芦荟粉配伍火麻仁油对便秘小鼠胃肠动力和水液代谢的实验研究

王梦瑶 张建军 汤如莹 朱依琳 张 睿 赵丹萍 王林元

(1 北京中医药大学中药学院，北京，100029； 2 北京中医药大学中医学院，北京，100029)

随着现代生活方式的改变，压力、久坐和熬夜等多种因素常常导致便秘[1-3]。据便秘流行病学显示，我国有4%～12%便秘患者[1-2]。便秘发病率高，常以排便间隔延长、大便干结、大便艰涩不畅为主要表现[1-2]。中医通过辨证论治，调整脏腑，调节机体阴阳气血津液的平衡，达到促进肠道运动和促进排便的作用[3]。临床应用上芦荟与火麻仁可配伍用于治疗便秘[4]。芦荟为攻下药，常用于热结便秘[5]；火麻仁甘平，质润多脂，为润下药，能润肠通便，常用于肠燥便秘，又兼有滋养补虚的作用[6-7]，火麻仁可制约芦荟的苦寒之性，二者合用润肠通便，导泻温和。目前芦荟粉与火麻仁油联合作用通便效果研究甚少，本实验通过观察芦荟粉、火麻仁油及其混合物对复方地酚诺酯所致便秘小鼠胃肠动力学和水液代谢的影响，观察其对小鼠小肠推进率、结肠组织结构和黏液分泌情况以及对血清中5-羟色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)、肠内P物质、血管活性肠肽(Vasoactive Intestinal Peptide，VIP)水平的变化，为芦荟粉与火麻仁及其配伍应用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 选取无特定病原体(Specific Pathogen Free,SPF)级健康雄性昆明小鼠160只，体质量(20±2) g，购自斯贝福(北京)实验动物科技有限公司，许可证号：SCXK(京)2016-0002。实验过程中给予小鼠普通饲料，自由饮水，室温22～26 ℃，相对湿度为60%～70%。实验符合相关伦理学要求(伦理审批号：BUCM-4-2019090602-3035)。

1.1.2 药物 芦荟粉(百合科植物库拉索芦荟AloeveraL.的全叶粉，云南万绿生物股份有限公司，生产批号：20180512)、火麻仁油(桑科植物大麻CannabissativaL.的干燥成熟果实压榨得到的油，江西森海植物油有限公司，生产批号：20190611)，果导片(山东仁和堂药业有限公司，生产批号：181102)，复方地芬诺酯(DC)片(常州康普药业有限公司，生产批号：181016)。受试物均为灌胃给药，羧甲基纤维素钠溶液作为空白溶液以及给药基质溶液，帮助药物混悬溶解。

1.1.3 试剂与仪器 5-HT试剂盒(武汉塞维尔生物科技有限公司，批号：20191010)，P物质试剂盒(武汉塞维尔生物科技有限公司，批号：20191013)，VIP试剂盒(武汉塞维尔生物科技有限公司，批号：20191016)；全自动生化分析仪(Olympus公司，日本，型号：AU5400型)，显微镜(Olympus公司，日本，型号：BX51-32H0型)，台式离心机(湖南新科科学仪器有限公司，型号：L-5M型)，石蜡切片机(LEICA公司，德国，型号：RM2235)，电子天平(Sartorius公司，德国，型号：BS110型)。

1.2 方法

1.2.1 分组 SPF级健康昆明小鼠160只，适应性喂养7 d后随机分为8组，即空白组、模型组、果导片组、芦荟粉组、火麻仁油组、配伍低剂量组、配伍中剂量组、配伍高剂量组，每组20只。

1.2.2 模型制备 实验第14天，各组小鼠禁食16 h(期间自由饮水)后，除空白组外，其余各组灌胃复方地芬诺酯5 mg/kg体质量制备小鼠肠蠕动抑制模型，空白组灌胃生理盐水，30 min后，每组取10只小鼠摘眼球取血取结肠；每组另外的10只小鼠灌胃15%的墨汁(0.5 mL/只)做小肠推进实验。

1.2.3 给药方法 果导片组灌胃30 mg/kg的果导片、芦荟粉组灌胃0.15 g/kg的芦荟粉(相当于人日用量0.9 g/d)、火麻仁油组灌胃0.33 g/kg的火麻仁油(相当于人日用量2 g/d)、配伍低剂量组灌胃0.075 g/kg芦荟粉和0.165 g/kg火麻仁油，配伍中剂量组灌胃0.15 g/kg芦荟粉和0.33 g/kg的火麻仁油，配伍高剂量组灌胃0.3 g/kg芦荟粉和0.66 g/kg。每天上午各组灌胃给予相应药物，空白组、模型组给予等量生理盐水，给药体积按0.2 mL/10 g，1次/d，连续14 d。

