参藿五味颗粒制备工艺及其质量标准研究

2022-12-02张美玉吴泳锡王一竹孙玥琦

中成药 2022年7期

刘明，张美玉，吴泳锡，王一竹，孙玥琦，刘智，郑飞，越皓

(长春中医药大学，吉林省人参科学研究院，吉林长春 130117)

参藿五味颗粒是长春中医药大学附属医院临床验方，由醋五味子、红参、炙淫羊藿3味中药组成。方中五味子醋制后酸涩收敛作用增强，善于滋养肝肾，为君药[1-3]；人参蒸制后为红参，其功偏温补、补气安神、滋阴生津，为臣药[4-6]；淫羊藿由羊油炮制后其药性由寒转温，补益肾阳、温散寒邪、温肾助阳为佐药[7-10]，三药配伍，可增强补益气血、壮阳益肾的功效，从而起到缓解体力疲劳、提高免疫力的作用[11-16]。

课题组前期用超高压技术对参藿五味颗粒的提取工艺进行研究，在此基础上，本实验对其成型工艺及质量标准进行研究，以期为今后工业化生产及保健食品申报提供理论基础。

1 材料

1.1 仪器 Thermo U-3000型高效液相色谱仪(美国Thermo Fisher Scientific公司)；电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)；HH-6数显恒温水浴锅(常州智博瑞仪器制造有限公司)。

1.2 试剂与药物乳糖、淀粉、糖粉、糊精购自山东聊城华阳医药辅料有限公司。醋五味子、红参、炙淫羊藿购自安徽援康中药饮片股份有限公司，经长春中医药大学王淑敏教授鉴定为2020年版《中国药典》收载品种。五味子醇甲对照品(批号110857～201815)，五味子、人参、淫羊藿对照药材(批号110703～201933、120917～201712、121632～201502)购自中国食品药品检定研究院；五味子甲素、五味子乙素(批号R12O8F45508、Y26F11Y17148)对照品购自上海源叶生物科技有限公司。甲醇、乙腈为色谱纯；其他试剂均为分析纯；水为超纯水。

2 制备工艺

2.1 提取物制备前期采用超高压提取技术进行制备，最佳提取工艺为提取溶剂70%乙醇，提取压力300 MPa，料液比1∶40，保压时间5 min。

2.2 成型工艺优化

2.2.1 药物与辅料比例分别选择糊精、乳糖、糖粉作为辅料，结果见表1。由此可知，药物与糊精比例为1∶4、1∶5时颗粒成型性最好，故以糊精为辅料，两者比例为1∶4。

表1 药物与辅料比例考察结果

2.2.2 润湿剂(乙醇)体积分数表2显示，75%乙醇制粒效果最好，故以75%为乙醇体积分数。

表2 乙醇体积分数考察结果

2.3 制备工艺见图1。

2.4 中试试验将醋五味子、红参、炙淫羊藿进行适度破碎后，按“2.3”项下制备工艺进行3批中试试验，结果见表3。由此可知，3批中试产品的成品率接近，印证了该制备工艺的可行性及所得成品的稳定性，并符合大生产一般要求。

表3 3批中试产品生产数据(n=3)

3 质量标准

3.1 TLC定性鉴别

3.1.1 五味子取本品3 g，加20 mL三氯甲烷超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，加1 mL三氯甲烷溶解，即得供试品溶液；取五味子对照药材1 g，同法制成对照药材溶液；除去五味子，按处方制成阴性样品，同法制成阴性样品溶液；取五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲对照品适量，甲醇制成1 mg/mL对照品溶液。吸取上述4种溶液，点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(30～60 ℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，置于254 nm紫外灯下检视，结果见图2。由此可知，供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性无干扰。

取上述4种溶液适量，分别点于不同来源(青岛海洋化工厂、上海盛亚化工有限公司)同一硅胶GF254薄层板上，考察方法专属性和条状点样，结果见图3。

取上述4种溶液适量，分别点于高温高湿、低温低湿条件下同一硅胶GF254薄层板上，以考察方法耐用性，结果见图4。

3.1.2 红参取本品5 g，加1 mL水搅拌均匀，再加水饱和正丁醇10 mL超声处理30 min，取正丁醇层，加3倍量氨试液(400→1 000)，振摇，静置分层，取正丁醇层蒸干，加1 mL甲醇溶解，作为供试品溶液；取红参对照药材1 g，同法制成对照药材溶液；除去红参，按处方制成阴性样品，同法制成阴性样品溶液；取人参皂苷Rb1、Re、Rf、Rg1对照品适量，甲醇制成2 mg/mL对照品溶液。吸取上述4种溶液，点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)的下层溶液为展开剂，展开，喷10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃下加热至斑点清晰，分别在日光、365 nm紫外灯下检视，结果见图5。由此可知，供试品色谱在与对照药材色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰。

