上皮性卵巢恶性肿瘤中PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin表达与临床病理特征的关系

陈海琛，李旭苗，刘立媛，曹茜，丁彩霞

1.西安高新医院病理科，陕西 西安 710075；2.陕西省肿瘤医院病理科，陕西 西安 710076

卵巢癌是发病率仅次于子宫颈癌和子宫体恶性肿瘤而病死率居于女性生殖道恶性肿瘤之首的女性生殖系统肿瘤，其中约80%的卵巢癌为上皮性卵巢恶性肿瘤[1-2]。目前早期上皮性卵巢恶性肿瘤患者可经单纯手术治愈，但因该肿瘤病灶位于盆腔深部，早期缺乏特异性症状，尚未找到有效的早期筛查方法，大多数患者就诊时已发展至中晚期，需接受肿瘤细胞减灭术联合放化疗等综合治疗方案，预后较差[3-4]。增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)是细胞核脱氧核糖核酸复制所必需的聚合酶的辅助蛋白，参与肿瘤细胞的增殖和侵袭[5]。人表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor 2，HER2)介导细胞的增殖、分化和抗凋亡等生理过程，与多种恶性肿瘤的发生发展有关，是目前肿瘤免疫治疗研究中的重要靶分子之一[6]。此外，现有临床研究指出，上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transition，EMT)是肿瘤侵袭、转移过程中的重要生理过程，而这一过程的生物学改变包括波形蛋白(Vimentin)表达上调和上皮钙黏蛋白(E-Cadherin)下调[7-9]。基于PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin在肿瘤发生、发展和转移过程中的重要作用，本研究检测上皮性卵巢恶性肿瘤中PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin的表达情况，并分析四者与临床病理特征的关系，以期为上皮性卵巢恶性肿瘤临床诊疗提供参考依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2019年3月至2022年3月期间于西安高新医院、陕西省肿瘤医院接受手术治疗的92例上皮性卵巢恶性肿瘤患者作为癌症组，年龄36～72岁，平均(56.59±6.52)岁。纳入标准：(1)符合上皮性卵巢恶性肿瘤诊断标准[10]，经术后病理确诊；(2)首次确诊并接受手术治疗；(3)临床资料完整。排除标准：(1)有恶性肿瘤病史或合并其他恶性肿瘤；(2)标本污染或不足以用于本研究。另选择同期50例在西安高新医院行卵巢良性囊肿剔除组织者作为对照组，年龄28～74岁，平均(52.88±5.79)岁。两组患者的年龄比较差异无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。本研究经以上两家医院伦理委员会批准。

1.2 检测方法采用免疫组织化学染色法检测肿瘤组织中PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin蛋白表达情况，鼠抗人PCNA单克隆抗体、兔抗人HER2单克隆抗体、兔抗人Vimentin单克隆抗体、鼠抗人E-cadherin单克隆抗体、免疫组化试剂盒均购自福州迈新公司、美国罗氏公司。所有患者均于术中取卵巢肿瘤样本，以10%中性福尔马林固定、石蜡包埋、3.0 μm连续切片，切片常规脱蜡至水；用罗氏Ventana Benchmark全自动免疫组织化学平台染色；染色完成后用洗洁精稀释水冲洗，无水乙醇脱水两次，2 min/次，中性树胶封片。

1.3 PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin阳性表达判定标准采用半定量法判定，PCNA定位于细胞核，HER2、E-cadherin定位于细胞膜，Vimentin定位于细胞质，每张切片于400倍光学显微镜下随机选择5个视野，各视野记100个细胞，对染色强度和染色细胞百分比进行评估：无色、浅黄色、棕黄色、棕褐色对应计0分、1分、2分、3分，阳性细胞所占的百分比＜5%、5%～25%、26%～50%、51%～75%、＞75%对应计0分、1分、2分、3分、4分，以染色强度与阳性细胞占比分值乘积分数判定，0～3分阴性(-)，4～6分弱阳性(+)，7～9分为阳性(++)，10～12分强阳性(+++)，乘积＞3分即阳性表达。

