新农药105亿CFU/g 多粘菌·枯草菌WP对烟草赤星病的防治效果

马 欣，刘倩雯，孙铭钒，寇宝实，李 颖，李鑫淳，高欣然，张 崇，姜 军*

(1.中国烟草总公司辽宁省公司，辽宁沈阳 110013；2.沈阳红旗林药有限公司，辽宁沈阳 110141；3.沈阳农业大学植物保护学院，辽宁沈阳 110866;4.辽宁省抚顺市现代农业及扶贫开发促进中心，辽宁抚顺 113001)

烟草赤星病(Alternariaalternata)作为烟草的重要叶部病害在我国各烟区普遍而严重发生。赤星病造成的病斑常常连片、出现枯焦，导致叶片脱落，整片叶破碎无法使用[1-2]。目前，生产上防治烟草赤星病仍以化学药剂为主，朱宇航[3]比较95%苯醚甲环唑等多种化学药剂在四川烟草田间防治效果，陈玉国等[4]研究了30%氟醚·吡唑嘧菌酯水剂等化学药剂的防控作用，化学药剂在有效控制烟草赤星病的同时，也易促使产生抗药性并造成环境污染。农用抗生素如多抗霉素系列产品在烟草上有许多登记，但已经使用多年，目前已有抗药性产生。微生物杀菌剂因其具有提高农产品产量、改善农产品品质、减少农药用量、降低成本、保护生态环境等特点，正日益受到青睐[4-9]。近年来，登记防治烟草赤星病的微生物杀菌剂如哈茨木霉、枯草芽孢杆菌等已进入市场，但混合菌制剂尚未见有获得农药登记。多粘类芽孢杆菌(Paenibacilluspolymyza)是已被证实的一类具有广泛宿主的促生菌和生防菌；枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)是一种可以在需氧或厌氧条件下存活，具有多种生理活性的一类细菌。2种芽孢杆菌抑制病原菌的种类和参与诱导寄主系统抗性的基因种类有所差异，但2种芽孢杆菌混合后制成的稳定菌剂可扩大抑菌谱，互补诱导抗性基因种类，从而更好地提高控制效果，节约成本[10]。近年，混合制剂105亿CFU/g 多粘菌·枯草芽孢杆菌WP获得正式登记(PD20200380)，登记作物和防治对象为烟草赤星病。笔者对该产品室内抑菌效果进行比较，并对田间防治烟草赤星病效果和应用技术进行了探究，旨在为防控烟草赤星病提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 室内抑菌试验

1.1.1供试菌株及药剂。供试菌株：烟草赤星病菌(Alternariaalternata),由沈阳农业大学植物保护学院保存。供试培养基：PDA 培养基。供试药剂及浓度：105亿CFU/g 多粘菌·枯草菌WP(沈阳红旗林药有限公司)，稀释600倍(A)；10亿CFU/g 多粘类芽孢杆菌WP(市售)，稀释500倍(B)；100亿CFU/g 枯草芽孢杆菌WP(市售)，稀释600倍(C)；10%多抗霉素WP(市售)，稀释800倍(D)；40%菌核净WP(市售)，稀释400倍(E)；清水处理(空白对照)(F)。

1.1.2试验方法。将实验室保存的病原菌进行活化，用直径5 mm无菌打孔器在赤星病菌菌落边缘打孔，用接种针挑取菌块倒置于PDA培养皿的中央，并在28 ℃恒温箱内培养48 h备用。

将牛津杯(内直径6 mm)和PDA培养基在121 ℃下灭菌30 min，随后将已灭菌的PDA培养基进行倒板，待平板完全凝固后，将牛津杯分别置于距平板中心2 cm处，摆放完成后轻轻按压牛津杯，确保后续加入药液无渗出。将准备好的赤星病菌放置于PDA平板的中心；在每个牛津杯内用移液枪添加100 μL药液，以加入清水为对照，每个处理3 次重复；待对照病原菌长满PDA平板时，观察供试药剂对烟草赤星病菌的抑菌效果并计算抑菌率。

1.1.3结果测定及数据分析。将处理组与对照组(CK)进行比较，利用游标卡尺进行测量，按以下公式求出抑菌率：

对照组菌落直径=对照菌落直径-菌饼直径

抑菌率=(对照组抑菌圈直径-处理组抑菌圈直径)/对照组抑菌圈直径×100%

1.2 田间防治试验

1.2.1试验地概况。试验地块选在辽宁省丹东市凤城市武庄烟站和铁岭市开原市八棵树烟站。试验地块土壤平整，肥料均匀，栽培条件一致，烟株长势较好，赤星病常年严重发生，试验前未施用任何防治烟草病虫害的药剂，符合试验要求。试验分别在2020和2021年烟草生育期进行。

1.2.2试验材料。试验药剂及用量：105亿CFU/g 多粘菌·枯草菌WP(沈阳红旗林药有限公司)，975 g/hm2(A)。其他药剂及用量：10亿CFU/g 多粘类芽孢杆菌WP，1 200 g/hm2(B)；100亿CFU/g 枯草芽孢杆菌WP，1 200 g/hm2(C)；10%多抗霉素WP，225 g/hm2(D);40%菌核净WP，3 750 g/hm2(E)，均为市售；以等量清水处理为空白对照(F)。

