黄连解毒汤对急性期脑梗死大鼠胃动力的影响※

任志珍 唐 明 王佳宁 修小惠 李 红 丁 良 安朋朋△

(1.青岛市市南区中山路街道河南路社区卫生服务中心中医科，山东 青岛 266000；2.山东省青岛市中医医院(市海慈医院)神经内科，山东 青岛 266033；3.山东省青岛市中医医院(市海慈医院)急诊科，山东 青岛 266033；4.山东省青岛市中医医院(市海慈医院)检验科，山东 青岛 266033；5.山东省青岛市第三人民医院中医科，山东 青岛 266041)

急性脑梗死起病急骤，预后差，是临床上老年人的常见病、多发病、难治性疾病，严重危害人类健康[1]。随着脑—肠轴的发现，人们对急性脑梗死并发腹胀、便秘、腹泻等胃肠动力障碍的研究日益增多[2]。中医学认为，毒损脑络是急性脑梗死发生的重要病因病机，临床也多采用清热解毒通络法治疗脑梗死，并取得了确切疗效[3-4]。毒邪贯穿于脑梗死疾病的始终，胃肠动力的损伤自然也会受到“毒”的影响。为进一步探讨中医药治疗急性脑梗死的作用机制，我们采用黄连解毒汤灌胃治疗急性期脑梗死大鼠，动态观察黄连解毒汤对大鼠胃动素(MTL)和胃电图慢波振幅与频率的影响，以期为临床应用提供更有力的证据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 清洁级Wistar大鼠60只，雄性，10周龄，体质量(180±20)g，自由进食饮水，室内常规消毒，通风，温度保持在20 ℃左右，由山东大学动物实验中心提供，动物合格证号:0009265。

1.1.2 实验药物 黄连解毒汤(药物组成：黄连、黄柏、黄芩、栀子，按照3∶2∶2∶3的比例煎煮，药液煎煮浓缩至生药2 g/mL，4 ℃冰箱保存备用，药物由山东省青岛市海慈医院中药三级实验室提供)；枸橼酸莫沙必利片(鲁南贝特制药有限公司，国药准字H19990317，产品编号B14202018283，规格5mg/片)。

1.1.3 主要实验仪器与试剂 DPC-GAMMA-C12型γ计数器(美国德普公司)；MTL放射免疫分析试剂盒(北京北方生物技术研究所有限公司)；RM6240多道生理信号采集处理系统(成都仪器厂)。

1.2 实验方法

1.2.1 动物分组及模型制备 将60只大鼠随机分为正常对照组、假手术组、脑梗死组、枸橼酸莫沙必利组、黄连解毒汤常规剂量组及黄连解毒汤高剂量组6组，每组各10只。脑梗死组、枸橼酸莫沙必利组、黄连解毒汤常规剂量组及黄连解毒汤高剂量组采用线栓法制备大脑中动脉梗死模型(MCAo)[5]，假手术组大鼠仅暴露大脑中动脉而不凝闭，正常对照组不进行手术干预。

1.2.2 模型筛选标准 待大鼠清醒后采用Longa评分法[5]进行神经功能检查。0分：正常，无神经功能缺损症状；1分：对侧前爪不能完全伸展；2分：行走时向瘫痪侧转圈；3分：行走时大鼠向瘫痪侧倾斜；4分：不能自发行走；5分：与缺血有关的死亡。将评分1～3分大鼠纳入实验，0、4、5分大鼠剔除。最后各组大鼠全部纳入实验。

1.2.3 给药方法 造模结束后，按大鼠与人等效剂量换算公式，计算出黄连解毒汤常规剂量组和高剂量组的灌药量分别为生药5.39、10.78 g/kg，并分别将黄连解毒汤用0.9%氯化钠注射液稀释至2 mL灌胃，枸橼酸莫沙必利组按0.05 mg/kg予枸橼酸莫沙必利片灌胃，假手术组及脑梗死组予0.9%氯化钠注射液2 mL灌胃，正常对照组不做任何处理。共灌胃7 d，末次灌胃后禁食24 h，不禁水。

1.3 观察指标及方法

1.3.1 MTL 比较各组大鼠灌胃第4、7 d MTL水平情况。空腹采集下腔静脉血4 mL，注入含7.5%乙二胺四乙酸(EDTA)二钠40 μL和抑肽酶40 μL的试管中，混匀，4 ℃、3000 r/min离心10 min，取血浆，置-70 ℃保存待测。然后采用放射免疫分析法检测MTL水平，相关操作按照说明书进行。

