IL-35、IL-37在初发2型糖尿病患者外周血清中表达水平的研究*

谢彦鹏，练昌颖，张建民，吴倩宇，肖光文△

1.嘉应学院医学院附属医院综合科，广东梅州 514031；2.嘉应学院医学院基础部，广东梅州 514031

2 型糖尿病(T2DM) 目前被认为是威胁人类健康的重要疾病之一，也是感染、视网膜病变、肾病等其他疾病的重要危险因素之一，其发病机制尚不明确。T2DM 是由遗传、行为、环境等多种危险因素共同参与和相互作用引起的多病因疾病，其发病机制主要涉及胰岛 β细胞功能紊乱和胰岛素抵抗等关键环节[1]。炎症相关指标C反应蛋白(CRP)和白细胞介素(IL)-6被认为可以预测T2DM[2]。其中CRP甚至被认为是预测中年男性T2DM发展的独立危险因素，另有流行病学证据证明了慢性炎症与2型糖尿病之间存在密切的相关性[3-4]。许多炎症相关的疾病的发病过程中抑制炎症相关的细胞因子IL-35和IL-37在其发病过程中发挥了一定的保护作用。IL-35和IL-37在T2DM的发病过程中是如何表达及是否同样发挥保护作用有待探明。本研究为了探明IL-35和IL-37在初发T2DM患者血清中的表达水平及与糖尿病相关指标的相关性，收集了53例初发T2DM患者和50例健康体检者的血清，比较其血清中IL-35、IL-37的表达水平的差异，同时分析IL-35、IL-37与T2DM患者糖尿病相关指标的相关性，为进一步明确T2DM的发病机制提供资料，现将研究情况报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集选择 2020年 7 月至2021 年12月嘉应学院医学院附属医院(下称本院)内科收治的53例初发T2DM患者为初发T2DM组，纳入标准：(1)均符合《中国2型糖尿病防治指南》(2020版)中对T2DM的诊断标准；(2)初发糖尿病患者，年龄≤75岁，具备基本的听说读写和沟通能力；(3)空腹血糖水平高于7.0 mmol/L。排除标准：(1)Ⅰ型糖尿病；(2)患有糖尿病急性并发症、严重心脑血管疾病、严重血液疾病、严重脏器病变、急性感染和其他内分泌代谢性疾病；(3)近期服用过钙剂药物、维生素D类药物或日光暴晒者；(4)正在接受降糖或胰岛素治疗者；精神意识障碍、癫痫疾病者。另选取同期来本院进行健康体检的50例体检健康者作为健康对照组，年龄≤75岁。本研究经本院伦理委员会审核获批，所有入选患者和体检健康者均要求知晓本研究并签署知情同意书。

1.2方法 由专人负责测定患者和健康志愿者身高、体质量、血压等，计算体质量指数(BMI)。采用贝克曼AU5800生化仪对空腹血糖(FBG)、血脂谱及尿酸等进行检测，采用化学发光免疫法测定血清空腹胰岛素(FINS)水平，试剂盒购自北京科美生物技术有限公司，采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定IL-35和IL-37 水平，试剂盒购自武汉菲恩生物科技有限公司，采用高效液相色谱法测定糖化血红蛋白(HbA1c)，仪器和配套试剂购自赛默飞公司。稳态模型评估法计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)=FINS×FPG×22.5-1。

1.3标本采集 空腹12 h采集静脉血，其中1 mL血样肝素抗凝管收集，待测糖化血红蛋白(HbA1c)浓度，3～5 mL 血样非抗凝试管收集后37 ℃孵育30 min后，3 000 r/min 离心15 min分离 2 mL血清于-70 ℃冰箱中冻存，待测IL-35、IL-37和胰岛素浓度，其余血清用于测定FBG、血脂谱及尿酸等。

2 结 果

2.1健康对照组和初发T2DM组血清IL-35、IL-37及临床指标 纳入研究的两组人群在性别和年龄上比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)，具有可比性。初发T2DM组BMI、FBG、FINS、HbA1c和HOMA-R显著高于健康对照组，差异有统计学意义(均P<0.05)，IL-35和IL-37显著低于健康对照组，差异有统计学意义(均P<0.05)，而胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、尿酸等指标两组间比较，差异无统计学意义(均P>0.05)，见表1～2。

表1 健康志愿者和初发T2DM患者性别、年龄、BMI和血清血脂谱的比较

表2 健康志愿者和初发T2DM患者血清尿酸、糖尿病相关指标、IL-35和IL-37表达的比较

2.2不同特征的初发T2DM患者血清IL-35和IL-37水平比较 初发2型糖尿病患者血清IL-35和IL-37水平分别在不同年龄(60岁为界)、不同性别、是否肥胖(BMI以25 kg/m2为界)及是否有高血压等方面比较，差异无统计学意义(均P>0.05)，在是否有冠心病上比较，差异有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表3 不同特征的初发T2DM患者血清IL-35、IL-37水平比较

