边鸡源乳酸菌饲喂雏鸡免疫效果初探

肖明婧，杨逢清，闫芳

（山西农业大学 动物医学学院，山西 太谷 030801）

由于滥用抗生素，导致大量耐药细菌，特别是多重耐药致病菌的出现，并广泛传播，不仅给人类健康造成重大威胁，也导致家畜致病和致死率的上升[1]。目前，已开发出多种饲料中添加的抗生素替代物，主要包括生物酶制剂、益生菌、合生素和中药提取物等，其中益生菌在养殖业中的发展势头迅猛，应用广泛，并已取得良好的效果[2]。

乳酸菌因其可产生抵抗外界病原微生物入侵的相关代谢产物而备受关注，这些物质可抑制致病微生物的生长、定植和感染宿主消化道，并可维持宿主消化道的健康和菌群平衡[3]。机体免疫细胞在乳酸菌菌体和其代谢产物的刺激下，产生了可增强机体免疫应答的一系列物质[4]。王蕾等[5]研究表明，采用乳酸菌灌胃后，动物的饲料转化率提高，免疫力增强，生产性能得到很大提升。

边鸡是一种适宜在晋北地区饲养的地方品种，具有较强的抗病力和适应性，在耐粗饲方面表现优良，因其蛋肉两用性受到消费者欢迎，被列入农业农村部《畜禽遗传资源保护名录》[6]。本研究分离了边鸡肠道中3株优势乳酸菌，通过比较添加混合乳酸菌与添加抗生素对雏鸡体质量、免疫力、抗氧化能力和抗体水平等指标的影响，旨在进一步探究将乳酸菌作为饲料添加剂替代抗生素的可行性。

1 材料和方法

1.1 试验材料

1日龄鸡雏100只（山西康牧养殖专业合作社）。G（唾液乳杆菌，GenBank登录号：MN448316）、Y（植物乳杆菌，GenBank登录号：MT645503）和F（嗜酸乳杆菌，GenBank登录号：MT645504）3株乳酸菌菌株均分离自边鸡小肠。乳酸菌细菌培养基购自北京索莱宝生物科技有限公司，血清免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）和抗氧化试剂盒购自太原安尼摩尔生物科技有限公司，鸡新城疫（NDV）疫苗La Sota株购自武汉塞维尔生物科技有限公司、新城疫抗原和阳性血清购自北京擎科生物有限公司。

1.2 试验方法

1.2.1 混合菌液制备 分别于MRS液体培养基中接种G、Y、F等3种菌株，37 ℃下摇菌24～48 h，培养至活菌数达1.0×1010cfu/mL后，用生理盐水稀释至活菌数分别为1.0×109、1.0×108cfu/mL。将3株不同浓度乳酸菌按照体积比为1∶1∶1混合，配制成3种浓度的混合菌液。

1.2.2 试验动物的分组、饲养管理和免疫接种 根据《饲料添加剂安全使用规范》[7]和《微生物饲料添加剂通用要求》[8]设计试验。选取体质量相近的1日龄雏鸡100只，随机分成对照组、抗生素添加组（50 mg/kg金霉素）和高剂量（1.0×1010cfu/mL）、中剂量（1.0×109cfu/mL）、低剂量（1.0×108cfu/mL）混合乳酸菌组，每组20只。预饲期1～7 d，饲喂相同日粮，试验期8～42 d，混合乳酸菌组每日灌服不同浓度的乳酸菌1 mL/只，对照组和抗生素组灌服等量生理盐水。人工饲喂，自由采食饮水，温度为25 ℃，相对湿度为50%～60%，定期通风。在第7天和第25天，采用常规免疫方法（滴鼻点眼）给所有鸡雏接种NDV疫苗。

1.2.3 免疫指标测定 试验第6、24、42天，每组选取6只雏鸡采血，离心后将血清用于血凝试验（HA）和血凝抑制试验（HI）以测定NDV抗体效价。预饲期第7天空腹称质量，42 d采血，分离血清后冷冻保存，用于抗氧化指标和血清免疫球蛋白含量的测定。采血后屠宰，分离胸腺、脾脏和法氏囊后称质量，计算免疫器官指数。

1.3 统计分析

分别采用Excel 2016和SPSS 21.0对雏鸡体质量、免疫器官指数、血清免疫球蛋白含量、血清抗氧化指标、新城疫抗体（NDV）效价进行统计分析，采用单因素方差分析（ANOVA）进行组间比较。