1.3.2 胃电图慢波振幅与频率 比较各组大鼠灌胃第1、4、7 d胃电图慢波振幅与频率情况，并分析脑梗死组大鼠胃动力障碍变化趋势。每次实验前禁食18 h，自由饮水，灌胃60 min后，麻醉大鼠,固定于手术台，腹部备皮，75%酒精脱脂2遍,待腹部皮肤自然干燥后,于大鼠剑突下腹正中线1 cm向左旁开1.5 cm处贴放胃体部红色电极片,剑突下腹正中线1 cm向左旁开0.5 cm处贴放胃窦部绿色电极片,大鼠剑突下腹正中线1 cm向右旁开1.5 cm处贴放参考黑色电极,整个装置用铜网屏蔽，导线连接RM6240多道生理信号采集处理系统，高通滤波为1 s，低通滤波100 Hz，放大率500 mV/div，室温25 ℃左右，记录30 min。

2 结果

2.1 各组大鼠灌胃第1、4、7 d胃电图慢波振幅变化比较 与正常对照组和假手术组同期比较，脑梗死组大鼠第1、4、7 d胃电图慢波振幅均降低(P<0.05)，而正常对照组与假手术组第1、4、7 d胃电图慢波振幅组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与脑梗死组同期比较，枸橼酸莫沙必利组、黄连解毒汤常规剂量组及黄连解毒汤高剂量组第1、4、7 d胃电图慢波振幅均升高(P<0.05)。与枸橼酸莫沙必利组同期比较，黄连解毒汤高剂量组第1、4、7 d胃电图慢波振幅均升高(P<0.05)，黄连解毒汤常规剂量组第1、4、7 d胃电图慢波振幅与枸橼酸莫沙必利组同期比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与黄连解毒汤常规剂量组同期比较，黄连解毒汤高剂量组第1、4、7 d胃电图慢波振幅均升高(P<0.05)。与脑梗死组第1 d比较，脑梗死组第4 d胃电图慢波振幅进一步降低(P<0.05)，而第7 d胃电图慢波振幅与第1 d比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 各组大鼠灌胃第1、4、7 d胃电图慢波振幅变化比较

2.2 各组大鼠灌胃第1、4、7 d胃电图慢波频率变化比较 与正常对照组和假手术组同期比较，脑梗死组第1、4、7 d胃电图慢波频率均升高(P<0.05)，而正常对照组与假手术组第1、4、7 d胃电图慢波频率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与脑梗死组同期比较，枸橼酸莫沙必利组、黄连解毒汤常规剂量组及黄连解毒汤高剂量组第4 d胃电图慢波频率均降低(P<0.05)，第1、7 d胃电图慢波频率与脑梗死组比较差异无统计学意义(P>0.05)。枸橼酸莫沙必利组、黄连解毒汤常规剂量组与黄连解毒汤高剂量组第1、4、7 d胃电图慢波频率组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与脑梗死组第1 d比较，脑梗死组第4 d胃电图慢波频率进一步升高(P<0.05)，而第7 d胃电图慢波频率与第1 d比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 各组大鼠造模后第1、4、7 d胃电图慢波频率变化比较

2.3 各组大鼠灌胃第4、7 d MTL水平变化比较 与正常对照组和假手术组同期比较，脑梗死组第4、7 d MTL水平均升高(P<0.05)，而正常对照组与假手术组第4、7 d MTL水平组间同期比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与脑梗死组同期比较，枸橼酸莫沙必利组、黄连解毒汤常规剂量组及黄连解毒汤高剂量组第4、7 d MTL水平均降低(P<0.05)。与枸橼酸莫沙必利组同期比较，黄连解毒汤高剂量组第4 d MTL水平降低(P<0.05)，黄连解毒汤常规剂量组第4、7 d及黄连解毒汤高剂量组第7 d MTL水平与枸橼酸莫沙必利组同期比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与黄连解毒汤常规剂量组同期比较，黄连解毒汤高剂量组第4 d MTL水平降低(P<0.05)，第7 d MTL水平与黄连解毒汤常规剂量组比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 各组大鼠灌胃第4、7 d MTL水平变化比较

