p53、p57联合短串联重复序列基因分型在葡萄胎诊断中的应用*

刘兰兰，杨晶珍

（赣州市妇幼保健院 妇科，江西 赣州 341000）

葡萄胎是指妊娠后胎盘绒毛滋养细胞增生，绒毛间质高度水肿，形成大小不等的水泡，这些水泡相连成串，形似葡萄而得名[1]。葡萄胎属于良性滋养细胞肿瘤，分为完全性葡萄胎和部分性葡萄胎。完全性葡萄胎是胎盘绒毛全部受累，整个宫腔充满水泡状，弥漫性滋养细胞增生，没有胎儿及胚胎组织可见；部分性葡萄胎是部分胎盘绒毛变性，局部滋养细胞增生，可以看见胚胎以及胎儿组织，但往往胎儿已经死亡[2]。早期诊断对葡萄胎患者的治疗具有重要意义。组织学形态是临床鉴别葡萄胎的金标准[3]。近年来，临床通过超声检查可以发现滋养叶细胞肿瘤病变，然而，葡萄胎病变与水肿性流产较为相似，可能会出现误诊[4]。有研究[5]报道，p53、p57 蛋白表达在葡萄胎鉴别中具有重要价值。p53基因分为野生型和突变型，野生型p53基因具有抑癌作用，能够调节细胞的增殖、分化，而突变型p53能够促进细胞增殖。免疫组织化学法检测发现突变型p53在葡萄胎中的突变率较高。p57基因位于染色体11p15.5，为父源性印记基因母源性表达，而完全性葡萄胎不含母体核DNA，部分性葡萄胎和水肿性流产DNA 来自于父母双方，检测p57基因表达可用于葡萄胎鉴别[6]。此外，短串联重复序列基因分型广泛用于遗传标记，具有重复次数不同的核心序列，形成丰富的群体多态性，通过分析短串联重复序列位点可以快速判断葡萄胎DNA 来源[7]。然而，p53、p57 蛋白及短串联重复序列基因分型单独用于葡萄胎诊断的准确率并不高。本研究拟探讨p53、p57 联合短串联重复序列基因分型用于葡萄胎的诊断及其临床价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取 2017 年 3 月—2020 年 3 月赣州市妇幼保健院收治的经病理检查确诊的46 例完全性葡萄胎患者（完全性葡萄胎组），34 例部分性葡萄胎患者（部分性葡萄胎组），以及26 例水肿性流产患者（水肿性流产组）作为研究对象。其中，完全性葡萄胎组患者年龄19～38 岁，平均（27.42±4.69）岁；初次妊娠32 例，2 次及以上14 例。部分性葡萄胎组患者年龄18～39 岁，平均（26.78±4.35）岁；初次妊娠23 例，2 次及以上11 例。水肿性流产组患者年龄19～37 岁，平均（26.56±4.18）岁；初次妊娠18 例，2 次及以上8 例。3 组患者的年龄、妊娠次数比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究获医院医学伦理委员会审核批准，患者签署知情同意书。

1.2 方法

获取所有患者的组织标本，对所有标本进行免疫组织PV 9000 法染色，脱蜡、水化后苏木精浸染5 min，冲洗，1%盐酸酒精分化3 s，清水冲洗40 min，0.5%伊红酒精浸染1 min，脱水，二甲苯透明，中性树胶封固，制成 4 μm 切片，鼠抗人 p 57、p53 单克隆抗体购自武汉华美生物技术有限公司，试剂盒购自上海梵态生物科技有限公司。

p57 蛋白定位于细胞核，呈棕黄色，选取切片中不同部位5 个高倍视野，每个视野计数100 个细胞，统计着色细胞数占比，着色细胞占比＞30%为阳性，着色细胞占比≤30%为阴性。p53 蛋白定位于细胞核，呈棕黄色，着色细胞数＞10%为阳性，着色细胞数≤10%为阴性[8]。

采用短串联重复序列基因分型试剂盒（购自福州泰普生物科技有限公司），根据说明书进行15 个短串联重复序列位点及1 个性别识别位点扩增识别分析，比较每个短串联重复序列位点等位基因，识别绒毛组织中异常父源等位基因。若至少2 个短串联重复序列位点全部为父源性等位基因，则为完全性葡萄胎；若每个短串联重复序列位点均出现2 个父源性和1 个母源性等位基因，则为部分性葡萄胎；若具有来自双亲的平衡性双等位基因表型，则为水肿性流产[9]。

1.3 统计学方法

数据分析采用SPSS 22.0 统计软件。计量资料以均数±标准差（）表示，比较做t检验；计数资料以率（%）表示，比较用χ2检验或Kappa 一致性检验，两两比较用 Pearson χ2检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 组织病理学结果

完全性葡萄胎：绒毛间质明显水肿，且有水池形成，滋养叶细胞明显增生。部分性葡萄胎：绒毛间质轻微水肿，可见有水池，滋养细胞包涵体形成，滋养叶细胞轻度或中度增生。水肿性流产：绒毛间质轻微水肿，滋养叶细胞增生不明显。见图1。

2.2 3组患者p53阳性率的比较

完全性葡萄胎组中，41 例p53 阳性，阳性率为89.13%；部分性葡萄胎组中，27 例p53 阳性，阳性率为79.41%；水肿性流产组中，3 例p53 阳性，阳性率为11.53%。3 组p53 阳性率比较，差异有统计学意义（χ2=48.716，P=0.000）；完全性葡萄胎组和部分性葡萄胎组p53 阳性率均高于水肿性流产组（χ2=42.081和27.149，P=0.000）。见表1。