2.3初发T2DM患者血清IL-35和IL-37表达水平与其他指标的相关性分析 初发T2DM病患者血清IL-35和IL-37均与FPG、FINS和HOMA-R呈负相关(均P>0.05)，与胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、尿酸和HbA1c等其他指标无明显的相关性(均P>0.05)，IL-35与IL-37之间呈正相关(P>0.05)，见表4。

表4 初发T2DM患者血清IL-35、IL-37水平与其他指标的Pearsom线性相关性分析结果

3 讨 论

BETTINI等[6]通过建立 NOD.RIP-IL35转基因小鼠模型，使IL-35仅在胰岛β细胞内特异性表达，来探讨其对自身免疫性糖尿病发病的影响及机制，经研究发现，在NOD小鼠上，IL-35可以抑制原发性和继发性自身免疫性糖尿病的发生。CONWAY等[7]研究表明，1型糖尿病(T1DM)患者的血清中IL-35的表达显著降低，且IL-35可通过抑制T1DM鼠模型的炎症反应等改善和控制大鼠的血糖水平。另有研究显示IL-37可以防御小鼠肥胖引起的炎症和胰岛素抵抗，而中央型肥胖是T2DM发病的环境因素之一[8]。这些研究都表明IL-35和IL-37在T2DM的病因和发病机制中可能起到保护作用。但从临床T2DM患者的角度去探讨IL-35和IL-37的表达水平及是否起到保护作用的研究目前报道甚少，考虑到许多T2DM患者在治疗过程中受到药物或其他因素的影响，对IL-35和IL-37表达水平量可能存在较大影响，因此本文把研究对象设定为初发T2DM患者。从研究情况来看，初发T2DM组血清IL-35和IL-37的水平均明显低于健康对照组，这表明IL-35和IL-37在T2DM发病初期是处于下调状态的，这与IL-35和IL-37在一些其他炎症性疾病如炎症性肠病、心肌炎和支气管哮喘急性发作期等的表达水平也呈现下调相类似，可能促使其在T2DM发病初期炎症负向调节作用中表达水平量出现明显减少[9-11]。

并发冠心病是T2DM患者死亡的重要原因之一，大部分T2DM患者存在早期冠状动脉粥样硬化，当二者合并时，常呈现广泛的弥散性病变，表现为更差的预后和更高的死亡率[12]。本研究中初发T2DM并发冠心病人群血清IL-35和IL-37的水平显著低于无并发冠心病人群。IL-35和IL-37在肿瘤、炎症和自身免疫性疾病等疾病中发挥重要作用，往往与疾病的严重程度及预后存在相关性。T2DM合并冠心病人群血清IL-35和IL-37水平的降低，表面可能导致相对单纯T2DM更严重的抑炎/促炎过程的失衡，进一步促进疾病的发生。

目前，IL-35被认为在治疗风湿[13]、慢性阻塞性肺疾病[14]和心肌炎[7]等疾病中可能有较好的运用价值，同时被认为可以成为判断治疗效果和预测预后的重要指标。IL-37同样被认为能缓解哮喘的过敏性炎症，可以减少炎症细胞的浸润，并可以减轻气道高反应性[15]。在炎症性疾病中，IL-37 能够抑制脂多糖诱导的 DC 的炎性细胞因子的分泌和炎性细胞因子基因的表达，还能降低 Toll 样受体激动剂刺激产生的炎症因子，从而起到抑制固有免疫的作用[16]。IL-37 被认为也是一个可以作为一种治疗某些肿瘤、过敏性和炎症性疾病来开发的细胞制剂，并且在疾病预后疗效的判断方面被认为有重要的价值[17]。本研究着重分析了T2DM患者IL-35和IL-37与血脂谱、尿酸及糖尿病常规检测指标之间的相关性，寻找IL-35和IL-37作为糖尿病疗效判断指标的可能性。结果显示IL-35和IL-37与FPG、FINS和HOMA-R存在一定的负相关性，而与血脂谱相关指标、尿酸和HbA1c相关性较弱或无相关。这进一步证实了IL-35和IL-37在T2DM病因及发病机制可能有一定的保护作用，可能也能成为判断糖尿病疗效的重要指标之一。

综上所述，初发T2DM患者血清中IL-35和 IL-37的水平表达比健康对照呈现下调状态，其可能在T2DM病因及发病机制中起保护作用。