1.4 统计学方法应用SPSS22.0统计学软件对研究数据进行分析。计量资料符合正态分布，以均数±标准差(±s)表示，组间比较行t检验；计数资料比较行χ2检验，相关性分析采用四格表的关联分析求Phi系数(φ)进行检验。以P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者卵巢肿瘤组织中PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin蛋白阳性表达水平比较癌症组患者组织中的PCNA、HER2、Vimentin蛋白阳性表达率明显高于对照组，E-Cadherin蛋白阳性表达率明显低于对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

表1 两组患者卵巢肿瘤组织中PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin蛋白阳性表达水平比较[例(%)]

2.2 不同临床病理特征上皮性卵巢恶性肿瘤中PCNA、HER2和Vimentin阳性表达水平比较低级别、有淋巴结转移肿瘤组织中PCNA阳性表达率均高于高级别、无淋巴结患者；FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、高级别、有淋巴结转移患者肿瘤组织中HER2阳性表达率高于FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期、低级别、无淋巴结转移患者；FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、低级别、有淋巴结转移患者肿瘤组织中Vimentin阳性表达率均高于FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期、高级别、无淋巴结转移患者，差异均具有统计学意义(P＜0.05)，见表2。

表2 不同临床病理特征上皮性卵巢恶性肿瘤中PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin阳性表达水平比较[例(%)]

2.3 不同临床病理特征上皮性卵巢恶性肿瘤中E-Cadherin阳性表达水平比较FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、高级别、有淋巴结转移患者肿瘤组织中E-Cadherin阳性表达率均低于FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期、低级别、无淋巴结转移患者，差异均具有统计学意义(P＜0.05)，见表3。

表3 不同临床病理特征上皮性卵巢恶性肿瘤中E-Cadherin阳性表达水平比较[例(%)]

2.4 上皮性卵巢恶性肿瘤中PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin蛋白表达间的关系经Spearman秩相关分析结果显示，上皮性卵巢恶性肿瘤中PCNA表达与HER2、Vimentin表达呈正相关(φ=0.409，0.455，P＜0.05)，与E-Cadherin表达呈负相关(φ=-0.903，P＜0.05)；HER2表达与Vimentin表达呈正相关(φ=0.597，P＜0.05)，与E-Cadherin表达呈负相关(φ=-0.393，P＜0.05)；Vimentin表 达 与E-Cadherin表 达 呈 负 相 关(φ=-0.596，P＜0.05)，见表4～表6。

表4 上皮性卵巢恶性肿瘤中PCNA与HER2、Vimentin、E-Cadherin蛋白表达的关系(例)

表5 上皮性卵巢恶性肿瘤中HER2与Vimentin、E-Cadherin蛋白表达的关系(例)

表6 上皮性卵巢恶性肿瘤中Vimentin与E-Cadherin蛋白表达的关系(例)

3 讨论

上皮性卵巢恶性肿瘤起源于卵巢上皮，多发于绝经后女性群体中，具有发病率高、死亡率高、早期不易诊断、易转移和易复发等特点[11]。目前临床推荐检测CA125和HE4水平为上皮性卵巢恶性肿瘤的临床诊断、病情评估和预后评估提供参考信息，但临床实际中仍有约一半的早期患者CA125值检测结果并无异常[12]。现阶段上皮性卵巢恶性肿瘤的分子机制尚未完全明晰，使得肿瘤诊断、病情评估级预后判断更加困难，临床仍需寻找新型有效的肿瘤标志物或治疗靶点为该癌症临床诊疗提供有效的参考信息，从而提高患者生存质量[13]。

PCNA为DNA复制过程中DNA聚合酶D的辅助蛋白，可反映细胞的增殖程度，参与肿瘤细胞的增殖过程，因此，检测其表达水平可用于判断肿瘤细胞增殖活性；此外，PCNA过表达时增加细胞间的张力而使细胞间的黏附能力降低，有利于肿瘤细胞脱落形成转移灶，导致肿瘤的转移和复发，故其表达水平还可反映肿瘤转移、复发信息[14]。HER2是表皮生长家族员之一，具有促进细胞增殖、抑制抑制凋亡、诱导血管和淋巴管新生、增强肿瘤浸润转移等多种作用，作为原癌基因参与多种肿瘤的发生、发展。目前已有研究指出，卵巢癌中HER2过表达情况与乳腺癌相似，或可将其作为卵巢癌的生物标志物，从而为临床诊疗提供有效信息，但仍需更多研究验证[15]。