2.3 3组患者p57阳性率的比较

完全性葡萄胎组中，p57 阳性0 例，阳性率为0.00%；部分性葡萄胎组中，30 例p57 阳性，阳性率为88.24%；水肿性流产组中，26 例p57 阳性，阳性率为100.00%。3 组p57 阳性率比较，差异有统计学意义（χ2=84.035，P=0.000）；完全性葡萄胎组p57 阳性率均低于部分性葡萄胎组和水肿性流产组（χ2=64.941和72.000，P=0.000）。见表2。

表2 3组患者p57阳性率的比较

2.4 短串联重复序列基因分型结果

41 例完全性葡萄胎短串联重复序列基因分型诊断结果与病理诊断相符，符合率为89.13%（41/46）；31 例部分性葡萄胎短串联重复序列基因分型诊断结果与病理诊断相符，符合率为91.18%（31/34）；25 例水肿性流产短串联重复序列基因分型诊断结果与病理诊断相符，符合率为96.15%（25/26）。所有患者总符合率为91.51%（97/106），经Kappa 一致性检验，2 种诊断方法具有较好的一致性（κ=0.755，P=0.000）。见表3。

表3 短串联重复序列基因分型结果 例（%）

2.5 p53、p57联合短串联重复序列基因分型结果

44 例完全性葡萄胎p53、p57 联合短串联重复序列基因分型诊断结果与病理诊断相符，符合率为95.65%（44/46）；32 例部分性葡萄胎 p53、p57 联合短串联重复序列基因分型诊断结果与病理诊断相符，符合率为94.12%（32/34）；26 例水肿性流产p53、p57联合短串联重复序列基因分型诊断结果与病理诊断相符，符合率为100.00%（26/26）。所有患者总符合率为96.23%（102/106），经Kappa 一致性检验，2 种诊断方法具有较好的一致性（κ=0.804，P=0.000）。见表4。

3 讨论

葡萄胎主要由受精卵异常引起，卵子中无核DNA，仅有胞浆DNA，与精子受精后，只有精子DNA自身复制，或者双精子同时受精一个空卵，导致受精卵46 条染色体全是父源性，进而使大量滋养细胞增生，且没有胚胎结构，从而形成葡萄胎[10]。研究发现，葡萄胎多发于高龄（＞35 岁）或低龄（＜20 岁）孕妇，此外，营养不足、叶酸缺乏、病毒感染、遗传等均是葡萄胎形成的重要因素，患者临床主要表现为孕期不规则阴道流血以及下腹部疼痛，临床主要采用清宫和药物治疗[11]。病理形态诊断是鉴别葡萄胎的主要方法，然而，部分患者缺乏典型特征，临床鉴别时容易误诊，进而影响临床治疗和预后[12]。因此，临床急需寻找准确鉴别葡萄胎的方法。

本研究中完全性葡萄胎p53、p57 阳性率分别为89.13%、0.00%，部分性葡萄胎p53、p57 阳性率分别为79.41%、88.24%，水肿性流产p53、p57 阳性率分别为11.54%、100.00%，说明p53 蛋白在完全性葡萄胎，部分性葡萄胎中阳性表达率较高，在水肿性流产中阳性表达率较低，而p57 蛋白在部分性葡萄胎、水肿性流产中阳性表达率较高。短串联重复序列基因分型与病理形态诊断总符合率为91.51%，具有较好的一致性。有研究报道，完全性葡萄胎与野生型p53 上调有关，p53 上调能够一定程度上阻止完全性葡萄胎的过度增生[13]。完全性葡萄胎p53 阴性表达者，可能与突变性p53 缺失有关[14]。然而，p53 突变位点及种类较多，临床仅根据p53 表达尚不能准确鉴别葡萄胎[15]。由于p57 母系表达，完全性葡萄胎染色体均来自父系，故p57 不表达，部分性葡萄胎为三倍体，其中1 个来自母系，则p57 表达，因此，检测p57 表达用于鉴别完全性葡萄胎具有重要价值[16]。临床检测p57 表达鉴别部分性葡萄胎与水肿性流产仍然具有一定的困难[17]。本研究中p53、p57 联合短串联重复序列基因分型诊断结果与病理诊断相符，总符合率为96.23%（102/106），与病理诊断具有较好的一致性，通过p53、p57 联合短串联重复序列基因分型诊断葡萄胎能够进一步提高临床诊断准确性。短串联重复序列遍布于人类整个基因组，在非编码区含量丰富且高度遗传稳定，其位点具有重复单元小、片段短，易于扩增的优点，可以多个位点同步扩增，提高工作效率，节约鉴别诊断时间[18]。然而，短串联重复序列基因分型仅可以区分三倍体是父源性还是母源性，不能区分双亲来源，且在家族性葡萄胎检测中误诊、漏诊率较高[19]。因此，p53、p57 联合短串联重复序列基因分型用于葡萄胎诊断可以充分利用每种鉴别方法的优点，尽可能地降低误诊、漏诊，同时结合临床病理形态特点，提高葡萄胎鉴别诊断的准确性。

综上所述，p53、p57 联合短串联重复序列基因分型用于葡萄胎诊断具有一定价值，临床可通过完全性和部分性葡萄胎核型和病理特征进行区别，p53、p57 免疫组织化学法可以辅助区别。