CDK2及PCNA在宫颈上皮内病变中的表达及价值研究①

李明娜，李 想，孙玉鸿

(1.佳木斯大学，黑龙江 佳木斯 154007；2.双鸭山市人民医院，黑龙江 双鸭山 155100)

宫颈癌(cervical cancer，CC)是全球女性第4大最常见的癌症，也是女性癌症死亡的第4大原因[1]。近年来，有研究报道许多疾病都存在渐进性细胞增殖异常及细胞周期调控系统的破坏[2]。增殖细胞核抗原(PCNA)是目前较为公认的可作为评价细胞增殖状态的客观指标。细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)调节细胞周期中的多个重要事件。目前对于CDK2和PCNA与宫颈上皮内病变进展为宫颈癌之间联系的研究较少。本研究拟探讨CDK2和PCNA在不同程度宫颈上皮内病变中的表达及相关性，以评价二者作为预测宫颈病变进展的可能性。

1 资料与方法

1．1 一般资料

收集2021-07～2022-06于我院进行病理确诊的不同程度宫颈病变患者石蜡切片共116例，其中同期在本院行子宫肌瘤手术患者的宫颈组织20例,作为正常宫颈组。将病变组按照不同病变程度，分为低级别宫颈上皮内病变组(LSIL)32例、高级别宫颈上皮内病变组(HSIL)34例和宫颈鳞癌组(SCC)30例。所有组织均经两位高年资病理医师确定符合本研究要求，术前均未进行放化疗等抗肿瘤治疗。

1.2 方法

CDK2、PCNA的检测:采用免疫组化法检测CDK2、PCNA的表达。所用兔抗人CDK2单克隆抗体、兔抗人PCNA单克隆抗体、二抗、DAB显色试剂盒均购自上海碧云天生物技术有限公司。常规进行脱蜡、水化组织切片，按照说明书条件进行抗原修复。阳性对照采用已知阳性的乳腺癌切片，阴性对照用PBS代替一抗。

1.3 结果判读标准

免疫组化检测CDK2以细胞质呈棕黄色为阳性，PCNA以细胞核呈棕黄色为阳性。每张切片随机观察5 个高倍视野(×400)，每个视野计数100个细胞，结果采用半定量积分法：将阳性细胞所占的百分比分值和染色强度分值相乘为结果：0～2分为阴性，3 分及以上为阳性。

1.4 统计学方法

采用SPSS26.0软件进行分析，各组间的比较采用χ2检验，相关性分析采用Speraman检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CDK2在不同程度病变中的表达

CDK2在各组中表达差异显著(χ2=31.041，P<0.01)，表达率由低到高依次是正常宫颈组10.0%、LSIL组31.3%、HSIL组64.7%、SCC组80.0%。SCC组CDK2的表达显著高于正常宫颈组和LSIL组，(χ2=23.558，χ2=14.859，均P<0.01)，但正常组与LSIL组，HSIL组与SCC组差异无统计学意义(χ2=3.131，χ2=1.844，P=0.077，P=0.174)，见表1。

表1 CDK2在不同程度宫颈上皮内病变的表达

2.2 PCNA在不同程度病变中的表达

PCNA在各组中表达差异显著(χ2=30.554，P<0.01)，表达率由低到高依次是是正常宫颈组30.0%、LSIL组34.4%、HSIL组67.6%、SCC组93.3%。SCC组PCNA的表达显著高于正常宫颈组、LSIL组、HSIL组(χ2=22.120，χ2=23.065，χ2=6.496，P<0.01，P<0.01，P<0.05)，但LSIL组与正常宫颈组差异无统计学意义(χ2=0.107，P=0.774)，见表2。

表2 PCNA在不同程度宫颈上皮内病变的表达

2.3 CDK2、PCNA与宫颈病变相关性分析

经Spearman相关性分析结果表明，CDK2与PCNA在不同级别宫颈上皮内病变的表达呈正相关，有统计学意义(r=0.766，P=0.000)，见表3。

表3 CDK2和PCNA在不同程度宫颈上皮内病变的相关性

3 讨论

细胞增殖由复杂的蛋白质网络控制，这些蛋白质网络决定了细胞周期事件的顺序和时间。CDK2是完成G1期和G1～S期过渡的一个关键的细胞周期蛋白依赖性激酶。CDK2与不同的cyclin结合发挥不同的作用，并促使细胞周期规律进行[3]。CDK2表达量的改变，与肿瘤的发生密切相关，过表达可促使乳腺癌[4]、肝癌[5]、宫颈癌[6]等肿瘤的发生发展。在本研究中，CDK2在HSIL组和SCC组中的表达显著高于其他组，可以推测CDK2的过表达对宫颈上皮内病变进展有促进作用。研究发现，PCNA在细胞周期调控方面发挥重要作用，PCNA与cyclingE-CDK2形成的复合物是控制S期的入口点，进入S期后PCNA又与CDK2-cyclinA形成复合物，磷酸化复制因子C和 DNA连接酶I[7]。如果S期发生细胞损伤，P21通过结合 PCNA 使Cyclin-CDK 复合物作用灭活，从而抑制 DNA 聚合酶 δ 的激活，直接抑制 DNA 受损细胞在 S 期进一步复制[8]。当宫颈病变发生时，P21结合PCNA的能力被抑制，不能阻止受损DNA继续复制，最终导致细胞恶性变[9]。本研究中，PCNA在SCC组中的表达水平，显著高于正常宫颈组、LSIL组、HSIL组，与万兵[10]等人的研究结果一致。通过Spearman相关性分析，CDK2与PCNA呈正相关，提示二者在病变进展中起协同作用。综上所述，在宫颈上皮内病变演变过程中，CDK2和PCNA的表达逐渐增加，进一步促进损伤细胞的恶性增殖能力，最终导致细胞的恶性变，二者联合检测有望成为预测宫颈上皮内病变进展的分子标志。