取上述4种溶液适量，分别点于不同来源(青岛海洋化工厂、上海盛亚化工有限公司)同一硅胶G薄层板上，以考察方法专属性和条状点样，结果见图6。

取上述4种溶液适量，分别点于高温高湿、低温低湿条件下同一硅胶G薄层板上，以考察方法耐用性，结果见图7。

3.1.3 淫羊藿取本品0.5 g，加10 mL乙醇温浸30 min，滤过，滤液蒸干，加1 mL乙醇溶解，作为供试品溶液；取淫羊藿对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液；除去淫羊藿，按处方制成阴性样品，同法制成阴性样品溶液；取淫羊藿苷对照品适量，甲醇制成1 mg/mL对照品溶液。吸取上述4种溶液适量，点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸丁酯-甲酸-水(15∶10∶10)为展开剂，展开，喷三氯化铝试液，在365 nm紫外光灯下检视，结果见图8。由此可知，供试品色谱在与对照药材色谱相应位置上显相同荧光斑点，阴性无干扰。

取上述4种溶液适量，分别点于不同来源(青岛海洋化工厂、上海盛亚化工有限公司)同一硅胶G薄层板上，以考察方法专属性和条状点样，结果见图9。

取上述4种溶液适量，分别点于高温高湿、低温低湿条件下同一硅胶G薄层板上，以考察方法耐用性，结果见图10。

3.2 检查按2020年版《中国药典》规定，进行水分、装量差异、粒度、微生物限度检查，结果见表4，可知均符合相关要求。

3.3 含量测定

3.3.1 色谱条件 Thermo Scientific Syncronis C18反相色谱柱(150 mm×3.0 mm，5 μm)；流动相乙腈(A)-水(B)，梯度洗脱，程序见表5；体积流量0.3 mL/min；柱温30 ℃；检测波长217 nm；进样量10 μL。

表4 颗粒检查结果

表5 梯度洗脱程序

3.3.2 对照品溶液精密称取各对照品适量，置于量瓶中，甲醇定容，即得(含五味子醇甲10.20 μg/mL、五味子甲素4.95 μg/mL、五味子乙素6.50 μg/mL)。

3.3.3 供试品溶液精密称取本品0.25 g，置于20 mL量瓶中，精密加入18 mL甲醇，超声处理20 min，放冷，甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3.3.4 阴性样品溶液按处方制备不含五味子的阴性样品，按“3.3.3”项下方法制备，即得。

3.3.5 专属性试验精密吸取对照品、供试品、阴性样品溶液适量，在“3.3.1”项色谱条件下进样测定，结果见图11。由此可知，分离度符合要求，阴性无干扰。

3.3.6 线性关系考察精密吸取“3.3.2”项下对照品溶液1.0、2.0、4.0、5.0、6.0、8.0、10.0、12 μL，在“3.3.1”项色谱条件下进样测定。以溶液质量浓度为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)进行回归，结果见表6，可知各成分在各自范围内线性关系良好。

表6 各成分线性关系

3.3.7 稳定性试验取同一份供试品溶液，于0、2、4、8、12、24 h在“3.3.1”项色谱条件下进样测定，测得五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素峰面积RSD分别为0.14%、0.06%、0.01%，表明溶液在24 h内稳定性良好。

3.3.8 精密度试验精密吸取对照品溶液10 μL，在“3.3.1”项色谱条件下进样测定6次，测得五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素峰面积RSD分别为0.86%、2.64%、1.94%，表明仪器精密度良好。

3.3.9 重复性试验精密称取同一批本品约0.25 g，共6份，按“3.3.3”项下方法制备供试品溶液，在“3.3.1”项色谱条件下进样测定，测得五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素峰面积RSD分别为1.68%、1.24%、1.39%，表明该方法重复性良好。

3.3.10 加样回收率取各成分含量已知的本品约0.2 g，加入对照品溶液(五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素质量浓度分别为2.598、0.412、0.510 mg/mL)，置于50 mL量瓶中，精密加入48 mL甲醇，超声处理20 min，放冷，甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，在“3.3.1”项色谱条件下进样测定，计算回收率，见表7。