CD44v6与人乳头状瘤病毒L1衣壳蛋白在宫颈鳞癌及癌前病变中的诊断价值*

何苗，洪颖，蔡良良，谢绮

（江南大学附属医院 妇产科，江苏 无锡 214122）

宫颈鳞癌是全球范围内第二高发妇科肿瘤，发病率仅次于乳腺癌，全球每年约9%的女性癌症患者死于宫颈鳞癌[1-2]。从宫颈癌前病变发展到宫颈鳞癌大约需要10～20 年，高危型人乳头状瘤病毒（high-risk human papillomavirus, HR-HPV）长期持续感染可导致癌前病变，进而恶化为宫颈鳞癌[3]。因此，早期准确诊断宫颈鳞癌及癌前病变，及早开展对症治疗对改善宫颈病变患者预后意义重大。目前临床诊断宫颈病变的方法主要有HR-HPV 测定和液基薄层细胞学检测，此类诊断对设备、技术要求颇高，临床普及有限[4-5]。

目前国内外研究[6-7]证实，细胞增殖与凋亡程序失控，恶性细胞大量增殖，导致宫颈癌前病变，进一步发展为宫颈鳞癌。CD44v6 是CD44 的拼接变异体之一，在肿瘤细胞增殖、新生淋巴管形成、肿瘤侵袭转移等方面具有重大作用[8]。HPV L1 衣壳蛋白是HPV 病毒主要的衣壳蛋白，其表达情况与HPV病毒早期感染及病情进展密切相关[9]。有研究[10-11]证实，CD44v6、HPV L1 衣壳蛋白在宫颈鳞癌及癌前病变诊断中具有一定价值。笔者推测CD44v6 联合HPV L1 衣壳蛋白诊断宫颈鳞癌及癌前病变可能效能更佳，但目前尚缺乏相关研究验证，鉴于此，本研究分析CD44v6、HPV L1 衣壳蛋白及两者联合在宫颈鳞癌及癌前病变中的诊断价值，以期为临床早期诊断宫颈病变提供参考，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2017 年1 月—2022 年1 月江南大学附属医院102 例手术切除的宫颈鳞癌及癌前病变组织石蜡标本。其中，宫颈鳞癌组织石蜡标本41 例，患者年龄26～65 岁，平均（49.04±6.28）岁；癌前病变组织石蜡标本61 例，其中，宫颈低级别上皮内病变（low grade intraepithelial lesions, LSIL）30 例，年龄 2 4～62 岁，平均（48.21±5.99）岁，宫颈高级别上皮内病变（high grade squamous intraepithelial lesion, HSIL）31 例，年龄23～66 岁，平均（47.83±6.01）岁；另选取同期49 例因子宫肌瘤行子宫切除的正常宫颈组织石蜡标本为对照，年龄22～64 岁，平均（47.36±5.82）岁。所有标本均由3 名从业10 年以上的病理医师经病理诊断确诊（诊断意见不一致时通过讨论达成一致意见）。纳入标准：①经病理科证实病理类型；②年龄＞18 岁；③术前未接受任何形式治疗；④临床资料完整。排除标准：①伴有其他部位恶性肿瘤、阴道炎；②重要脏器功能不全；③伴有免疫缺陷性疾病、传染性疾病、性病；④哺乳或妊娠者。

1.2 免疫组织化学法检测宫颈鳞癌组织、LSIL 组织、HSIL 组织、正常宫颈组织中CD44v6、HPV L1衣壳蛋白表达

各组织标本石蜡包埋、切片、灭活、微波抗原修复、洗涤，添加鼠抗人CD44v6 单克隆抗体、HPV L1 衣壳蛋白抗体（美国Abcam 公司），4℃孵育过夜，第2 天采用磷酸盐缓冲液冲洗，滴加二氨基联苯显色液（四川海诺威科技有限公司），苏木精复染、脱水、封片。染色程度为无色（0 分）、淡黄色（1 分）、黄色（2 分）、棕黄色（3 分），染色范围＜5%、5%～＜25%、25%～＜50%、50%～＜75%、≥75%，分别记为0 分、1 分、2 分、3 分、4 分，计算染色程度与染色范围评分乘积，将结果为0 分者记为阴性（-）表达，否则记为阳性（+）表达（1～4 分记为+，5～8 分记为++，＞8 分记为+++）。

1.3 统计学方法

数据分析采用SPSS 18.0 统计软件。计数资料以例（%）表示，多组间比较用χ2检验，进一步两两比较检验水准α´= 0.008；等级资料采用秩和检验；绘制受试者工作特征（ROC）曲线。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同组织中CD44v6阳性表达率的比较

