太行鸡大肠杆菌、铜绿假单胞菌和奇异变形杆菌混合感染的诊治

张庆如，刘士萌，周佳雪，郝镒涵，郑金环，周曙光，许利军★，王学静，陈立功,4★，刘聚祥，4

（1.河北农业大学动物医学院，河北保定 071001；2.保定市畜牧工作站，河北保定 071051；3.河北省畜牧兽医研究所，河北保定 071000；4.河北省太行鸡产业技术研究院，河北赞皇 051230）

大肠杆菌呈全球性分布，存在于多种哺乳动物和禽类，是人和动物肠道内的定居菌群，正常的雏鸡体内，肠道中10%～15%的大肠杆菌属于潜在致病菌。铜绿假单胞菌又称绿脓杆菌，常分布于潮湿环境中，也可存在于人和动物的皮肤、呼吸道和肠道等部位，是引起创伤感染最常见的病原。据报道，铜绿假单胞菌与鸡和火鸡的多病因呼吸道病有关。变形杆菌属的奇异变形杆菌可引起感染鸡表现呼吸道症状、腹泻、瘫痪、蜂窝织炎甚至死亡。表现为食欲减退、呕吐和腹泻等。2021年9月，河北保定某鸡场饲养的太行鸡发病，主要表现为呼吸道症状及面部肿胀。根据病理学和实验室检测结果，初步判定该场鸡发生了大肠杆菌、铜绿假单胞菌和奇异变形杆菌的混合感染，并根据药敏试验结果对该鸡群疾病进行了治疗。本文对太行鸡大肠杆菌、铜绿假单胞菌和奇异变形杆菌混合感染的发病情况、病理变化、实验室诊断及防治措施进行了介绍，以为相关从业人员提供参考。

1 发病情况

2021年9月，保定某养殖场饲养的72日龄太行鸡发病，据养殖场负责人描述，病鸡最先出现打喷嚏、呼噜、咳嗽等呼吸道症状，鼻腔流出少量水样黏液，发病3天后有的病鸡面部肿胀，眶下窦尤为明显，鸡群呼吸道症状加重，夜间尤为明显，并开始零星死亡，每天死亡鸡只10只左右。

2 剖检病变

对病死鸡进行病理剖检，可见鼻腔积有黏液或少许干酪物（2/6）；病鸡面部肿胀（3/6）：脑部皮下、颈部皮下或眶下窦呈胶冻样浸润或呈黄色干酪样（5/6）。心外膜附有黄色或白色纤维素样分泌物（4/6）；局部肺脏呈灰绿或暗红色（2/6）；肝脏附有黄色或白色纤维素样分泌物（3/6）；气囊附有泡沫样分泌物或黄白色干酪物（6/6）；气管黏膜附有黏液或干酪物（2/6）；脾脏瘀血、轻度肿胀（2/6）；肾脏瘀血、轻度肿胀（2/6）；十二指肠和空肠黏膜出血（1/6）。其余脏器未见肉眼病变。

3 实验室诊断

3.1 病毒分子生物学诊断

按有关文献报道方法进行病料的研磨、除菌、RNA提取及RT-PCR检测，琼脂糖凝胶电泳结果表明病料均呈禽偏肺病毒、传染性支气管炎病毒、禽流感病毒和新城疫病毒阴性。

3.2 细菌分离鉴定

无菌操作取病鸡皮下分泌物、肝脏、气囊等病料，分别接种于TSA平板、麦康凯琼脂平板和十六烷基三甲基溴化铵琼脂平板上，按常规进行细菌分离培养与纯化。结果表明自收集病料共纯化到3种细菌。第一种纯化细菌接种在麦康凯琼脂平板上呈边缘整齐、稍隆起、表面光滑湿润，圆形、红色菌落；第二种纯化细菌在十六烷三甲基溴化铵琼脂上呈扁平无定型，向周边扩散或略有蔓延趋势，呈灰白色，周围有水溶性色素菌落；第三种纯化细菌在TSA平板上呈同心环均匀扩展的薄膜状生长，形成以细菌接种部位为中心的厚薄交替、同心圆型的层层波状菌苔。选取3种纯化细菌的单菌落进行革兰氏染色、镜检，结果显示：3种细菌均为革兰氏阴性、无芽孢杆菌。

参照细菌基因组DNA小量纯化试剂盒说明书提取3种分离细菌代表菌株的基因组DNA。按文献方法进行细菌的16S rRNA基因PCR检测，阳性PCR产物送生工生物工程（上海）股份有限公司进行双向测序。测序结果经拼接后分别经BLAST比对，结果显示，3种分离细菌代表菌株的16S rRNA基因分别与大肠杆菌、铜绿假单胞菌和奇异变形杆菌的同源性最高。根据上述结果，初步判断上述3种细菌分别为大肠杆菌、铜绿假单胞菌和奇异变形杆菌。

3.3 药敏试验

采用纸片扩散（K-B）法检测3.2中3种细菌对阿莫西林、林可霉素、阿米卡星、四环素、头孢噻肟、强力霉素、多粘菌素、恩诺沙星和诺氟沙星等9种抗菌药物的敏感性。结果表明，大肠杆菌对头孢噻肟、阿米卡星、诺氟沙星和恩诺沙星极敏，对其他5种药物均耐药；铜绿假单胞菌对头孢噻肟、阿米卡星、诺氟沙星和恩诺沙星均极敏，对四环素和强力霉素均低敏，对其余3种药物均耐药；变形杆菌对头孢噻肟和诺氟沙星均极敏，对阿米卡星和恩诺沙星均高敏，对阿莫西林低敏，对其余4种均耐药。

4 防治

根据发病鸡的临床症状观察、病理学剖检、肿头综合征相关病毒分子生物学检测和细菌学诊断结果，初步判定该鸡场太行鸡发生了3种细菌的混合感染。建议采取措施如下：

4.1 加强鸡群饲养管理

管理上应注意鸡只饲养密度，避免拥挤。注意环境温度和湿度，避免过冷、过热、过于干燥或过于潮湿。夜晚做好鸡只栖息环境的通风换气，减少有害气体带来的不良应激。鸡只放养后，及时彻底清除栖息环境中粪便，并做好环境、用具的消毒工作，减少鸡场细菌的载量。

4.2 治疗方法

发病早期，尽早进行药敏试验，根据药敏结果选用表现为高敏及以上的抗菌药物进行治疗。同时添加适量维生素C，增强鸡只的抗病力。

4.3 及时总结发病原因

鸡只抵抗力强时，自身携带的条件致病菌可能不引发疾病；但在各种应激因素刺激下，细菌可以通过黏膜定植或皮肤伤口进入宿主体内，从而诱发疾病。据调查，鸡群发病前1周曾注射过新流腺疫苗，免疫接种过程中使用少数针头，栖息环境中鸡只密度过大。因此该场鸡细菌混感的发生可能与免疫应激、密度过大及免疫过程中不勤换针头有关。为了防止接种疫苗时造成细菌的扩散污染，建议管理人员严格规范接种操作，对注射器、针头和注射部位要进行充分消毒，并勤换针头。