环裂松萝化学成分的研究

郝昱，王璐，郝怡萌，张晴，刘冰倩，王莉宁（天津中医药大学中药学院，天津 301617）

环裂松萝Usnea diffracta是一种具有较高药用价值的地衣类中药[1]，隶属于地衣门松萝科松萝属，主要分布在中国内蒙古、吉林、四川等地[2]。《全国中草药汇编》记载其性平，味甘，归心、肾、肺经，具有清热解毒、清肝明目、止咳化痰、舒筋活血等功效[3-4]。其主要化学成分包括缩酚酸类、多取代单苯环类、二苯并呋喃类、脂肪酸类以及其他类[5]，具有抗肿瘤、抗菌、抗病毒和抗炎等药理活性[6-7]。环裂松萝具有广谱抗菌活性[7]，且不易导致耐药[8]。本文对环裂松萝的化学成分进行分离（见图1），通过体外实验初步筛选抗金黄色葡萄球菌的活性成分，并通过分子对接CDOCKER 虚拟筛选抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的活性成分。

图1 化合物1～15 的化学结构Fig 1 Chemical structures of compounds 1－15

1 仪器与试药

Bruker AVANCE III600 MHz/500 MHz 核磁共振波谱仪（德国Bruker 公司）；Waters Xevo G2-SUPLC-Q/TOF-MS（美国Waters）；岛津LC-20AP 制备型高效液相色谱仪（日本岛津）；ZHJHC1112B 超净工作台（上海智城分析仪器制造有限公司）；HNYC-2102C 恒温培养震荡器（天津欧诺仪器仪表有限公司）；YXQ-LS-75S11 立式压力蒸汽灭菌锅（上海博讯实业有限公司）；GENESYS 10S 紫外-可见分光光度计（美国ThermoFisher Scientific 公司）；BHI 脑心浸液肉汤、BHI 脑心浸液琼脂（青岛海博生物科技有限公司）；硫酸庆大霉素（上海晶纯生化科技股份有限公司）；200～300 目柱层析硅胶及薄层硅胶板GF-254（青岛海洋化工有限公司）；Sephadex-LH-20（Pharmacia生物技术有限公司）；AB-8 大孔吸附树脂（天津赛智维科技有限公司）；柱层析ODS、YMC-pack-A（5 µm，10 mm×250 mm）半制备型色谱柱（日本YMC 公司）；色谱级甲醇、乙腈，分析级石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇、甲酸（天津市康科德科技有限公司）；水（杭州娃哈哈公司）。

药材于2018年在保定安国中药材市场购买，经天津中医药大学张丽娟教授鉴定其为松萝科松萝属植物环裂松萝Usnea diffracta的干燥地衣体。药材标本（编号：UD-2018-C412-1）存放于天津中医药大学中药学院中药化学科研实验室。

