罗布麻茶改善睡眠功能实验研究

何 伟 王 莉 刘 磊 黄景凤 李治建

(1 阿勒泰戈宝茶股份有限公司，阿勒泰，836500；2 阿勒泰戈宝茶股份有限公司乌鲁木齐分公司，乌鲁木齐，830015；3 新疆罗布麻工程技术研究中心(红麻)，阿勒泰，836500；4 新疆维吾尔自治区维吾尔药研究所，乌鲁木齐，830049)

罗布麻(ApocynumvenetumL.)属夹竹桃科植物，《中华人民共和国药典》记载，用鲜叶加工成的罗布麻茶功能主治“平肝安神、清热利水、高血压、神经衰弱”等[1-2]。近几年，具有保健功效的纯天然产品受到亚健康人群的青睐，罗布麻作为天然草本药物，随着人们对其研究的日益深入，其保健功效也逐渐被人们所接受。罗布麻叶中含黄酮、有机酸、鞣质、脂肪酸醇酯、氨基酸、矿物元素及其他物质[3-5]。国内外研究发现，罗布麻叶中的有效成分具有降血压、降血脂、抗氧化、防抑郁、利尿、保护肾脏和保护心血管等作用[6-7]。目前国内外对罗布麻茶中有效物质改善睡眠功能的研究尚未见报道。

本研究所用罗布麻生长在东经87°33′；北纬47°42′的新疆阿勒泰阿拉哈克乡东戈壁。本实验以小鼠为观察对象，观察罗布麻茶改善睡眠的功效，为产品的进一步开发提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 选用新疆医科大学实验动物中心提供的美国癌症研究所(Institute of Cancer Research，ICR)雄性小鼠192只[实验动物生产许可证号：SCXK(新)2018-0002，实验动物使用许可证号：SYXK(新)2018-0001]，5～6周龄，饲养室温度(23±3)℃、湿度40%～70%、噪声<85 dB，12 h/12 h白天和黑夜循环照明，本实验方案交由实验动物管理(伦理)委员会审查、批准后实施完全按国家相关实验动物福利法规规定执行(伦理审批号：nGLP-2019015)。

1.1.2 药物 罗布麻茶，袋泡茶，内容物为由罗布麻叶、五味子提取物、酸枣仁提取物组成的颗粒状物质，由阿勒泰戈宝茶股份有限公司生产提供，批号：20181116。推荐成人日摄入定型产品量9 g/60 kg(开水泡服，2次/d，1袋/次，4.5 g/袋)，以厂家提供的浓缩液(褐色膏状，1 g定型产品相当于0.7 g浓缩液)作为受试物，则浓缩液的日摄入量为6.3 g/60 kgBW，即0.105 g/kgBW。

1.1.3 试剂与仪器 戊巴比妥钠(北京化学试剂公司，批号：AM00469)、巴比妥钠(成都康弘药业集团股份有限公司，批号：190305)，2种试剂均现配现用。电子天平(德国赛多利斯股份公司，型号:BT-124S)、电热蒸馏水器(北京市永光明医疗仪器厂，型号:HS.Z68.10)、超声波加湿器(北京亚都室内环保科技股份有限公司，型号:YC-D209)。

1.2 方法

1.2.1 分组与模型制备 分别选取48只体质量为18.7～21.5 g的小鼠并分为4组，每组12只，进行直接睡眠实验、延长戊巴比妥钠睡眠时间实验、戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验和巴比妥钠催眠潜伏期实验[8]。

1.2.2 给药方法 以成人(体质量按60 kg计)每天摄入浓缩液的量(0.105 g/kg)的10、20和30倍设置剂量组，则罗布麻茶高剂量组、罗布麻茶中剂量组、罗布麻茶低剂量组的剂量分别为3.15 g/kg、2.10 g/kg、1.05 g/kg。精确称取7.88 g、5.25 g、2.63 g浓缩液于50 mL容量中，加入蒸馏水，充分溶解后定容，阴性对照组为蒸馏水，每组12只。各剂量组小鼠每天灌胃给予浓缩液1次，灌胃量为0.2 mL/10 g，阴性对照组小鼠给予等体积的蒸馏水，各剂量组持续灌胃30 d。小鼠于末次给药前1 d给予蒸馏水及不同浓度浓缩液60 min后，检测各组小鼠自主活动5 min自主活动行为情况，动物须在检测开始前2 min放入旷场箱内适应后开始测试。

1.2.3 检测指标与方法

1.2.3.1 直接睡眠实验 小鼠末次喂予蒸馏水及不同浓度样品的受试物后，查看受试样品组及阴性对照组有无入睡表现，以翻正反射消失为标准，记录阴性对照组与受试样品组入睡小鼠个数及入睡时间。

1.2.3.2 延长戊巴比妥钠睡眠时间实验 正式实验开始前先做预实验，找到使小鼠完全入睡，但又不会使其入睡时间过长的戊巴比妥钠剂量(45 mg/kg)，并以此剂量开展后面实验。小鼠最后1次给予蒸馏水及不同浓度受试物后，出现峰作用前15 min，给各组小鼠腹腔注射戊巴比妥钠，注射量为0.1 mL/10 g，以翻正反射消失为标准，查看受试样品能否延长戊巴比妥钠睡眠时间。

1.2.3.3 戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验 正式实验开始前先做预实验，确定戊巴比妥钠最大阈下催眠剂量(26 mg/kg)：85%小鼠翻正反射不消失的戊巴比妥钠最大阈下剂量。小鼠最后1次给予蒸馏水及不同浓度受试样品后，出现峰作用前10 min，各组小鼠腹腔注射戊巴比妥钠最大阈下催眠剂量，注射量为0.1 mL/10 g，记录30 min内入睡个体数(翻正反射消失60 s以上)。