1.2.4 检测指标与方法

1.2.4.1 一般状态和体质量 观察各组小鼠活动、精神状态，每隔7 d记录体质量变化。

1.2.4.2 小肠推进实验 实验第14天，各组小鼠禁食16 h(期间自由饮水)后，模型组和各给药组给予复方地芬诺酯5 mg/kg体质量制备小鼠肠蠕动抑制模型，空白组给生理盐水，30 min后，各组取10只小鼠灌胃15%的墨汁(0.5 mL/只)。25 min后，脱颈椎处死小鼠，开腹取小肠，剪取幽门至回盲部的肠管，轻拉成直线，测量小肠全长和幽门至墨水运动前沿位移，计算小肠墨汁推进率。墨汁推进速率=墨汁移动距离(cm)/小肠总长度(cm)×100%。

1.2.4.3 血清5-HT、P物质及VIP检测 实验第14天最后1次给药后1 h摘眼球取血，室温静置2 h，低温离心15 min(3 000 r/min，离心半径5 cm)，分离血清-20 ℃保存，按试剂盒说明书测定血清5-HT、P物质和VIP水平。

1.2.4.4 小鼠结肠病理观察 每组取3只小鼠的结肠组织用生理盐水进行清洗后放入4%多聚甲醛组织固定液中进行固定，常规脱水、透明、浸蜡与包埋，制成蜡块，石蜡切片，对切片进行常规苏木精-伊红(Hematoxylin Eosin，HE)染色。

2 结果

2.1 一般状态及体质量 第1～14天，空白组和模型组，小鼠皮毛润泽色白，粪便排出正常。第7～13天，果导片组、芦荟粉组小鼠皮毛失去光泽色黄，皮毛疏散、竖立，粪便出现湿软稀便。实验第1天、第7天、第13天，与空白组比较，模型组小鼠体质量均无明显变化，差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较，各给药组小鼠体质量没有明显变化，差异无统计学意义(P>0.05)。其他给药组小鼠实验期间与配伍中剂量组比较，小鼠体质量均无明显变化，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 芦荟粉、火麻仁油及其配伍对便秘小鼠体质量的影响

2.2 各组小肠推进率比较 与空白组比较，模型组小鼠小肠推进率明显降低，差异有统计学意义(P<0.001)。与模型组比较，各给药组小鼠的小肠推进率明显升高，差异有统计学意义(P<0.001)。与配伍中剂量组比较，果导片组、芦荟粉组、火麻仁油组及配伍低剂量组小鼠的小肠推进率低于配伍中剂量组，差异有统计学意义(P<0.001)。见表2。

表2 芦荟粉、火麻仁油及其配伍对便秘小鼠小肠推进率的影响

2.3 各组血清5-HT、P物质、VIP水平比较 与空白组比较，模型组小鼠血清中5-HT、P物质水平显著降低，VIP水平显著升高，差异有统计学意义(P<0.001)。与模型组比较，果导片组、芦荟粉组、配伍低剂量组、配伍中剂量组、配伍高剂量组5-HT水平显著升高(P<0.001，P<0.01)火麻仁油组有升高5-HT的趋势(P>0.05)；火麻仁油组和配伍低剂量组5-HT水平低于配伍中剂量组(P<0.001，P<0.01)。与模型组比较，果导片组、芦荟粉组、火麻仁油组、配伍中高剂量组P物质水平显著升高(P<0.001，P<0.01，P<0.05)，配伍低剂量组有升高P物质的趋势(P>0.05)。与模型组比较，果导片组、芦荟粉组、配伍低剂量组、配伍中剂量组、配伍高剂量组VIP水平显著降低(P<0.001，P<0.01，P<0.05)。见表3。

表3 芦荟粉、火麻仁油及其配伍对便秘小鼠血清5-HT、P物质、VIP的影响

2.4 各组结肠组织形态变化 HE染色可见空白小鼠结肠黏膜层较厚，未见明显病理改变，黏膜上皮完整，杯状细胞形态无改变。与空白组比较，模型组小鼠结肠黏膜层上皮细胞和杯状细胞萎缩，黏液分泌减少，肌层厚度减少；与模型组比较，给药组小鼠结肠黏膜层上皮细胞、杯状细胞、黏液分泌与肌层厚度均增加。见图1。

与空白组比较，模型组小鼠结肠黏膜层厚度明显减少(P<0.05)，与模型组比较，果导片组、配伍剂中剂量组、配伍高剂量组小鼠结肠黏膜层厚度明显增加(P<0.001，P<0.01，P<0.05)；与配伍中剂量组比较，芦荟粉组和火麻仁油组差异无统计学意义(P>0.05)。见表4。