正常宫颈组织、LSIL 组织、HSIL 组织、宫颈鳞癌组织中CD44v6 阳性表达率比较，经χ2检验，差异有统计学意义（P＜0.05），宫颈鳞癌组织中CD44v6 阳性表达率高于正常宫颈组织、LSIL 组织及HSIL 组织（P＜0.05），HSIL 组织中 CD44v6 阳性表达率高于正常宫颈组织和LSIL 组织（P＜0.05）。见表1。

表1 不同组织中CD44v6表达的比较 例（%）

2.2 不同组织中HPV L1 衣壳蛋白阳性表达率的比较

正常宫颈组织、LSIL 组织、HSIL 组织、宫颈鳞癌组织中HPV L1 衣壳蛋白阳性表达率比较，经χ2检验，差异有统计学意义（P＜0.05），宫颈鳞癌组织中HPV L1 衣壳蛋白阳性表达率低于正常宫颈组织、LSIL 组织及 HSIL 组织（P＜0.05），HSIL 组织中HPV L1 衣壳蛋白阳性表达率低于正常宫颈组织和LSIL 组织（P＜0.05）。见表2。

表2 不同组织中HPV L1衣壳蛋白表达的比较 例（%）

2.3 宫颈鳞癌组织中CD44v6、HPV L1 衣壳蛋白对宫颈鳞癌的诊断效能

ROC 曲线分析结果显示，宫颈鳞癌组织中CD44v6、HPV L1 衣壳蛋白及二者联合诊断宫颈鳞癌的敏感性分别为 70.73%（95% CI：0.543，0.834）、75.61%（95% CI：0.594，0.871）、70.73%（95% CI：0.543，0.834）； 特 异 性 分 别 为 77.05%（95% CI：0.642，0.865）、73.77%（95% CI：0.607，0.838）、90.16%（95% CI：0.792，0.959）；AUC 分别为 0 .746（95% CI：0.648，0.844）、0.742（95% CI：0.638，0.846）、0.907（95% CI：0.848，0.966）。二者联合诊断宫颈鳞癌的AUC 大于 C D44v6、HPV L1 衣壳蛋白单一诊断（Z=5.621 和5.647，均P=0.000）。见表 3 和图1。

表3 宫颈鳞癌组织中CD44v6、HPV L1衣壳蛋白诊断宫颈鳞癌的诊断效能分析

图1 CD44v6、HPV L1衣壳蛋白诊断宫颈鳞癌的ROC曲线

2.4 癌前病变组织中CD44v6、HPV L1 衣壳蛋白对HSIL的诊断效能

ROC 曲线分析结果显示，癌前病变组织中CD44v6、HPV L1 衣壳蛋白及二者联合诊断HSIL 的敏感性分别为74.19%（95%CI：0.551，0.875）、70.96%（95%CI：0.518，0.851）、70.96%（95% CI：0.518，0.851），特异性分别为76.67%（95%CI：0.573，0.894）、73.33%（95% CI：0.538，0.870）、90.00%（95% CI：0.723，0.974），AUC 分 别 为 0.748（95%CI：0.649，0.847）、0.726（95%CI：0.627，0.825）、0.890（95%CI：0.820，0.959）。二者联合诊断 HSIL 的 AUC 值高于CD44v6、HPV L1 衣壳蛋白单一诊断（Z=5.303 和5.424，均P=0.000）。见表4 和图2。

图2 CD44v6、HPV L1衣壳蛋白诊断HSIL的ROC曲线

表4 癌前病变组织中CD44v6、HPV L1衣壳蛋白诊断HSIL的诊断效能分析

3 讨论

宫颈鳞癌的病因至今尚未完全明确，该病的发生与基因、病毒感染、过早性生活等有关[12]。HPV 作为一种具有高度特异性的嗜上皮性病毒，人体是其唯一宿主，HR-HPV 持续感染的宫颈病变进展为宫颈鳞癌的概率大幅度提升，在宫颈癌前病变发展期间及时筛查、准确诊断并给予对症治疗对降低宫颈鳞癌发生率、病死率意义重大，临床需要更多高效、安全的生化因子辅助早期准确诊断宫颈鳞癌及癌前病变。CD44 是具有高特异性的单链跨膜糖蛋白，广泛存于细胞表面，其拼接变异体CD44v6 与恶性肿瘤细胞侵袭、转移关系密切[13]。HPV L1 衣壳蛋白属于LR 区编码的核蛋白，HPV 病毒复制后在表层细胞中异常高表达，当HPV 脱氧核糖核酸与宿主细胞相互结合后，HPV L1 衣壳蛋白表达水平降低[14]。虽然目前已有研究[10-11]指出，CD44v6、HPV L1 衣壳蛋白在宫颈鳞癌及癌前病变诊断中具有一定价值，但关于两者联合诊断宫颈鳞癌及癌前病变的价值尚缺乏报道。

