白藜芦醇对酒精依赖大鼠肝脏的影响

刘洪凤，郑天翼，王瑞媛，刘 勇 ，杨 勇，关利新*

（1.黑龙江中医药大学基础医学院，哈尔滨 150040；2.牡丹江医学院，黑龙江 牡丹江 157011）

酒精依赖可以导致多种器官损伤，尤以肝脏损伤为主，具有较高的发病率和病死率。白藜芦醇（resveratrol，Res）属于二苯乙烯多酚化合物，是一种天然的非黄酮类多酚化合物，可从自然界多种常见植物及中药材藜芦、虎杖中提取[1]。白藜芦醇具有多种药理活性，可以预防多种慢性疾病[2]。白藜芦醇具有优秀的抗氧化、降糖、抗炎等作用[3-4]，已成为目前中药单体研究的热点。本研究旨在探讨白藜芦醇对酒精依赖大鼠肝损伤的保护作用，以期为临床有效治疗酒精依赖患者肝损伤寻找有效的中药单体成分并提供科学的实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验药品 白藜芦醇（solarbio），批号R8350。

1.2 实验动物 SPF 级6 周龄雄性SD 大鼠54 只，体质量170～220 g。许可证号：SYXK（黑）2019-003，于SPF 级鼠类实验室牡丹江医学院实验动物中心进行动物模型构建。本次动物实验经牡丹江医学院伦理委员会审核批准，符合实验动物伦理要求。

1.3 模型制备 SPF 级雄性SD 大鼠随机数字表法分为正常组10 只和20%酒精依赖模型组44 只，进行适应性喂养1 周后，单笼饲养，开始实验。正常组为双瓶100 mL 蒸馏水，模型组为1 瓶100 mL 蒸馏水和1瓶100 mL 20%酒精。正常组放置双瓶蒸馏水，模型组大鼠第1 天放置水瓶和酒精瓶，24 h 后记录大鼠的饮酒量、饮水量，同时将酒精瓶替换为水瓶，形成一个循环，每次更换水瓶和酒精瓶的左右位置、更新水和酒精，每周检测体质量变化，连续造模4 周，共28 d。饮酒组大鼠的酒精摄入量[＞3.15 g/（kg·24 h）]和酒精偏好（饮酒量占总液体摄入量的百分比）逐渐稳定时，即成功制备SD 大鼠酒精依赖模型[5]。建模过程中由于大鼠饮酒量不足和体质量原因剔除4只大鼠，然后将建模成功的酒精依赖模型大鼠每组10 只，随机分为4 组，酒精依赖模型组、白藜芦醇高、中、低剂量治疗组。白藜芦醇高、中、低剂量治疗组灌胃[100、50、25 mg/（kg·d）]白藜芦醇，正常组、酒精依赖模型组给予等体积的生理盐水灌胃，连续灌胃14 d。用药结束后，取血，分离血清备用，取肝脏组织备用。

1.4 样本采集与指标检测 白藜芦醇治疗结束后，禁食不禁水 12 h，采集血液后3 000 r/min 离心 15 min，分离血清备用。测定血清中 TC、TG、LDL、HDL、ALT、AST、γ-GT 含量。

1.5 光镜观察肝细胞形态变化 将大鼠麻醉后灌注固定，快速切取肝组织，应用4%甲醛固定备用，HE 染色观察肝脏病理形态变化。

1.6 统计学方法 采用SPSS 22.0 进行数据分析，实验数据采用EXCEL 表录入，计量资料以均数±标准差（）表示，方差分析进行组间比较，LSD进行多重比较。以P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 白藜芦醇对酒精依赖大鼠血清 TC、TG、LDL、HDL 水平影响 见表 1。

表1 各组大鼠血清 LDL、HDL、TC、TG 水平比较（，n =10） mmol/L

表1 各组大鼠血清 LDL、HDL、TC、TG 水平比较（，n =10） mmol/L

注：与正常组比较，### P ＜0.001；与模型组比较，△△△ P ＜0.001

2.2 白藜芦醇对酒精依赖大鼠血清中 ALT、AST、γ-GT影响 见表 2 。

表2 各组大鼠血清 ALT、AST、γ-GT 水平比较（，n =10） U/L

表2 各组大鼠血清 ALT、AST、γ-GT 水平比较（，n =10） U/L

注：与正常组比较，### P ＜0.001；与模型组比较，△△△ P ＜0.001

2.3 白藜芦醇对酒精依赖大鼠的肝组织病理形态学的影响 正常组大鼠在光镜下可见多个肝小叶且肝小叶的结构清晰，肝索及肝窦排列整齐，呈放射状，汇管区结构清楚，肝细胞形态规则完整，胞浆丰富，细胞核结构清晰，未见扩张、脂变及细胞坏死等病变。酒精依赖模型组大鼠可见肝小叶肝索紊乱，肝窦受压。汇管区可见轻微炎细胞浸润。肝细胞可见明显胞浆疏松变性改变，肝组织可见有明显的空泡样变性，有部分肝细胞核由于受到脂滴挤压而引起细胞核移位，细胞体肿大呈球形，胞浆嗜酸性增强。白藜芦醇治疗组可见肝组织的损伤均有不同程度改善，可见肝组织形态、结构有所恢复，肝细胞层次较规则排列，肝小叶结构较清晰，肝细胞水肿基本改善，仍可见散在浸润的炎性细胞及脂滴。白藜芦醇高剂量组可见肝细胞组织形态、结构改善明显，肝细胞接近正常，肝细胞水肿现象显著减轻，小叶间结构明显恢复，仍可见小叶间少量脂滴。白藜芦醇中剂量组可见肝细胞组织形态、结构基本恢复，肝细胞排列层次较规则，有少量脂滴。白藜芦醇低剂量治疗组有改善但不明显。见图1。

图1 白藜芦醇对酒精依赖大鼠肝脏损伤后肝脏组织形态学的影响（HE 染色，×200）

3 结语

酒精诱导的肝组织损伤发病机制非常复杂，肝细胞可见轻微脂肪病理改变。长期饮酒会使乙醛的生成量增加，改变了线粒体内NADH/NAD 平衡，引起脂肪代谢异常。酒精在体内可加速脂肪动员，产生大量脂肪酸，促进肝脏 TG 的合成[6]，酒精代谢过程中产生大量产物堆积，加重了肝毒性[7]，引起肝细胞脂肪堆积，导致脂肪肝。本试验结果发现，模型组肝细胞表现出脂肪变性的病理改变，白藜芦醇可降低乙醇对肝细胞的病理损伤程度，酒精依赖模型组大鼠脂质代谢发生紊乱程度明显加重，白藜芦醇治疗组大鼠血脂有不同程度改善，白藜芦醇高剂量治疗组疗效最好，白藜芦醇中剂量治疗组疗效没有高剂量组显著。白藜芦醇对酒精依赖大鼠脂质代谢紊乱具有一定调节作用。酒精依赖模型组大鼠血清中 ALT 和 AST 较正常组显著升高，说明酒精对大鼠肝脏有显著损害。白藜芦醇对酒精依赖大鼠肝功相关指标具有改善作用。

本研究证实，白藜芦醇对肝损伤具有保护作用，为白藜芦醇的临床应用提供了初步依据，具体分子生物学机制有待于进一步深入研究。