急性脑梗死患者静脉溶栓前后闭锁蛋白、甲基CpG结合蛋白2、钙调蛋白表达与功能结局的关系

何健萍 彭国斌

河南省周口市第一人民医院神经内科 466700

急性脑梗死(Acute cerebral infarction，ACI)与动脉受血栓阻塞相关，进而导致脑组织缺血，而随着缺血时间的延长，其程度逐渐加重，最终导致缺血半暗带缩小，因此临床上认为，ACI的治疗应以挽救缺血半暗带为主要治疗原则[1-2]。阿替普酶静脉溶栓疗法可在短时间内修复缺血半暗带损伤，恢复血流，属临床治疗ACI的主要手段[3]。但随着静脉溶栓疗法的逐渐研究发现，此种治疗手段可能会存在部分血栓残留，而部分血栓残留不利于功能的恢复[4]。因此早期预测ACI患者静脉溶栓后功能结局，制定相对应的挽救措施，可改善功能结局，提高静脉溶栓疗效，鉴于此，在本研究中分析闭锁蛋白(Occludin)、甲基CpG结合蛋白2(Methyl-CpG-binding protein 2，MECP2)、钙调蛋白(Calmodulin，CAM)在ACI患者静脉溶栓前后表达变化，并分析与功能结局的相关性，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取2020年1月—2022年1月我院收治的符合《中国急性缺血性脑卒中诊治指南2018》[5]中ACI诊断标准的ACI患者134例作为ACI组，同期进行健康体检的健康志愿者50例作为NC组。两组一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。纳入标准：ACI组首次诊断，均行静脉溶栓治疗，符合静脉溶栓治疗指征，且为首次接受静脉溶栓治疗。NC组无脑血管疾病，身体健康。两组均自愿参与，签署了知情同意书，且获得我院伦理委员会批准。排除标准：年龄低于18岁；创伤性脑损伤；存在急性脑出血症状；无法沟通、精神异常者；有恶性肿瘤；重要脏器功能障碍。

表1 NC组、ACI组一般资料对比

1.2 方法

1.2.1 Occludin、MECP2、CAM检测：抽取NC组入组后、ACI组静脉溶栓前空腹静脉血3ml，在离心半径r=5cm，转速为3 000r/min下离心，离心10min后保存于-80℃冰箱中，使用南京德铁DeTie酶标仪测定Occludin、MECP2、CAM水平。

1.2.2 静脉溶栓治疗方案：ACI患者入院后均行阿替普酶静脉溶栓治疗，根据患者体重使用不同相对治疗剂量的阿替普酶，标准剂量为0.9mg/kg，总剂量的10%在60s内静脉推注完毕，剩余90%以输液泵持续输注，在60min内输注完毕，所用的最大剂量不超过90mg，在患者接受静脉溶栓治疗期间不使用抗血小板聚集药物，在24h后做头颅CT复查，以排除患者颅内出血，指导患者使用阿司匹林，200mg/d，2周后改为100mg/d，持续治疗90d。

1.2.3 功能结局评价：在ACI患者静脉溶栓后90d时，使用日常生活活动能力量表评价功能结局，量表包括吃饭、穿衣等，量表最低分为0分，最高分为100分，若患者评分高于60分则说明静脉溶栓后功能结局优良，若患者评分低于60分则说明静脉溶栓后功能结局不良。

1.3 观察指标 (1)对比NC组、ACI组Occludin、MECP2、CAM表达水平。(2)在ACI组静脉溶栓治疗后90d抽取静脉血，测定Occludin、MECP2、CAM表达水平，对比静脉溶栓治疗前后Occludin、MECP2、CAM表达水平差异。(3)根据ACI患者静脉溶栓后功能结局分为结局不良组、结局良好组两个亚组，对比两组Occludin、MECP2、CAM表达水平差异。(4)采用Pearson相关性分析Occludin、MECP2、CAM与ACI患者静脉溶栓后功能结局的相关性。(5)采用ROC曲线分析Occludin、MECP2、CAM对ACI患者静脉溶栓后功能结局的预测价值。

2 结果

2.1 NC组、ACI组Occludin、MECP2、CAM表达水平对比 ACI组Occludin水平低于NC组，MECP2、CAM水平高于NC组，差异具有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 NC组、ACI组Occludin、MECP2、CAM表达水平对比

2.2 ACI患者静脉溶栓治疗前后Occludin、MECP2、CAM表达水平对比 ACI患者溶栓后90d Occludin水平高于溶栓前，MECP2、CAM水平低于溶栓前，差异具有统计学意义(P<0.05)。见表3。

2.3 ACI患者静脉溶栓后不同功能结局间Occludin、MECP2、CAM表达水平对比 结局不良组Oc-cludin水平低于结局良好组，MECP2、CAM水平高于结局良好组，差异具有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表3 ACI患者静脉溶栓治疗前后Occludin、MECP2、CAM表达水平对比