3 讨论

大量临床观察发现，胃动力障碍是急性期脑梗死的常见并发症之一，主要表现为恶心、呕吐、脘腹胀满、餐后腹胀、早饱、嗳气、腹泻等，胃动力障碍的发生或加重，往往容易诱发脑梗死整体病情的发展恶化[6-8]。急性脑梗死患者的胃动力障碍多为继发性，早期难以发现，甚至难以动态观测，且其发病机制目前尚不十分明确，有研究认为其发生与丘脑、小脑、脑干梗死及梗死后血糖升高、神经功能缺损程度有关，但依然存在很多知识盲点和治疗难点[9-10]。MTL是一种能刺激胃肠道平滑肌收缩的脑肠肽，能够加快胃排空，进一步促进胃肠蠕动，尤其对消化间期移行复合运动有强烈效果[11]。本实验还引入胃电图动态评估急性脑梗死后胃动力变化情况，涉及的指标主要是慢波振幅和慢波频率，慢波频率主要反映胃的运动速度,慢波振幅则反映胃的收缩强弱[12]。本研究结果显示，造模后脑梗死组大鼠较正常对照组和假手术组大鼠，第4、7 d MTL水平明显升高(P<0.05)，第1、4、7 d胃电图慢波振幅显著降低(P<0.05)，频率明显升高(P<0.05)，其中第4 d时脑梗死组大鼠的胃电图慢波振幅最低(P<0.05)、频率最高(P<0.05)。说明脑梗死后大鼠并发了胃动力障碍，胃动力激素调控发生了紊乱，MTL水平升高，胃的蠕动增快，但收缩强度在下降，且在第4 d时胃动力障碍达到了最高峰。究其原因，考虑急性脑梗死后全身应激反应启动，进一步影响了中枢神经系统及胃肠道神经系统，胃肠细胞分泌功能紊乱，MTL过度释放，应激性增高[13]，同时胃窦、胃体蠕动节律及幅度紊乱，胃动力功能整体下降，传输能力受阻，胃黏膜防御能力降低，从而导致各种胃肠症状的发生[14]，且以第4 d为胃动力损伤恢复的转折点。

急性脑梗死属中医学中风的范畴，毒损脑络是中风发生的重要病因病机，也逐渐在广大中医学者中达成了共识[15]。毒邪贯穿于中风急性期始终，中风时所产生的毒性病理产物，不仅参与了脑神经损伤的病理过程，而且还是中风病情险恶、难以治愈的关键[16]。老年人本就脾胃气阴不足，脾易失健运，加之毒邪蕴结胃肠,阻滞中焦气机，脾升胃降失常，以致食滞不化，腑气壅滞，或瘀血内阻，传化不能，腑气不通，从而可导致一系列脾胃系统症状[17]。经典古方黄连解毒汤是清热解毒通络的代表方剂，现代研究证实黄连解毒汤具有抗炎、抗肿瘤、抗氧化、调节纤溶系统、保护神经元、保护血管内皮细胞等多种药理作用，近年来已经被广泛应用于脑梗死的临床治疗中[18-20]。枸橼酸莫沙必利是临床上常用的促胃肠动力剂，可通过兴奋胃肠道胆碱能中间神经元及肌间神经丛的5-羟色胺(5-HT)受体而促进胃肠蠕动[21]。本研究结果显示，与脑梗死组比较，枸橼酸莫沙必利组、黄连解毒汤常规剂量组及黄连解毒汤高剂量组第4、7 d MTL水平均降低(P<0.05)，第1、4、7 d胃电图慢波振幅均升高(P<0.05)，第4 d胃电图慢波频率均降低(P<0.05)，其中枸橼酸莫沙必利组与黄连解毒汤常规剂量组在各项指标改善方面比较差异均无统计学意义(P>0.05)，而黄连解毒汤高剂量组第4 d MTL水平低于上述2组(P<0.05)，第1、4、7 d胃电图慢波振幅高于上述2组(P<0.05)。说明枸橼酸莫沙必利片和黄连解毒汤对急性期脑梗死大鼠胃动力障碍均有改善作用，其中高剂量的黄连解毒汤治疗效果最佳，对MTL水平胃电图慢波振幅改善更明显，常规剂量黄连解毒汤治疗效果与枸橼酸莫沙必利片相当。

综上所述，黄连解毒汤对急性期脑梗死大鼠胃动力障碍具有明确的治疗作用，可有效提升胃电图慢波振幅，增强胃的收缩力量，同时可降低胃电图慢波频率，降低胃的蠕动速度，并可降低胃动素的水平，综合调控脑梗死急性期胃动力的紊乱，让胃动力趋向于正常运动水平，且其调节作用有一定的量效关系，高剂量疗效优于常规剂量。黄连解毒汤治疗急性期脑梗死胃动力障碍的有效性已逐步被证实，但其更多的作用机制和作用靶点还有待于进一步深入探究。