1.2.3.4 巴比妥钠睡眠潜伏期实验 正式实验开始前先做预实验，确定小鼠完全入睡，但又不会使其入睡过长时间的巴比妥钠的剂量(260 mg/kg)，并以此剂量开展后面实验。

1.3 统计学方法 采用SPSS 22.0软件进行数据处理，采用方差分析法进行均值比较，方差齐性，各组间比较用LSD法；方差不齐性，各剂量组间用Tamhane，s法比较。用方差分析小鼠体质量、入睡时间、入睡动物数、潜伏期的单因素实验数据；用χ2检验分析入睡动物发生率的实验数据。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 罗布麻茶对小鼠体质量的影响 小鼠最后1次喂予蒸馏水及不同浓度受试物后，对小鼠实验前后体质量进行方差分析，结果说明，各剂量组实验前后小鼠体质量与阴性对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。小鼠最后1次喂予蒸馏水及不同浓度受试物后，对小鼠实验前后体质量方差分析，结果说明，各剂量组实验前与实验后小鼠体质量与阴性对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。各剂量组实验前后小鼠体质量与阴性对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。小鼠最后1次喂予蒸馏水及不同浓度受试物后，对小鼠实验前后体质量进行方差分析，结果说明，各剂量组实验前后小鼠体质量与阴性对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表4。

表1 罗布麻茶对直接睡眠实验小鼠体质量的影响

表2 罗布麻茶对延长戊巴比妥钠睡眠时间实验小鼠体质量的影响

表3 罗布麻茶对戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验小鼠体质量的影响

表4 罗布麻茶对巴比妥钠睡眠潜伏期实验小鼠体质量的影响

2.2 罗布麻茶对直接睡眠实验入睡小鼠数及入睡时间的影响 与阴性对照组比较，各剂量组入睡动物只数及入睡时间均为0，差异无统计学意义(P>0.05)。

2.3 罗布麻茶对戊巴比妥钠入睡时间的影响 各组的入睡时间差异有统计学意义(P<0.05)，与阴性对照组比较，高剂量组小鼠入睡时间显著增长(P<0.01)，中剂量组小鼠入睡时间增长(P<0.05)，剂量低的观察组小鼠入睡时间无明显变化(P<0.05)。见表5。

表5 罗布麻茶对戊巴比妥钠入睡时间的影响

2.4 罗布麻茶对戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验入睡发生率的影响 与阴性对照组比较，各剂量组小鼠的入睡发生率差异无统计学意义(P>0.05)。见表6。

表6 罗布麻茶对戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验小鼠入睡发生率的影响(n=12)

2.5 罗布麻茶对戊巴比妥钠潜伏期的影响 与阴性对照组比较，罗布麻茶高剂量组小鼠睡眠潜伏期明显变短，差异有统计学意义(P<0.01)，罗布麻茶中剂量组、罗布麻茶低剂量组小鼠睡眠潜伏期差异无统计学意义(P>0.05)。见表7。

表7 罗布麻茶对戊巴比妥钠潜伏期的影响

3 讨论

目前，失眠已成为社会普遍现象，严重影响人们的正常生活。西医认为睡眠主要是因为大脑神经系统调节功能发生障碍；中医认为是人体阴阳失衡。常见安眠药的作用机制是抑制神经系统，降低神经兴奋性。因此，它在帮助失眠患者改善睡眠的同时，会严重减低神经系统的调节功能。长期服用，易形成药物依赖，甚至发生慢性中毒及戒断综合征等[9-13]。罗布麻茶以平肝安神，补肾宁心为法，选用罗布麻叶，辅以酸枣仁提取物，再配以五味子提取物共同组方，改善睡眠。现代研究表明：罗布麻叶对戊巴比妥的镇静催眠作用有协同作用；酸枣仁具有延长大鼠慢波睡眠深睡阶段的功效；五味子能延长睡眠时间，镇静安神，同时具有提高机体免疫力的功效。罗布麻茶作为一种天然安全的保健食品不仅可以改善睡眠还不会生产依赖性，其中含有的黄酮类等物质使其保健功效更为明确。

通过罗布麻茶小鼠实验说明，对小鼠经口连续灌胃给予高剂量、中剂量、低剂量的罗布麻茶30 d，与阴性对照组比较，戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间高剂量组显著延长,睡眠潜伏期明显减短；中剂量组小鼠睡眠时间延长；直接睡眠实验入睡动物个数、睡眠时间及戊巴比妥钠入睡发生率罗布麻茶高剂量组、罗布麻茶中剂量组、罗布麻茶低剂量组与阴性对照组比较无显著性差异；各项实验小鼠体质量罗布麻茶高剂量组、罗布麻茶中剂量组、罗布麻茶低剂量组与阴性对照组比较无显著性差异，根据《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)中的评价标准，认为罗布麻茶具有改善睡眠的功效[14-21]。经过实验比较，罗布麻茶可使小鼠的体质量有一定程度的降低，罗布麻具有清热利尿及增加肠蠕动的作用，进而促进新陈代谢，降低体质量，引起动物脑系数的升高，即小鼠脑组织中枢神经递质5-羟色胺、多巴胺的水平，罗布麻改善睡眠的机制可能在于促进5-羟色胺的生物合成过程，从而帮助患者改善睡眠[22]。