不孕症患者NK细胞、Th1/Th2水平变化及与自身免疫抗体的关系

武娟，束颍，许丽娜

（周口市中心医院 检验科，河南 周口 466000）

不孕症为常见生殖健康缺陷，其病因复杂，输卵管疾病、免疫失调、排卵障碍等影响排卵、着床的因素均可能引发不孕症；近年免疫因素所致不孕症的发病率逐渐升高，病例占比约达20%，逐渐引起临床关注［1］。研究表明，正常妊娠状态Th1 型细胞因子受到抑制，以分泌Th2 型细胞因子为主，若Th1/Th2 紊乱，可能导致不孕［2］。自然杀伤（natural killer,NK）细胞亦为重要免疫细胞，可能与免疫性不孕症相关；同时此类患者外周血自身免疫抗体异常［3］。因此分析不孕症患者Th1/Th2 平衡性、NK 细胞水平及自身免疫抗体间可能存在一定联系，但不孕症患者自身免疫抗体与NK细胞、Th1/Th2 水平变化关系的相关研究较少。基于此，本研究选取周口市中心医院132 例不孕症患者，旨在探究NK 细胞、Th1/Th2 水平与抗精子抗体（AsAb）、抗子宫内膜抗体（EMAb）、抗卵巢抗体（AoAb）等自身免疫抗体的相关性，为不孕症诊治提供新思路。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019 年5 月至2021 年12 月周口市中心医院收治的132 例不孕症患者为观察组，另选取同期孕育功能正常的110 例健康体检者为健康组。其中观察组年龄28～39 岁，平均（33.57±2.63）岁；健康组年龄27～39 岁，平均（33.18±2.58）岁。两组基线资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。本研究经周口市中心医院伦理委员会审批通过。

1.2 纳入及排除标准

纳入标准：①符合世界卫生组织（WHO）标准，未避孕正常性生活≥12 个月而未妊娠；②近3个月无性激素类药物服用史；③伴侣性功能无异常；④患者及近亲属均了解本研究并签订知情同意书。

排除标准：①存在炎症性疾病；②器质性病变所致不孕；③存在认知、精神障碍；④存在吸烟、酗酒史；⑤存在恶性肿瘤疾病。

1.3 方法

1.3.1 NK 细胞、Th1/Th2 水平检测 入组后均采集100 μL 静脉血样，加入100 μL 培养液（RPMI-1640）稀释，加入96 孔平板，采用莫能霉素、PMA、离子霉素工作液混合后，于CO2（5%）环境中培养5 h，弃上清液，加入10 μL CD4-FITC 单克隆抗体。静置15 min（避光），磷酸缓冲液清洗，再次加入破膜剂，静置15 min 后清洗。采用流式细胞仪测定NK 细胞、Th1/Th2 水平。

1.3.2 自身免疫抗体检测 入组后抽取4 mL 空腹静脉血，离心（3 500 r/min,10 min）取血清，采用酶联免疫吸附测定血清中AsAb、抗人绒毛膜促性腺激素抗体（AhCGAb）、EMAb、AoAb 水平，抗体定性试剂盒购自伊利康生物公司。

1.3.3 性激素检测 于月经第3～5 天空腹采血，闭经或月经稀疏者以其以往规律月经情况预测经期进行采血，以电化学发光免疫法测定血清黄体生成素（LH）、睾酮（T）、雌二醇（E2）、促卵泡激素（FSH）、孕酮（P）水平。

1.4 观察指标

①比较两组NK 细胞、Th1/Th2 水平；②比较两组自身免疫抗体AsAb、AhCGAb、EMAb、AoAb阳性率；③比较两组LH、FSH、E2、T、P 等性激素水平；④分析NK 细胞、Th1/Th2 水平与自身免疫抗体的相关性；⑤分析NK 细胞、Th1/Th2 水平与性激素水平的相关性。

1.5 统计学方法

采用SPSS b23.0 对数据进行分析，计量资料以均数±标准差（）表示，采用t检验；计数资料以百分率（%）表示，采用χ2检验。以Spearman 相关性分析NK 细胞、Th1/Th2 水平与自身免疫抗体、性激素水平的相关性。P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组NK 细胞、Th1/Th2 水平比较

观察组NK 细胞、Th1/Th2 水平均高于健康组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

表1 两组NK 细胞、Th1/Th2 水平比较（）

表1 两组NK 细胞、Th1/Th2 水平比较（）

2.2 两组自身免疫抗体阳性率比较

观察组自身免疫抗体AsAb、AhCGAb、EMAb、AoAb 阳性率均较健康组高，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

