牛结核病病原诊断检测技术的研究进展

杨晓霞，孙桂珍，王兆丽

（1.山东农业大学校医院，山东 泰安 271018；2.山东省泰安市中心医院医联体办公室，山东 泰安）

牛结核病在我国被划归为动物疾病中的二类，其病原细菌为分枝杆菌，属于归革兰氏阳菌。从发现结核病的病原至今已有 130多年的历史，经过多年的努力该病曾得到一定的控制，但近年来随着养殖业快速发展，家畜及人类结核病阳性率又有上升趋势，仍然是威胁动物与人类健康的重要传染病之一。本文通过总结牛结核病流行的现状，从流行病学及病原诊断检测技术方面进行探讨，从而对牛结核病的防疫提供技术支撑。

1 牛结核病流行现状

牛结核病发生的原因是牛感染了两种细菌：一是结核分枝杆菌、二是牛分支杆菌[1]。感染了牛结核病的畜类会将这种疾病传染到其他动物，甚至是人的身上。从频发的感染区域来分析，农村地区为该疾病暴发的主要场所。此外，结核病加重的原因还与用药不当有关，错误地用药会导致结核病菌产生耐药菌株，导致药效下降[1-2]。

世界卫生组织统计发现，每年在世界范围内感染结核病的人数接近 1 000万，其中三成的人最终会死于结核病[3]。因此，世界卫生组织对此保持高度关注，并提出要在全世界范围内防治结核病[3-4]。通过对牛结核病流行地的患病样本进行分离鉴定，结果显示，其主要病原菌为结核分枝杆菌和牛分枝杆菌两种，分别占比分别 85 % 和15 %。时至今日，还尚未有有效的牛结核病特效疫苗。

2 牛结核病流行病学研究

当今，牛结核病广泛流行在整个世界范围内，北美洲、大洋洲、东亚以及不列颠群岛都有分布。有研究结果显示，在美国的养殖场中，感染牛结核病的养殖场大概占总数的 22%，并且奶牛受到牛结核病的影响较为严重，产奶量将受到严重的影响[5]。我国的牛结核病首次确诊于上世纪的 50年代中期，发生的地点在内蒙古。此后，牛结核病在我国多个地区和省份传播，并且以北方地区为主，这与北方地区畜牧业占比大存在直接关系。在所有感染结核病的动物中，牛类的感染几率最大。有研究表明，牛在散养的状态下，感染结核病的几率不会超过 5 %，但在圈养状态下，由于牛群较为集中，一旦发生饲养管理不当的现象就会导致病菌搭载在饲料、饮水和空气中传播到牛中[6]。感染结核病的奶牛产出的乳汁也会携带病菌，乳汁接触到空气，其中的病菌也会借助空气传播。人感染结核病主要原因是饮用了没有经过完全消毒处理的乳制品[7-8]。

3 牛结核病病原检测技术

3.1 细菌学检测

在细菌学检测的过程中，需要将患病动物的体液尽可能收集完整，为开展Ziehl-Neelsen氏抗酸杆菌的染色实验提供必要的实验材料。如果染色后呈现红色，那么就需要将实验材料进行酸碱处理，置于罗杰二氏的培养基进行恒温培养，观察菌落的状态及诊断。值得注意的是，细菌学检测只适用于诊断开放性的结核病，由于在培养细菌的过程中容易接触到活菌，通常不推荐使用这种方法[9-10]。

3.2 结核菌素检测

从病原学角度检测牛结核病的主要方法是结核菌素检测，这种方法的最大优势就在于简单易操作、安全可靠、容易进行判断等。该检测方法的具体内容为：在牛颈部的 1/3处的位置进行皮下注射，注射的药剂为10万IU/ml的结核菌素，剂量为0.1 ml，在注射完毕72 h之后，测量牛皮肤的厚度，以厚度为判断的主要标准。但是，这种检测方法也有局限性，即面对潜伏性或者隐性的感染束手无策[11-12]。

3.3 全血刺激干扰素释放检测

全血刺激干扰素释放检测的具体方法为：选用特异抗原刺激感染的病牛，提取其外周血淋巴细胞并在体外培养 24 h，对其产生的 IFN-γ进行检测，从而确诊是否有牛结核病病原。备选的特异抗原有两种：分别为PPD-A和B。通过本实验可以判定感染牛结核的病菌属于哪种类型，并可以用作上述结核菌素检测的一种补充。但血刺激干扰素释放检测方法成本较高，因此该方法暂时无法满足小型牧场的需求[13-14]。

3.4 血清学检测

血清学检测的是对血液中抗原和抗体的检测，目前最普遍的方法就是酶联免疫吸附法。在结核病检验的过程中，通过固定特异性的抗原来检测血清特异的抗体。血清学检测方法与上述的全血刺激干扰素释放检测相比，在操作过程中更为简便，并且可以在较短的时间内获得检测结果，在成本上也无需承受过多的负担，但传统的血清学检测的特异性较低，需要选择特异性较好的抗原来优化[15-16]。

3.5 酶联免疫斑点

酶联免疫斑点这种技术建立在ELISA原理之上，该技术检测的对象为分泌细胞因子的免疫细胞。在判断机体是否受结核分枝杆菌感染的过程中，采用了具有分枝杆菌特异性的抗原。这种检测方法与上述的结核菌素检测相比，在敏感性上有了突出的提升，并且在特异性上也有了较大的进步[17-18]。

4 讨论

当前，牛结核病并没有特效的治疗方法，只能依赖于将患有结核病的阳性个体尽早淘汰。而牛结核病的显著特点之一就是具有较长的潜伏时间，因此，牛结核病的快速精准诊断就显得尤为重要[19-21]。本文通过总结牛结核病流行的现状，从流行病学及病原诊断检测技术方面进行探讨发现，目前单一使用任何一种方法都难以完成牛结核病的诊断，因此在临床中除了应用上述病原学检测方法外，还应联合使用免疫学方法以及分子生物学方法进行辅助诊断。通过多种途径，采取多种方法对种群的状态进行定期检测，测验出的阳性牛在第一时间淘汰出去，从而将牛结核病控制在最小的范围内。