侵袭转移是卵巢癌患者死亡的主要原因，而肿瘤的侵袭转移是多种基因多种分子生物学改变、多步骤完成的复杂过程，这一复杂过程以肿瘤细胞间黏附能力减低和迁移能力增强为始动因素，相关概念即EMT。EMT是肿瘤发生侵袭转移的基础，目前临床研究已证实在上皮性肿瘤的发展、侵袭转移中EMT会被激活，引起间质性标志物(Vimentin等)表达上调、细胞表面上皮性标志物(E-cadherin等)表达下调，从而破坏细胞间的连接，使细胞间黏附能力降低、运动能力增加[16]。Vimentin主要表达于间质起源的细胞中，在上皮源性的恶性肿瘤中也有表达，其作用是引起细胞迁。Vimentin引起的细胞迁移是恶性肿瘤侵袭转移的基础，故Vimentin表达水平被认为与胃肠道肿瘤、乳腺癌等多种类型肿瘤细胞的恶性程度有关[17]。E-Cadherin为钙离子依赖性跨膜糖蛋白，参与极化上皮细胞间的黏附作用，强烈表达于黏附连接中，维持上皮细胞的完整性和极性，其表达下调或缺失影响肿瘤细胞发生EMT过程，可促进肿瘤细胞的侵袭转移[18]。基于上述PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin在肿瘤发生发展过程中的作用，以上四者或可作为上皮性卵巢恶性肿瘤的生物标志物为临床诊疗提供有效参考信息。

本研究获取上皮性卵巢恶性肿瘤患者和卵巢良性囊肿患者的肿瘤组织，检测肿瘤组织中PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin表达情况，结果显示，相比于对照组，癌症组PCNA、HER2、Vimentin蛋白阳性表达率更高，而E-Cadherin蛋白阳性表达率更低，说明在上皮性卵巢恶性肿瘤中PCNA、HER2、Vimentin过表达而E-Cadherin低表达。分析不同临床病理特征上皮性卵巢恶性肿瘤中PCNA、HER2和Vimentin阳性表达情况发现，FIGO分期越高，HER2、Vimentin蛋白阳性表达率越高而E-Cadherin蛋白阳性表达率越低，组织分化程度程度越低，HER2、Vimentin蛋白阳性表达率越高而PCNA、E-Cadherin蛋白阳性表达率越低，有淋巴结转移患者较无淋巴结转移患者PCNA、HER2、Vimentin蛋白阳性表达率更高而E-Cadherin蛋白表达阳性率更低，说明上皮性卵巢恶性肿瘤中PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin表达与组织分化程度、淋巴结转移情况相关，HER2、Vimentin及E-Cadherin表达与FIGO分期相关，其中在高级别上皮性肿瘤中HER2蛋白阳性表达率较低级别上皮性肿瘤中更高，原因是分化程度低的肿瘤细胞处于快速增殖分化期，HER2基因扩增及其蛋白过表达加速肿瘤细胞生长[19]。此外，本研究中，上皮性卵巢恶性肿瘤中PCNA、HER2、Vimentin表达间均存在正相关关系，且三者均与E-Cadherin表达负相关，提示PCNA、HER2、Vimentin及E-Cadherin可能在上皮性卵巢恶性肿瘤的发生、发展过程中相互作用、相互影响。

综上所述，在上皮性卵巢恶性肿瘤中，PCNA、HER2、Vimentin蛋白过表达而E-Cadherin低表达，且四者异常表达均与组织分化程度、淋巴结转移密切相关，HER2、Vimentin及E-Cadherin表达与FIGO分期相关，参与肿瘤的发生、发展，检测四者表达情况可为临床诊疗提供一定诊疗信息，但四者参与调控上皮性卵巢恶性肿瘤的具体机制仍需深入研究。