表4 ACI患者静脉溶栓后不同功能结局间Occludin、MECP2、CAM表达水平对比

2.4 Occludin、MECP2、CAM与ACI患者静脉溶栓后功能结局的相关性 由Pearson相关性分析发现，Occludin、MECP2、CAM与ACI患者静脉溶栓后功能结局相关(r=-0.812、0.705、0.855，均P<0.05)。

2.5 Occludin、MECP2、CAM对ACI患者静脉溶栓后功能结局的预测价值 ROC曲线显示，相比于Occludin、MECP2、CAM单项预测，三项联合预测效能最佳，三项联合预测的AUC为0.912(95%CI=0.828～1.036)，敏感度为89.00%，特异度为81.50%，P<0.001。见图1。

3 讨论

Occludin被认为是与紧密连接相关的跨膜蛋白，羧基端、氨基端均在胞内定位，而两个胞外环伸向细胞间隙[6]。研究表明[7]，Occludin既属于紧密连接的结构蛋白，又属于功能蛋白，具有维持细胞极性和调节上皮细胞渗透性的作用，与血脑屏障功能相关。血脑屏障是位于脑细胞与血液间的屏障，在机体处于正常状态下时，可隔开中枢神经系统和外周血液，经选择性向脑组织输送营养物质和限制炎性因子和毒性物质的进入，进而稳定整个中枢神经系统的内环境，而Occludin在中枢神经系统内环境的稳定中发挥着重要的作用[8]。报道称[9-10]，在脑脑缺血疾病中，外周血中Occludin含量均降低，且其研究认为，Occludin的变异、缺失以及减少均会改变血脑屏障的通透性。刘俊超等[11]在其研究中表明，Occludin与急性脑梗死患者认知障碍有关，在急性脑梗死中含量降低。本研究结果示：与NC组相比，ACI组患者Occludin表达明显降低。此结果与上述研究结果保持一致，且分析患者静脉溶栓前后表达变化发现，在静脉溶栓后其表达升高。此结果提示：Occludin在急性脑梗死发生时因组织缺血而表达降低，经溶栓治疗后临床症状明显改善，进而表现为治疗后降低被纠正，含量升高。

MECP2属于甲基化CPG结合蛋白的一种类型，MECP2蛋白包含3个结构域，包括C末端结构域、转录抑制结构域、甲基CPG结合结构域[12-13]。研究认为[14-15]，其作为一种具有转录调节功能因子，经结合甲基化DNA、识别CPG结合域而发挥促进神经系统发育、控制和稳定突出兴奋性的作用。MECP2作为神经元中重要的转录调控基因，当其功能异常时可经抑制下游靶基因的表达而诱发多种疾病的发生，如帕金森、脑梗死等[16]。高英英等[17]研究发现，MECP2表达水平的升高预示着急性脑梗死的风险增大。本研究同样发现，MECP2在ACI患者中表达升高，与上述研究结果保持一致。之后对比分析患者静脉溶栓前后MECP2表达变化，结果显示，MECP2在溶栓治疗后水平降低，此结果说明，在患者接受静脉溶栓治疗后神经元损伤被修复，此时MECP2含量降低。

报道称，钙超载是加重脑组织缺血损伤的原因之一，在脑组织缺血损伤加重过程中，钙超载和钙离子之间动态平衡被打破，此时外周血中CAM含量明显增加[18-19]。CAM属于保守性较高的哑铃状蛋白，属于钙离子的受体蛋白，其可与靶蛋白产生特异性结合，而对机体内蛋白质、多种酶的活性进行调节[20]。研究发现[21]，在脑组织发生缺血损伤后钙离子超载，超载的钙离子进入至神经元内，激活钙离子/CAM依赖性的信号转导通路进而损伤脑细胞。唐彦等[22]在其研究中验证了急性脑梗死患者血CAM水平与神经功能缺损严重程度相关，缺损越严重CAM水平升高更加剧。本文亦证实了CAM在ACI患者中表达升高，且在溶栓后钙超载和钙离子之间恢复原有平衡，进而表现为溶栓后CAM水平降低。

研究认为，功能结局是反映ACI患者静脉溶栓长期疗效的重要指标，功能结局越佳说明患者接受静脉溶栓治疗效果越优。本研究结果显示，Occludin、MECP2、CAM与ACI患者静脉溶栓后功能结局相关，提示三者可作为早期预测ACI患者静脉溶栓长期疗效的敏感指标。

综上可知，ACI患者Occludin水平降低，MECP2、CAM水平升高，静脉溶栓可改善Occludin、MECP2、CAM水平，而溶栓功能结局不良与Occludin、MECP2、CAM异常有关。