2 结果与分析

2.1 添加混合乳酸菌对雏鸡体质量的影响

7、42 d时各组雏鸡体质量比较如表1所示。

表1 7、42 d时各组雏鸡体质量比较Tab.1 The comparison of body weight of chicks in different groups at 7 days and 42 days g

由表1可知，7 d时各试验组与对照组体质量无 显著差异（P＞0.05），42 d时各试验组与对照组雏鸡体质量差异显著（P＜0.05），中剂量组的体质量与抗生素组无显著差异（P＞0.05）。说明在灌服混合乳酸菌后雏鸡体质量增长较快，促生长效果显著（P＜0.05）。

2.2 混合乳酸菌对雏鸡免疫器官指数的影响

由图1可知，脾脏、胸腺、法氏囊等免疫器官指数在服用混合乳酸菌后，试验组与对照组差异显著（P＜0.05）；虽然中剂量组在数值上高于抗生素组，但差异不显著（P＞0.05）。说明各免疫器官在灌服受试物后生长发育速度较快，灌服该受试物后可提高雏鸡抵抗外界应激的能力。

图1 各组雏鸡免疫指数比较Fig.1 The comparison of immunity indexes of chicks in different groups

2.3 混合乳酸菌对雏鸡血清免疫球蛋白的影响

各组雏鸡血清免疫球蛋白含量比较结果如图2所示。

图2 各组雏鸡血清免疫球蛋白含量比较Fig.2 The comparison of serum immunoglobulin content of chicks in different groups

由图2可知，服用混合乳酸菌后各剂量组和抗生素组与对照组血清中IgA含量差异显著（P＜0.05），中剂量组和抗生素组IgA含量无显著差异（P＞0.05）。各剂量组和抗生素组与对照组血清中IgG含量差异显著（P＜0.05），中剂量组与抗生素组和高剂量组之间无显著差异（P＞0.05），且抗生素组与高剂量组之间也无显著差异（P＞0.05）。各剂量组和抗生素组与对照组血清IgM含量差异显著（P＜0.05），IgM含量中剂量组高于抗生素组，但差异不显著（P＞0.05）。以上结果说明混合乳酸菌液可提高雏鸡血清中的免疫球蛋白含量，增强雏鸡免疫力。

2.4 混合乳酸菌对雏鸡血清抗氧化指标的影响

从图3可以看出，高剂量组和抗生素组与对照组的MDA含量差异显著（P＜0.05），而对照组和低剂量组无显著性差异（P＞0.05），中、高剂量组和抗生素组的MDA含量差异不显著（P＞0.05）。各剂量组与对照组的T-AOC含量差异显著（P＜0.05），中剂量组与抗生素组无显著性差异（P＞0.05）。高剂量组和抗生素组与对照组的SOD含量差异显著（P＜0.05），中剂量组和抗生素组之间差异不显著（P＞0.05）。各剂量组与对照组的GSHPx含量均存在显著差异（P＜0.05），中剂量组高于抗生素组，但差异不显著（P＞0.05）。上述研究结果表明，混合乳酸菌可有效提高血清中抗氧化物含量，提高机体抗氧化能力。

图3 各组雏鸡血清抗氧化指标比较Fig.3 The comparison of serum antioxidant indexes of chicks in different groups

2.5 混合乳酸菌对雏鸡新城疫抗体效价的影响

由表2可知，试验组雏鸡NDV母源抗体第6天时转为阴性。相比第6天，各组NDV抗体效价第24天时显著上升，且试验组与对照组之间差异显著（P＜0.05），中剂量组和抗生素组间无显著差异（P＞0.05）；在第2次免疫后，42 d时，各组NDV抗体效价均显著高于对照组（P＜0.05），中剂量组和抗生素组无显著差异（P＞0.05）。

表2 各组雏鸡新城疫抗体（NDV）效价比较Tab.2 Titer comparison of newcastle disease antibody（NDV） of chicks in different groups

3 结论与讨论

3.1 添加混合乳酸菌对雏鸡体质量的影响

体质量变化可直观地反映益生菌对动物机体的影响。益生菌的促生长作用已得到广泛证实，益生菌可通过调节肠道菌群平衡提高动物的消化吸收能力并起到促生长作用[9]。黄腾等[10]研究发现，使用植物乳杆菌饲喂蛋鸡后增质量效果明显，与本研究结果一致。表明添加抗生素和乳酸菌均可提高动物体质量，促进动物生长，且乳酸菌在一定程度上可替代抗生素在饲料中添加。