表2 两组自身免疫抗体阳性率比较［n(%)］

2.3 两组性激素水平比较

观察组E2、P 水平较健康组低，LH 水平较健康组高，差异有统计学意义（P<0.05）；两组FSH、T 水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表3。

表3 两组性激素水平比较（）

表3 两组性激素水平比较（）

2.4 NK 细胞、Th1/Th2 水平与自身免疫抗体的相关性分析

NK 细胞、Th1/Th2 水平与自身免疫抗体AsAb、AhCGAb、EMAb、AoAb 呈正相关（P<0.05）。见表4。

表4 NK 细胞、Th1/Th2 水平与自身免疫抗体的相关性分析

2.5 NK 细胞、Th1/Th2 水平与性激素水平的相关性分析

NK 细胞、Th1/Th2 水平与E2、P 呈负相关，与LH 呈正相关（P<0.05）。见表5。

表5 NK 细胞、Th1/Th2 水平与性激素水平的相关性分析

3 讨论

相关研究表明，正常妊娠过程中Th1/Th2 的平衡具有重要作用，其中Th1 型细胞因子可作用于妊娠组织，产生细胞免疫反应，而Th2 型细胞因子则有利于妊娠过程中胎儿生长发育［4］。郭玲等［5］研究亦表明，Th1/Th2 细胞失衡影响胚胎种植。本研究中观察组Th1/Th2 水平较健康组明显升高，原因可能在于：若Th1/Th2 失衡，其比值向Th1 偏倚，Th1 介导的细胞毒效应增强，进一步激活巨噬细胞，可能导致滋养层细胞发生免疫损伤，对胚胎着床、发育产生不良影响［6］。NK 细胞主要存在于子宫内膜及外周血中，可通过自身免疫性反应、超敏反应，无需抗原致敏性就可参与免疫反应过程，发挥自发性杀伤功能［7］。本研究中，观察组NK 细胞水平异常升高，表明局部组织存在一定炎性反应，影响下丘脑-垂体性腺轴功能，进一步干扰卵泡发育。正常免疫过程中，E2、LH 等性激素对性器官功能成熟有重要意义，同时具有细胞免疫调节功能，免疫反应与性激素相互调节［8］。本研究中观察组E2、P 水平较健康组低，LH 水平较健康组高（P<0.05），性激素水平失衡，且与NK 细胞、Th1/Th2 水平存在明显相关性，提示不孕症患者不仅性激素失调，而且存在免疫功能障碍，机体性激素水平紊乱可能是免疫功能异常的重要因素。

有研究表明，不孕症与AsAb、AhCGAb 等相关，Th 细胞功能紊乱可介导B 细胞抗体异常释放是影响卵巢功能的重要免疫因素［9］。本研究显示，观察组自身免疫抗体AsAb、AhCGAb、EMAb、AoAb 阳性率均较健康组高（P<0.05）；提示不孕症病理改变过程中多种抗体发生阳性改变，故以上抗体对筛查、诊断不孕症具有一定指导作用。原因可能为：AsAb 作为抗生育抗体，在干扰精子获能、代谢及受精卵着床的同时，还对胚胎发育过程具有一定影响，甚者造成不孕、早期流产等不良妊娠结局［10］。AhCGAb 可作用于hCG，阻断其正常功能，导致受精卵不能着床，可能导致胚胎停止发育、妊娠丢失，引发不良妊娠结局［11］。EMAb 的抗生育机制可介导子宫内膜抗原抗体反应，损伤其生理、生化代谢功能，影响受精卵着床、发育［12］。AoAb 主要产生于颗粒细胞、卵母细胞、黄体细胞等卵巢组织成分，于创伤、感染刺激等情况下产生，激活自身免疫反应，干扰孕激素、孕酮的合成分泌，影响卵巢排卵、卵泡发育［13］。王琪等［14］研究显示，多巢囊肿综合征不孕患者NK 细胞、Th1/Th2 与P（r1=-0.774,r2=-0.451,P<0.05）、E2（r1=-0.552,r2=-0.558,P<0.05）呈负相关，与LH（r1=0.449,r2=0.621,P<0.05）、T（r1=0.481,r2=0.251,P<0.05）呈正相关。本研究结果显示，NK 细胞、Th1/Th2 水平与E2、P 呈负相关，与LH 呈正相关（P<0.05），与其研究结果相似；可见NK 细胞、Th1/Th2 水平与不孕症血清性激素水平存在密切联系。

综上所述，不孕症患者NK 细胞、Th1/Th2 水平与AsAb、AhCGAb、EMAb、AoAb、性激素水平存在明显的正负相关性关系，检测相应细胞因子及自身免疫抗体对诊断不孕症具有一定临床意义。