本研究显示，宫颈鳞癌组织中CD44v6 的阳性表达率高于正常宫颈组织、LSIL 组织及HSIL 组织，HSIL 组织中CD44v6 阳性表达率高于正常宫颈组织和LSIL 组织，提示CD44v6 在宫颈病变组织中异常高表达，且随着宫颈病变的严重程度增加，CD44v6表达水平呈升高趋势。编码CD44 的基因位于人体11 号染色体，CD44 基因包含20 个外显子、19 个内含子，mRNA 能够和10 个标准外显子组装在一起，第6 个变体外显子编码CD44v6，CD44v6 参与细胞生长、凋亡、迁移及血管生成等多种生物过程。CD44v6 对透明质酸的亲和力优于CD44，CD44v6 直接增强酪氨酸蛋白激酶相关的信号通路，并作为表皮生长因子、血管内皮生长因子等各种细胞因子的辅助受体，介导细胞增殖、凋亡和血管生成等过程，透明质酸和CD44v6 相互作用可刺激基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9 产生，修饰细胞外基质成分，进而增强恶性肿瘤细胞的侵袭、定植。

本研究显示宫颈鳞癌组织中HPV L1 衣壳蛋白的阳性表达率低于正常宫颈组织、LSIL 组织及HSIL组织，HSIL 组织中HPV L1 衣壳蛋白的阳性表达率低于正常宫颈组织和LSIL 组织，说明HPV L1 衣壳蛋白在宫颈病变组织中异常低表达，且随着宫颈病变的严重程度增加，HPV L1 衣壳蛋白表达水平呈下降趋势。HPV L1 衣壳蛋白属于外来抗原类，是免疫细胞攻击HPV 病毒及HPV 病毒感染细胞的重要靶位，HPV L1 衣壳蛋白能够与T 细胞及部分组织相容物结合为免疫复合物，激活人体免疫反应，免疫清除HPV 病毒，宫颈病变出现自愈倾向。HPV 脱氧核糖核酸与宿主细胞发生整合后，HPV病毒片段可永久进入宿主染色体中，激活病毒癌基因，并随着细胞分裂持续表达，造成上皮细胞无法成熟化，病毒完整周期不能完成，HPV L1 衣壳蛋白表达降低直至消失，无法有效刺激机体免疫反应，病变细胞免疫逃逸，最终导致宫颈病变或病变进展。李娜等[15]指出，随着宫颈病变严重程度的增加，HPV L1 衣壳蛋白的表达水平呈现下降趋势，HPV L1 衣壳蛋白表达降低提示HPV 病毒持续感染，发生宫颈病变风险明显升高。

ROC 曲线分析结果显示，宫颈鳞癌组织中CD44v6、HPV L1 衣壳蛋白及二者联合诊断宫颈鳞癌的敏感性分别为70.73%、75.61%和70.73%，特异性分别为77.05%、73.77%和90.16%，AUC 分别为0.746、0.742 和0.907；癌前病变组织中CD44v6、HPV L1 衣壳蛋白及二者联合诊断HSIL 的敏感性分别为74.19%、70.96% 和70.96%，特异性分别为76.67%、 73.33% 和 9 0.00%， AUC 分 别 为 0 .748、0.726 和 0 .890。提示 C D44v6 联合 H PV L1 衣壳蛋白诊断宫颈鳞癌、不同级别癌前病变的效能优于单一诊断，二者联合诊断宫颈鳞癌及癌前病变价值较高。

综上所述，对宫颈不同病变组织行CD44v6 与HPV L1 衣壳蛋白检测，CD44v6 在宫颈病变组织中异常高表达，且随着宫颈病变的严重程度增加，CD44v6 表达水平呈升高趋势，HPV L1 衣壳蛋白的变化与CD44v6 相反，两者联合诊断宫颈鳞癌及癌前病变价值较高。本研究不足之处在于为单中心研究，样本量有限，后期希望能够扩大样本量进一步佐证本研究结论。