3.2 添加混合乳酸菌后对雏鸡免疫器官指数的影响

胸腺、脾脏和法氏囊是家禽中枢免疫、外周免疫和体液免疫的主要器官，上述器官的发育情况直接反映了机体的免疫水平，免疫器官相对质量的提高则反映了机体免疫系统的成熟和免疫功能的增强[11-12]。本研究发现，添加不同剂量的混合乳酸菌可刺激雏鸡免疫器官的生长发育，各组免疫器官指数与抗生素组无显著差异，但高剂量组并未表现出更好的效果，这与袁林等[13]的研究结果一致，说明给雏鸡饲喂一定剂量的混合乳酸菌可促进其免疫器官的生长发育。

3.3 添加混合乳酸菌对雏鸡血清免疫球蛋白水平的影响

血清免疫球蛋白在机体免疫活动过程中发挥着重要作用，免疫球蛋白是一类机体应对外界病原入侵过程中发挥重要作用的蛋白质分子，血清中此类物质的含量与机体抵抗外界病原入侵的能力有关[14]。IgG在病原微生物入侵机体的早期发挥了重要作用；IgM是分子量较大的免疫球蛋白，在病原微生物入侵早期发挥作用，但作用时间较短；IgA则主要在黏膜免疫中发挥作用，通过非特异性免疫协同作用清除机体内的有害微生物[14]。本研究中，添加混合乳酸菌后，血清中的免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）含量相比对照组显著提高，与袁文华[15]、贺驭[16]、邵洪伟[17]、周凌博等[18]的研究结果一致。中剂量组（1.0×109cfu/mL）与抗生素组的免疫球蛋白水平无显著差异，可以在一定程度上替代抗生素的使用。

3.4 添加混合乳酸菌对雏鸡抗氧化功能的影响

动物机体内氧化和抗氧化系统之间存在动态平衡关系，当动物患病或应激时，产生的过量自由基若无法及时清除会导致机体的损伤[19]，破坏正常细胞功能[20]。GSH-Px、SOD、T-AOC、MDA在机体抗氧化过程中发挥着重要作用，是衡量机体氧化和抗氧化能力的重要指标[20]。本研究结果显示，添加混合乳酸菌能显著提升机体中GSH-Px、SOD、T-AOC的含量并降低MDA的含量，且中剂量组（1.0×109cfu/mL）与抗生素组无显著差异。李乐[21]和刘砚涵等[22]研究也表明，采用乳酸菌饲喂蛋鸡可增强机体清除自由基的能力，加快蛋鸡的生长速度，并可替代抗生素在饲料中使用。

3.5 添加混合乳酸菌对新城疫抗体效价的影响

在家禽生产中，使用疫苗防控禽类流行性疾病的发生已成为主要手段[20]。沈玉林等[23]研究发现，疫苗的免疫效果受外界因素影响较大，饲料中霉菌和真菌产生的有害物质带来的疫苗效价抑制问题已成为养殖过程中一个不可忽视的因素。王兴勇等[24]研究发现，疫苗的效价与采用的生物安全防治措施有关，通过添加具有免疫增强效果的物质可提高机体的免疫力，目前已成为养殖和兽药生产部门研发过程中的重点。本研究表明，NDV抗体水平在饲喂混合乳酸菌液后明显提高，24 d时对雏鸡进行抗体水平检测可见抗体水平上升，二次免疫后，抗体水平仍较高，说明在上述免疫方案下，将乳酸菌结合NDV疫苗使用，可显著增强免疫效果。中剂量组（1.0×109cfu/mL）与抗生素组抗体水平无显著差异（P＞0.05），但高剂量组并未体现出免疫增强作用，表明试验结果受混合乳酸菌浓度的影响。

灌服乳酸菌混合液对雏鸡的体质量和免疫器官的发育具有促进作用，并提高了免疫力和机体清除氧化自由基的能力以及NDV抗体效价水平。本研究建议在饲料中添加混合乳酸菌的最佳浓度为1.0×109cfu/mL，在此浓度下与抗生素具有相近效果。