表4 芦荟粉、火麻仁油及其配伍对便秘小鼠结肠组织黏膜厚度的影响

3 讨论

便秘患者由于粪便滞留肠道发酵腐败产生有害毒素，可引起痤疮、面部色素沉着、皮疹等问题[9-10]。长期便秘者可引起或加重直肠疾病如直肠炎、肛裂、痔疮等，同时还将导致失眠、多梦、烦躁、抑郁、焦虑等问题[11]。便秘可损伤肠道黏膜屏障，减弱肠黏膜抵抗机械和化学损伤能力。在排便过程中周围神经会出现兴奋，其冲动传递至主排便中心和大脑皮质后会导致大肠、直肠、肛门括约肌以及盆底肌肉的一系列协调运动，而其中任何一个部位的障碍都可能会导致便秘的发生，便秘严重影响生命质量。

芦荟、火麻仁常用于治疗便秘。研究表明，芦荟具有加强小鼠肠蠕动和减少肠壁重吸收水分作用[15]。其中起泻下通便作用的主要是以芦荟苷为代表的蒽醌类化合物[12-13]，芦荟苷主要存在于芦荟叶皮中，叶肉中含量比表皮少[8]。药用芦荟是芦荟叶皮的汁液浓缩干燥物，不含叶肉；芦荟粉是芦荟全叶的粉，含叶皮和叶肉，其中芦荟苷含量较药用芦荟低；而芦荟凝胶是去皮后所得肉质部分，主含芦荟多糖等，芦荟凝胶汁能改善便秘小鼠结肠运动功能[14]。芦荟粉中既有含芦荟苷较多的皮，也有主要含有芦荟多糖的芦荟凝胶。火麻仁为最常用于虚证便秘的中药之一，除有润下通便作用以外，传统记载尚有“补益”作用，如《神农本草经》记载其“补中益气”；《日华子本草》记载：“补虚劳，长肌肉。”火麻仁油是火麻仁润下通便的主要物质基础，传统认为火麻仁油能刺激肠黏膜使肠道黏液分泌增多、蠕动加快、减少大肠吸收水分而发挥润肠、通便作用[16]。因此，芦荟粉中的芦荟苷发挥刺激性泻下作用，芦荟多糖调节结肠运动，而火麻仁油润肠通便，补中益气，“补虚劳，长肌肉”增加胃肠道动力而促进肠道蠕动利于粪便的排出。二者配伍使用，润肠通便，导泻温和。

复方地芬诺酯导致便秘的动物模型应用广泛，其便秘动物模型主要是通过抑制肠道蠕动，干扰肠道黏液分泌而导致便秘[17]。小肠墨汁推进率反映肠道的蠕动能力，便秘后肠道蠕动力减弱，粪便在体内滞留时间延长，排便量减少，小肠墨汁推进率降低[18]。本研究结果显示，芦荟粉、火麻仁油及其配伍对便秘小鼠小肠推进率有明显改善，这表明其有通便作用。

肠神经系统调节肠道动力功能，肠神经递质P物质、5-HT、VIP可发挥兴奋或抑制作用对肠道运动进行调节[19-20]。P物质是胃肠运动调节中的兴奋性神经递质，能促进肠道平滑肌收缩，减少胃肠道对水分的吸收增加粪便含水量，刺激肠道蠕动促进排便[21-22]。5-HT能促进肠道平滑肌收缩引起肠道蠕动[23]。VIP在胃肠运动调节中主要起抑制作用，可松弛肠道平滑肌，抑制肠道蠕动[24]。本研究发现，芦荟粉、火麻仁油及配伍能使便秘小鼠血清5-HT、P物质水平上调，VIP水平降低，芦荟粉、火麻仁油及配伍通过调节肠神经递质来调节肠道运动，从而改善小鼠便秘症状。

肠道失于润养时细胞分泌黏液减少，肠道蠕动减缓，大便停留时间延长，则大便干结，难以排出。本研究结肠组织HE染色结果表明，模型组小鼠结肠的黏膜厚度变薄，上皮细胞形态细长、干瘪，杯状细胞减少，符合便秘肠道失于濡养的表现。芦荟粉及火麻仁油能增加便秘小鼠肠道杯状细胞数量，修复受损的上皮细胞及功能，增加黏膜厚度，促进黏液分泌，改善便秘状态。

本研究配伍中剂量组小肠推进率显著高于芦荟粉组、火麻仁油组，5-HT水平显著高于火麻仁油组，VIP水平显著低于火麻仁油组，表明芦荟粉与火麻仁油配伍在增加肠道动力、促进肠道蠕动方面显著优于单独使用芦荟粉或火麻仁油。

综上所述，本研究表明芦荟粉与火麻仁油配伍对便秘小鼠的通便作用具有协同增效的效果，与促进肠道细胞修复，增加黏液分泌进而增加肠道动力有关。本研究探讨芦荟粉、火麻仁油及其配伍的通便作用及机制，为其配伍应用提供实验依据。