TBX2表达与前列腺癌临床病理特征及其上皮间质转化的相关性

胡君程 苏瑜娇 叶承祖

前列腺癌(PCa)为前列腺上皮细胞恶性增生所致的一种肿瘤，为男性泌尿生殖系统最常见的一种恶性肿瘤，临床主要表现为排尿异常、勃起功能障碍等[1]。PCa的早期诊断、准确评估病情进展对制定临床治疗方案及患者预后有重要意义[2]。T-BOX转录因子2(TBX2)为T-BOX基因编码转录因子家族的成员之一，在心脏、胚肾、乳腺等器官发育过程中均有表达，且发挥着重要作用[3]。目前关于TBX2的研究发现其在乳腺癌、宫颈鳞癌等多种恶性肿瘤中有较高表达，且参与了细胞周期调控，在肿瘤形成及发展中发挥着重要作用[4]。本研究观察了TBX2表达与前列腺癌临床病理特征及上皮间质转化(EMT)的相关性，旨在为临床治疗提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019年1月至2020年3月于我院行前列腺癌根治术的患者68例(PCa组)，取经中性甲醛固定、石蜡包埋的前列腺癌组织标本68份，患者年龄42～72岁，平均(57.89±2.51)岁，AJCC分期Ⅰ期12例，Ⅱ期17例，Ⅲ期21例，Ⅳ期18例。选取同期于我院进行前列腺电切术的良性前列增生患者68例(BPH组)，取蜡块标本68份，患者年龄41～71岁，平均(57.82±2.45)岁。两组年龄差异不明显(P>0.05)。前列腺组织芯片制作：所有标本均来自我院病理科，蜡块均保存完好，可直接行组织芯片制作，136个样品点，前列腺癌组织68例、良性前列腺组织68例。

1.2 试剂

小鼠抗人TBX2单克隆抗体由上海研生生化试剂有限公司提供，工作液浓度为1∶350。

1.3 免疫组织化学染色

经中性甲醛固定、石蜡包埋的前列腺癌组织切成厚约5 μm的切片，并置于60 ℃恒温箱内1 h，目的为将组织表面蜡融化，常规脱蜡、水化操作，应用3%H2O2溶液灭活内源性过氧化氢酶，并将切片置于枸橼酸钠缓冲液(0.01 mol/L)内行微波修复，应用10%山羊血清封闭液行室温封闭20 min，然后于切片上滴加小鼠抗人TBX2(1∶350)单克隆抗体，以4 ℃过夜。第二天以超敏SP试剂盒及DAB显色，以自来水冲净后行苏木精复染，最后经脱水、透明、中性树胶封片。邀请病理科两名副主任及以上职称医师于镜下行双盲阅片。

1.4 结果判定

着色标准以双评分法半定量法[5]评估，染色强度(I)与阳性细胞所占百分比(P)之间乘积为切片染色评分，0分：未着黄色，细胞全无着色；1分：着浅黄色，着色<10%；2分：黄色，着色在10%～30%间；3分：棕色，着色在30%～50%间，4分：着色>50%。总分≤3分(-)，4～6分(+)，7～9分(++)，10～12分(+++)，≤6分判定为阴性，>6分判定为阳性。

1.5 观察指标

比较TBX2在前列腺癌组织与良性组织中表达情况；分析TBX2与PCa临床病理特征的关系，包括年龄、临床分期、有无淋巴结转移、血清前列腺特异性抗原(PSA)；比较PCa患者TBX2阳性者与阴性者EMT相关蛋白表达量，应用Westeern blotting法对EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin进行检测；分析TBX2表达与前列腺癌EMT标志蛋白表达的相关性。

1.6 统计学方法

2 结果

2.1 TBX2在前列腺癌组织及良性组织中阳性表达情况

PCa组 TBX2阳性表达率为69.12%，较BPH组(16.18%)高(P<0.05)，见表1。

表1 前列腺癌组织及良性组织中TBX2阳性表达情况

2.2 TBX2表达与PCa临床病理特征的相关性

TBX2阳性表达与PCa患者年龄、淋巴结转移等病理特征无关(P>0.05)，与临床分期、PSA水平有关(P<0.05)，见表2。

表2 TBX2表达与PCa不同病理特征的相关性

2.3 PCa组TBX2阳性者与阴性者EMT相关蛋白表达量比较

PCa组TBX2阳性者EMT相关蛋白表达量与阴性者比较有显著差异(P<0.05)，见表3。

表3 PCa组TBX2阳性者与阴性者EMT相关蛋白表达量比较

2.4 TBX2表达与前列腺癌EMT标志蛋白表达的相关性

TBX2表达与E-cadherin呈正相关性，与N-cadherin、Vimentin呈负相关性(P<0.05)，见表4。

表4 TBX2表达与前列腺癌EMT标志蛋白表达的相关性/例

3 讨论

PCa为男性泌尿生殖系统最常见的一种恶性肿瘤，具有较高发病率，且近年来发病率逐年上升，成为威胁男性生殖健康的主要疾病。部分PCa恶性程度较低，进展较缓慢，无需规范化治疗，但部分患者恶性程度较高，具有较强侵袭性，需及时治疗以改善预后[6]。目前临床无确切PCa进展评估标准，多综合患者临床分期、血清PSA等资料对病情进展进行预估。

TBX2为-T-BOX基因家族的重要成员之一，在生物体内具有调控发育的作用，属发育调控相关基因，其广泛表达于各种组织的胚胎发育过程中，可指导胚胎及组织器官轴向发育[7]。近年来多项研究表示TBX2在多种恶性肿瘤中有较高表达，并与肿瘤细胞增殖、凋亡有密切关系，在乳腺癌等肿瘤中可通过一些重要生长调控因子参与细胞分化、凋亡及衰老中[8]。TBX2可经多条途径参与肿瘤形成过程，TBX2可通过对P19ARF表达抑制封闭细胞衰老途径，从而抑制细胞凋亡，当TBX2异常累及到一定程度后可导致细胞发生恶性病变[9]。TBX2高表达可使癌组织突破基底膜向肌层浸润性生长，利于提高癌组织侵袭能力，促进前列腺癌组织向增殖更快、恶性程度更高的方向演变[10-11]。本次研究结果显示，PCa组TBX2阳性表达率较BPH组高，提示PCa患者存在TBX2高表达。目前临床认为EMT未肿瘤迁移侵袭的开始，其过程主要表现为上皮细胞标志物E-cadherin缺失，N-cadherin、Vimentin水平上升[12-13]。本次研究结果显示，PCa患者中阳性组临床分期、PSA水平、EMT相关蛋白表达量均与阴性组有显著差异，TBX2表达与前列腺癌EMT标志蛋白中E-cadherin呈正相关性，与N-cadherin、Vimentin呈负相关性，提示TBX2基因具有癌基因显著特征，与肿瘤浸润侵袭有密切关系，可有效评估病情进展风险，为肿瘤预后及生物治疗提供新的关键因子[14-15]。

综上所述，TBX2高表达在PCa发生及发展中发挥着重要作用，其阳性表达水平可能与Pca恶性程度呈正相关性，研究TBX2阳性表达在评估PCa进展风险、制定临床治疗方案中有潜在价值，TBX2表达也是影响PCa预后的关键因素。