1.2.3试验设计。试验共设6个处理，每个药剂处理重复4次，每小区面积为60 m2，小区分布随机排列。

采用均匀喷雾法，使用卫士-16型背负式手动喷雾器，工作压力0.2～0.4 MPa。于烟草打顶期开始施药，每隔7 d施药1次，共施药3次。

1.2.4调查方法。2个试验区分别于第2次施药后7 d、第3次施药后7 d调查病情分级；每小区对角线5点取样调查，每点调查10株，共调查50株全部叶片发病情况。

病情分级标准：0级，无病；1级，病斑面积占叶面积的1%以下；3级，病斑面积占叶面积的2%～5%；5级，病斑面积占叶面积的6%～10%；7级，病斑面积占叶面积的11%～20%；9级，病斑面积占叶面积的21%以上。

2 结果与分析

2.1 生防菌及其他药剂对烟草赤星病菌抑制作用通过室内抑菌试验，5种供试药剂均对赤星病菌有抑制作用，但抑菌率差别较大，表现为40%菌核净WP(93.22%)>10%多抗霉素WP(88.32%)>105亿CFU/g 多粘菌·枯草菌WP(76.67%)>10亿CFU/g 多粘类芽孢杆菌WP(67.43%)>100亿CFU/g 枯草芽孢杆菌WP(65.65%)。由此可知，40%菌核净WP对烟草赤星病菌(A.alternata)菌丝生长抑制效果最好。

2.2 105亿CFU/g多粘菌·枯草菌WP对烟草赤星病的田间防治效果2020—2021年在辽宁省2个市2个县(市)的烟田开展了105亿CFU/g多粘菌·枯草菌WP对烟草赤星病防治试验。由表1可知，各药剂处理结果均较理想，病情指数均远低于对照组，但防效存在差异。其中辽宁省丹东市凤城市武庄烟站调查结果显示，105亿CFU/g 多粘菌·枯草菌WP(975 g/hm2)末次施药后防效最高，为82.58%，10亿CFU/g 多粘类芽孢杆菌WP(1 200 g/hm2)防效最低，为62.25%，两者防效差异显著;其中105亿CFU/g 多粘菌·枯草菌WP在第2次和第3次施药后防治效果分别为83.80%和82.58%，防治效果最佳且均显著高于其他对照药剂(P<0.05)。

表1 105亿CFU/g 多粘菌·枯草菌WP对烟草赤星病的防治效果(2020—2021年)

辽宁省开原市八棵树烟站调查结果显示，试验药剂105亿CFU/g 多粘菌·枯草菌WP处理对烟草赤星病的末次施药后防治效果为79.10%，其他药剂10亿CFU/g 多粘类芽孢杆菌WP、100亿CFU/g 枯草芽孢杆菌WP、10%多抗霉素WP和40%菌核净WP处理区的防治效果分别为75.45%、71.82%、62.72%和70.00%；其中105亿CFU/g 多粘菌·枯草菌WP 2次防效分别为77.51%和79.10%，相较于其他药剂，105亿CFU/g 多粘菌·枯草菌WP防效更加稳定，且与其他药剂差异显著(P<0.05)。

根据2020—2021年在辽宁2地开展的105亿CFU/g 多粘菌·枯草菌WP与多种药剂对烟草赤星病的田间防效调查结果可知，105亿CFU/g 多粘菌·枯草菌WP可有效防治烟草赤星病，且防治效果显著。同时根据不同地区的持效性比较，105亿CFU/g 多粘菌·枯草菌WP的防治效果更加稳定，施用975 g/hm2为最佳用药剂量。

2.3 105亿CFU/g 多粘菌·枯草菌WP对烟草安全性经田间观察，试验期间，各处理区烟草株高、叶色正常，没有畸形、生长不良等明显药害症状，也没有发现该药剂对其他生物有明显致害性影响。

3 结论与讨论

通过室内抑菌试验，发现105亿CFU/g 多粘菌·枯草菌WP抑菌率(76.67%)比40%菌核净WP(93.22%)和10%多抗霉素WP(88.32%)低，但仍达76%以上，对赤星病菌有显著的抑制作用。

辽宁省丹东市凤城地区多年连续种植烟草，赤星病年发生较重，如不及时防治会造成明显的产量损失。该研究田间试验结果表明，试验药剂105亿CFU/g 多粘菌·枯草菌WP对烟草赤星病有很好的防治效果，当制剂用量为975 g/hm2时，2次防效分别为83.80%和82.58%，显著优于其他药剂10亿CFU/g 多粘类芽孢杆菌WP(66.22%和62.25%)、100亿CFU/g 枯草芽孢杆菌WP(72.18%和71.87%)、10%多抗霉素WP(72.18%和71.87%)和40%菌核净WP的防治效果(75.25%和63.89%)，且存在显著差异(P<0.05)。

根据辽宁省铁岭市开原市田间试验，105亿CFU/g 多粘菌·枯草菌WP药剂防治烟草赤星病效果最为突出，2020和2021年2次防效分别达77.51%和79.10%，相较于其他药剂的防治效果更佳且更稳定，在存在显著差异(P<0.05)。

多粘类芽孢杆菌和枯草类芽孢杆菌的混合制剂已被证明可有效防控烟草赤星病，同时不会对烟草产生不良反应[10]。通过该试验，进一步证明新药剂105亿CFU/g 多粘菌·枯草菌WP对烟草赤星病有很好的防治效果。但由于赤星病是一种烟草生长后期的病害，只有烟叶进入成熟采收期才表现感病，因此，此类活体微生物农药使用时有一定的技术要求，应在发病前喷施在叶片上，连续施用2～3次，使生防菌能大量繁殖起来，才能发挥更好的预防和治疗效果。