超高效液相串联质谱快速检查橘红颗粒（胶囊、片）中水麦冬酸

★ 邓茂芝 洪燕 周云峰 吴喆 邓杰华 黄炳泉（.宜春市检验检测中心 江西 宜春336000；.江西省药品检验检测研究院 南昌 33009）

橘红颗粒（胶囊、片）是由化橘红、陈皮、法半夏等药味制成的复方制剂，具有化痰止咳、清肺的功效，收载于《中华人民共和国药典》2020年版一部［1］。橘红颗粒方中的法半夏为天南星科植物半夏块茎的炮制加工品，具有燥湿化痰的疗效［2-3］。近年来，随着半夏野生资源减少、需求量增大、人工栽培技术滞后等问题日益凸显［4］，正品半夏的供给越来越难以满足市场的需要，以致出现半夏同属或同科伪品混用、冒充现象［5-8］。虽然已有快速检查半夏药材和虎掌南星药材中水麦冬酸的方法报道［9］，但是该方法仅针对半夏原药材是否掺伪品进行鉴别检查。虎掌南星为天南星科植物虎掌的干燥块茎［10］，外观与半夏类似，常规性状鉴别难以分辨，易带入以半夏为原料的中药复方制剂中，给该类制剂的安全有效用药带来隐患。目前，橘红颗粒（胶囊、片）的质量研究主要集中在有效成分柚皮苷的鉴别或含量测定方面［11-12］，而中药成方制剂中开展半夏真实性的检查尚无文献报道。

本研究以虎掌南星的特征性成分水麦冬酸为定性指标，采用超高效液相串联质谱技术（UPLCMS/MS）建立橘红颗粒（胶囊、片）中水麦冬酸快速检查方法，筛查制剂是否存在以虎掌南星代替投料的行为。该方法的建立为控制制剂中半夏原料的质量奠定基础，更是为提高橘红颗粒（胶囊、片）的药品质量提供监管手段。

1 仪器与试药

H-class/xevo超高效液相色谱-三重串联四极杆质谱仪（美国waters公司）；KH-250DB超声波清洗仪（昆山禾创超声仪器有限公司）。

水麦冬酸（批号：112042-202002，质量分数100%）购于中国食品药品检定研究院；法半夏对照药材（批号：DSTYF000101）、虎掌南星对照药材（批号：DST210910-109）均购自成都德思特生物技术有限公司；橘红制剂样品32批次，其中橘红颗粒26批（样品序号1～26），橘红胶囊3批（样品序号27～29），其余为橘红片，样品信息见表1；缺法半夏的橘红颗粒阴性样品、含虎掌南星的橘红颗粒阳性样品由江西海尔思药业股份有限公司提供。

表1 样品信息

2 方法与结果

2.1 仪器检测条件

色 谱 柱：Waters ACQUITY UPLC®CSHTMC18柱（1.7 μm× 2.1 mm×100 mm）；柱温：30 ℃；进样量：2 μL；流动相：A为乙腈，B为0.03%氨水溶液，梯度 洗脱：0～2 min 5%A～5%A，2～2.5 min 5%A～75%A，2.5～4 min 75%A～75%A，4～5 min 75%A～5%A，5～8 min 5%A～5%A；流速：0.2 mL/min。质谱扫描模式：ESI+；数据采集模式：多反应监测（MRM）；水麦冬酸的检测离子对为m/z 206→125和m/z 206→171。

