常见动物疫病监测采样原则、方法及存在的问题

吴晓辉 松溪县动物疫病预防控制中心 福建松溪 353500

随着国民经济的增长，人们对畜禽产品消费日益增加，畜牧业也随之步入规模化、集约化的生产模式，以满足人们的消费需求。由于受到资源性约束和环境保护的压力，畜牧业发展存在的问题也日益凸显。为应对问题，我国畜牧业逐渐向北方及经济欠发达地区转移，这就增大畜禽调运频次，也增加了动物间疫病传播风险。为防控动物疫病传播，加强动物疫病监测就显得尤为重要。

在动物疫病监测中，如果采样人员如不遵守采样原则、变更采样方式，有可能改变试验结果。为保证监测结果的准确性，以下就常见动物疫病监测采样的原则、方法及存在的问题进行阐述与分析。

1 一般原则和采样前的准备工作

1.1 样品采集所遵循的基本原则 患病动物呈现急性死亡时，要限制移动和严禁开放式解剖，确诊非为炭疽病后才能进行解剖采样。在采样过程中，应该从胸腔到腹腔，先采实质器官后采腔肠器官，选择无菌采集的方式，避免对外部环境造成污染。要选择采集病变较为典型、明显的病料，也可根据诊疗结果和监测目的采集不同的病料。为保证化验的准确性，不得采集使用过药物的动物样品。如果动物已死亡，应在死后6 h内完成采样。在采集血样前，动物需要禁食8 h，再根据检验目的和采样对象来确定采血数量。采样人员在采样过程中要做好自身的防护工作，避免感染人畜共患病。采样结束后要对废弃物进行集中处理，并对采样环境进行消毒，避免对周围生态环境造成污染。采集过程中坚持先排查后采样、尽早采样、无菌操作、合理选择采样、生物安全防护的原则。

1.2 采样前的准备工作 在采集样品之前，工作人员应该熟知动物疫病防控相关的法律法规及专业知识，能够熟练地掌握各种动物的采样方法和程序，避免刺激动物而对采样人员构成威胁。动物卫生监督采样时，至少要邀请一名动物卫生监督员参与。采样过程中所使用的器械必须经过严格消毒，金属器械可采用高压、干烤、煮沸灭菌消毒方法，采样前需经75%酒精擦拭再用火焰消毒后才能使用；器皿可以用高压、干热灭菌或用0.5%～1%碳酸氢钠煮沸灭菌。采样用的注射器和针头尽量使用一次性的，采样完成后需采取集中无害化处理。

2 采集方法

2.1 血液的采集 动物采血方法较多，可根据不同动物种类采取不同的方法。牛常用尾静脉采血，羊用颈静脉采血，猪用前腔静脉采血，禽类用内翅静脉采血。采集前需要对采集部位进行清理、消毒、干燥。采集全血样品，可用已加抗凝剂的真空采血管；采集血清样品，可用已加促凝剂和分离胶的真空采血管。

2.2 一般组织采集 组织样品采样根据化验需求不同，可分为病原学检测样品和组织病理学检查样品。组织采样剥离动物皮肤时可用常规器械；剥离体腔和采集病料要用消毒过的器械，采用无菌操作方法采集，保证病料新鲜无污染。病毒分离用的组织块，要单独保存于消毒过的容器内。采集组织做病理学检查的，应采集病变部位与健康部位的交接处，厚度不超0.5 cm，面积1～2 cm2，组织块应存放于10%福尔马林溶液中，组织块与溶液比以1:10为宜，固定时间16～24 h。如果要制作冷冻切片，需将其放置在0～4℃容器中保存，尽快送到实验室检查。

2.3 其它样品采集 在采集其它样品时，应该注意以下几个问题。第一，采集尿液样品应在早上进行，用清洁的容器接取中段尿液。第二，采集呼吸道或咽喉内分泌物要用灭菌的棉拭子，置于磷酸盐缓冲盐水（pH7.2～7.4）中低温保存。第三，采集皮肤样品要选取病变部位的水疱液或结痂。第四，用吸管吸取肠腔内容物时，要先对肠壁实施烧烙。第五，用棉拭子取泄殖腔样品时，要插入直肠壁取黏液和粪便；如作为寄生虫检测用样品，粪便越新鲜越好。第六，作为卫生或疾病调查采集环境样品时，应采集通风管、下水道等有代表性的样品。第七，重大动物疫病抽样，应按国家标准执行。

3 样品的记录、包装、保存和运输

完成采集后，采样人员要对采集的样品进行编号并填写采样单，采样单要一式三份，两份送实验室，一份留档保存。采样单要详细记录养殖场、畜主和送检人的基本信息；发病动物的品种、日龄及数量，动物发病史、临床症状、免疫接种和治疗用药情况；送检样品清单、说明及检验科目等。

样品的包装应该选择安全、不透水、防漏的容器，每个样品都要单独包装，包装外表要标注放置方向和粘贴标签，标记样品名称、编号和采样日期等。采集的样品经过包装、表面消毒后从陆路由专人以最快的速度送往实验室。短时间内无法送达的、24 h内能送达的，应存放在4℃左右的容器中运送；24 h内无法送达的，在不影响化验结果的前提下可采取冷冻运送。样品在送检过程中要缓冲放置，避免剧烈震动。

4 样品采集、保存、运送中存在的问题

在样品采集、保存、运送过程中，常存在如下问题，应注意并避免导致相关问题的因素。（1）血样溶血：主要原因有采血操作不熟练造成局部血肿、采集血肿部位血液，血液内混入酒精或血液未凝固就送检，运送过程中振荡剧烈等。（2）血样腐败变质：置于常温下过久、保存或运送过程未冷藏。（3）血样血清不析出：用塑料试管采血、外界气温低、血液静置时间不足就进行离心操作。（4）棉拭子采集问题：采集咽喉和泄殖腔拭子时，棉拭子未贴合咽喉或泄殖腔壁，未采集到分泌物或采集过少、保存液选择不正确。（5）组织病料采集问题：采集的组织病料不典型、不新鲜、已污染，不同的组织病料未单独包装。此外，还存在样品送检清单填写模糊的问题。