较（±s）

表3 死亡组与存活组CML患者血清VEGF、TGFβ1及PDCD4水平比较（±s）

注 VEGF：血管内皮生长因子；TGFβ1：转化生长因子β1；PDCD4：程序性细胞死亡因子4

组别 n VEGF（pg/ml）TGFβ1（μg/L） PDCD4（ng/ml）死亡组19 223.98±25.61 22.69±3.24 0.38±0.08存活组44 141.42±20.63 36.33±5.31 0.73±0.12 t值 13.538 10.969 12.130 P值 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

2.4 CML患者预后多因素logistic回归分析

以CML患者预后病死为因变量进行多因素logistic回归分析，结果显示髓外浸润、疾病分期（加速期、急变期）、危险度分型（高危）、VEGF＞168.72 pg/ml、TGFβ1≤30.45 μg/L、PDCD4≤0.57 ng/ml均为CML患者预后病死的独立危险因素（P＜ 0.05）。见表4。

表4 多因素logistic回归分析

2.5 血清VEGF、TGFβ1及PDCD4表达水平生存曲线分析

血清VEGF≤168.72 pg/ml的CML患者DFS为（48.36±5.71）个 月，明 显 大 于VEGF＞168.72 pg/ml患者 的（35.81±4.64）个 月，差异 有统 计 学意 义（t=9.556，P＜ 0.001）；血 清TGFβ1＞30.45 μg/L的CML患者DFS为（46.91±5.52）个月，明显大于TGFβ1≤30.45 μg/L患者的（37.61±4.86）个月，差异有统计学意义（t=7.104，P＜ 0.001）；血清PDCD4＞0.57 ng/ml的CML患者DFS为（50.25±6.13）个月，明显大于PDCD4≤0.57 ng/ml患者的（34.37±4.27）个月，差异有统计学意义（t=11.145，P＜ 0.001）。见图1。

图1 血清VEGF、TGFβ1及PDCD4表达水平生存曲线

3 讨论

CML的主要临床特点为外周血粒细胞的异常增加，且患者常伴有贫血、血小板增加以及肝脾肿大等症状[9]。VEGF是一种可促进体内血管内皮细胞生长及新生血管形成的重要细胞生长因子，具有高度的特异性，不仅参与了肿瘤细胞（肺癌、肝癌等实体肿瘤）的增殖、分化与浸润等生理过程，且在血液系统肿瘤的发生发展过程中也扮演着重要的角色，相关研究已证实VEGF可促进白血病细胞的增殖等生理过程，因此可将其作为评估CML病情进展的重要标志物[10]。TGFβ1是一种通过Treg细胞分泌产生的强效血细胞抑制因子，可参与细胞增殖与分化等生理过程发挥其在造血方面的负性造血细胞调控作用，并导致细胞恶性增加，有研究证实TGFβ1在CML患者血清中的表达水平明显下调[11]。而PDCD4是近年来新发现的一种可调节细胞程序性死亡及抑制肿瘤细胞生长的抑癌基因，临床研究已证实其在胃癌、肺癌等肿瘤组织中均呈低表达，且与该类肿瘤的发生发展、恶性程度及预后关系密切，但关于PDCD4在血液系统肿瘤中的研究却少见报道[12-15]。

本研究中CML患者血清VEGF水平明显升高而血清TGFβ1、PDCD4水平均明显降低，且血清VEGF、TGFβ1及PDCD4水平与髓外浸润、疾病分期与危险度分型显著相关。根据5年随访结果，预后较差的CML患者血清VEGF水平升高及血清TGFβ1、PDCD4水平降低均更为明显。多因素分析结果表明髓外浸润、疾病分期（加速期、急变期）、危险度分型（高危）、VEGF＞168.72 pg/ml、TGFβ1≤30.45 μg/L、PDCD4≤0.57 ng/ml均为CML患者预后病死的独立危险因素，通过对其进行分析与检测有助于为CML患者预后评估。本研究中 血 清VEGF≤168.72 pg/ml、TGFβ1＞30.45 μg/L、PDCD4＞0.57 ng/ml的CML患者整体生存情况较好，提示可将其作为对CML患者预后评估的标志物。不足之处：本研究所筛选的CML患者数量较少，可能会因血清学指标测定及血清VEGF、TGFβ1、PDCD4水平截断值的选取导致数据分析结果的偏倚，因此血清VEGF、TGFβ1及PDCD4在CML患者中的表达及相关性仍有待于通过开展大样本、多中心、前瞻性研究进行验证。

总之，血清VEGF、TGFβ1及PDCD4水平与CML患者病情进展密切相关，髓外浸润、疾病分期（加速期、急变期）、危险度分型（高危）、VEGF＞168.72 pg/ml、TGFβ1≤30.45 μg/L、PDCD4≤0.57 ng/ml均为CML患者预后病死的独立危险因素，且血清VEGF≤168.72 pg/ml、TGFβ1＞30.45 μg/L、PDCD4＞0.57 ng/ml的CML患者整体生存情况较好。