2.2 溶液的配制

水麦冬酸对照品溶液：取水麦冬酸对照品适量，加20%甲醇溶液制成1 mL约含300 ng的对照品溶液。

供试品溶液：取本品约2 g，置100 mL量瓶中，加入20%甲醇溶液约80 mL，超声30 min，放冷至室温，加20%甲醇溶液至刻度，摇匀，取续滤液，即得。

阴性样品溶液：称取不含法半夏的橘红颗粒样品约2 g，按供试品溶液的处理方法制备阴性样品溶液。

阳性样品溶液：称取含虎掌南星的橘红颗粒样品约2 g，按供试品溶液的处理方法制备阳性样品溶液。

对照药材溶液：称取半夏、法半夏和虎掌南星对照药材各约0.1 g（按处方量换算），按供试品溶液的处理方法制备对照药材溶液。

2.3 专属性

将“2.2”项下配制的各种溶液依照“2.1”项的条件依次进样，结果见图1。由图可见，虎掌南星对照药材溶液、阳性样品溶液均出现与水麦冬酸对照品保留时间一致的色谱峰，而法半夏对照药材和阴性样品均无与水麦冬酸对照品保留时间一致的色谱峰，说明橘红颗粒中法半夏和其他药味对虎掌南星的水麦冬酸的测定无干扰。

图1 MRM监测图

2.4 检测限

取水麦冬酸对照品溶液，逐级稀释成一系列溶液依次测定。以信噪比S/N约为3对应的浓度为检出限，最低检出浓度为6.6 μg/L。

2.5 精密度

取“2.2”项配制的水麦冬酸对照品溶液，连续进样6次，记录水麦冬酸离子对m/z 206→171的峰面积，水麦冬酸峰面积的RSD为3.46%，表明精密度良好。

2.6 重复性

平行取阳性样品6份，按制备供试品溶液方法处理，记录峰面积，采用外标法计算含量，含量RSD为4.11%，表明重复性较好。

2.7 稳定性

取一份重复性项下的阳性样品溶液，分别在0、1、2、4、8 h记录峰面积，比较峰面积的波动性，峰面积RSD为3.87%，提示在8 h内样品溶液较稳定。

2.8 样品测定

对收集的32批橘红颗粒（胶囊、片）样品依次测定，均未检出水麦冬酸成分。对于保留时间与对照品一致的样品，在与对照品浓度相近时，比较离子丰度比（K）是否与对照品溶液相一致，如不一致，可确定未检出，判断依据见表2。

表2 离子丰度比允许偏差

3 讨论

敬勇等［13］采用高效液相色谱法对半夏中的虎掌南星伪品进行了检查分析，本研究初期借鉴了该法对阳性样品进行定性检测，但发现要达到原药材的取样量，按处方量需称取橘红颗粒样品18 g左右，且考虑到该法样品前处理较复杂、检测耗时较长、杂质峰干扰较多，最后采用样品需求量少、灵敏度高、分析速度快的UPLC-MS/MS技术进行测定，可有效检出阳性样品中的水麦冬酸。

为使水麦冬酸的质谱响应达到最佳水平，需探索优化液相和质谱条件。通过考察乙腈-0.1%甲酸、乙腈-5 mmol/L乙酸铵、乙腈-5 mmol/L乙酸铵（含0.1%甲酸）、乙腈-0.03%氨水溶液4个流动相体系和质谱监测模式、扫描模式，最终选择乙腈-0.03%氨水溶液流动相体系、MRM监测和正离子扫描。水麦冬酸的检测离子对为m/z 206→125和m/z 206→171，其裂解规律为在正离子模式下水麦冬酸的母离子206［M+H+NH3］+失去一分子NH3和一分子H2O后成子离子171［M+H+NH3-NH3-H2O］+，该子离子进一步失去一分子CH3CH2OH裂解成子离子125［M+H+NH3-NH3-H2O-CH3CH2OH］+。

水麦冬酸的极性较强，在反相色谱系统中保留时间较短，在对方法的耐用性考察时发现不同型号的C18柱、柱温、流速等对水麦冬酸的峰形和测定结果几无影响，只会稍微影响其出峰时间。从样品测定结果可知，市售样品未含有水麦冬酸而阳性样品可检出，说明所建方法可有效甄别橘红颗粒（胶囊、片）中虎掌南星冒充法半夏投料的行为，但对于可检出的最低掺入量没有进行研究，此项工作将进一步深入展开。

总之，所建方法快速、准确，能在一定程度上获悉橘红颗粒（胶囊、片）中法半夏的投料情况，并作为橘红颗粒（胶囊、片）中法半夏药味的质量控制方法。