2 方法

2.1 提取与分离

取粉碎后的干燥环裂松萝地衣体（4.0 kg），用95%乙醇加热回流提取3 次，合并浓缩得1.7 kg 浸膏。将浸膏制成水混悬液后分别用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取。水层经大孔树脂（乙醇-水分别为30∶70，60∶40，100∶0）依次洗脱，得到相应部位浸膏。取石油醚部位浸膏2.0 g 经硅胶柱（石油醚-乙酸乙酯分别为100∶1，14∶1，7∶1，3∶1）依次洗脱得12 个流分（Fr1～Fr12）。Fr2 中结晶经石油醚除杂后得化合物1（100.0 mg）。Fr3 中结晶经二氯甲烷除杂后得化合物2（40.0 mg）。Fr7 经Sephadex-LH-20 柱色谱（二氯甲烷-甲醇＝1∶1）洗脱得到8 个流分（Fr7.1～Fr7.8）。Fr7.7 经石油醚重结晶后得化合物3（4.7 mg）。取乙酸乙酯部位浸膏100.0 g 经硅胶柱（石油醚-乙酸乙酯分别为150∶1，100∶1，50∶1，10∶1，1∶1）梯度洗脱得到10 个流分（Fr1～Fr10）。Fr2 经硅胶柱（石油醚）等度洗脱得到4 个流分（Fr2.1～Fr2.4）。Fr2.3 经制备液相（甲醇-水为70∶30～100∶0，50 min）梯度洗脱得7 个流分（Fr2.3.1～Fr2.3.7）。取Fr2.3.7经硅胶制备薄层（石油醚-乙酸乙酯＝25∶1）得化合物4（2.2 mg）。Fr3 经硅胶柱（石油醚-乙酸乙酯＝120∶1）等度洗脱得到4 个流分（Fr3.1～Fr3.4）。Fr3.3 经制备液相（甲醇-水为70∶30～100∶0，50 min）得化合物5（3.1 mg，tR＝35 min）。Fr4 经硅胶柱（石油醚-乙酸乙酯分别为120∶1，60∶1，30∶1）梯度洗脱得到6 个流分（Fr4.1～Fr4.6）。Fr4.4 经制备液相（甲醇-水为70∶30～100∶0，50 min）后经硅胶制备薄层[石油醚-乙酸乙酯＝8∶1（含0.01%甲酸）]得化合物6（3.5 mg）和化合物7（4.8 mg）。Fr6 经硅胶柱（石油醚-乙酸乙酯30∶1＋0.01%甲酸）梯度洗脱得到6 个流分（Fr6.1～Fr6.6）。Fr6.3 经制备液相（甲醇-水为70∶30～100∶0，50 min）得化合物8（2.8 mg，tR＝13.5 min）和化合物9（70.1 mg，tR＝25.5 min）。Fr8 经制备液相（甲醇-水为30 ∶70～70∶30 洗脱30 min 后又经甲醇-水为70 ∶30～100∶0 洗脱30 min）得到8 个流分（Fr8.1～Fr8.8）。Fr8.3 重结晶后经制备液相（甲醇-水＝40∶60）纯化得化合物10（12.8 mg，tR＝18 min）。Fr8.6 经制备液相（乙腈-水＝60∶40）得化合物11（16.8 mg，tR＝20 min）。取30%乙醇部位浸膏75.5 g 经硅胶柱（二氯甲烷-甲醇分别为10∶1，5∶1，1∶1）依次洗脱得到6 个流分（Fr1～Fr6）。Fr1 经硅胶柱（二氯甲烷-甲醇分别为80∶1，20∶1，8∶1）依次洗脱得到5 个流分（Fr1.1～Fr1.5）。Fr1.2 经制备液相（甲醇-水＝40∶60）洗脱得化合物12（6.7 mg，tR＝21 min）。Fr1.3 经ODS 柱（甲醇-水分别为10∶90，40∶70，100∶0）依次洗脱得到10 个流分（Fr1.3.1～Fr1.3.10）。Fr1.3.1 经制备液相（甲醇-水＝55∶45）洗脱得化合物13（5.8 mg，tR＝10 min）。Fr1.3.3 经制备液相（甲醇-水＝5∶95）洗脱得化合物14（3.0 mg，tR＝20 min）和化合物15（2.0 mg，tR＝26 min）。

2.2 分子对接

在chemdraw 中画出所有化合物的结构，在PubChem 中下载苯唑西林（青霉素类抗菌药物）的结构，将每个结构保存为SDF 格式文件，建立小分子配体数据库。将小分子配体数据库导入Discovery Studio（DS）v 17.2.0 软件，使用Prepare Ligands 功能优化小分子构象。从蛋白结构数据库PDB 中下载PBP2a（编号：3ZFZ）的晶体结构[9]（青霉素结合蛋白PBP2a 与抗菌药物的低亲和力是其产生广泛临床耐药性的关键因素[10]）。将蛋白结构导入到DS 进行去水、加氢、加电荷等优化后，提取原配体（头孢洛林酯）作为对接的活性位点。将小分子配体数据库与PBP2a 在DS 中使用CDOCKER 模块进行半柔性对接，以结合能作为打分函数评判配体与蛋白的结合能力，以苯唑西林和头孢洛林酯为阳性对照。打分值越高的配体代表其与PBP2a 的结合能力越强，化合物则可能具有抗MRSA 的活性，有一定的开发潜力。

2.3 体外抗菌活性的测定

2.3.1 菌悬液的制备 取适量金黄色葡萄球菌（bio-00018）接种于BHI 液体培养基，恒温37 ℃摇床培养24 h。以每0.1OD600相当于1×108CFU·mL－1为标准[11]，用新鲜灭菌的BHI 液体培养基将菌液稀释至吸光度值为0.5，现配现用。

2.3.2 抑菌圈的测定 参照文献的方法[12-13]，采用纸片扩散法来测定化合物的抑菌圈直径。在无菌超净工作台中，两次取500 µL 配好的菌悬液均匀涂抹在灭菌固体培养基中制成含菌平皿。用二甲基亚砜（DMSO）溶解化合物配成质量浓度为128.0 μg·mL－1的样品。取25 μL 样品置于直径6 mm 的滤纸片上后等距贴于含菌平皿上。硫酸庆大霉素和DMSO 滤纸片分别作为阳性对照和阴性对照。将平皿于37℃恒温培养18 h，每份样品平行操作3 次，测量抑菌圈直径后结果取平均值。

3 结果

3.1 化合物结构鉴定

化合物1： 无色结晶。HR-ESI-MS：m/z211.0966 [M＋H]＋（Calcd.211.0970），分子式为C11H14O4。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：11.86（1H，s，2-OH），6.33（1H，d，J＝2.2 Hz，H-5），6.28（1H，d，J＝2.2 Hz，H-3），4.39（2H，q，J＝7.1 Hz，H-8），3.79（3H，s，4-OCH3），2.51（3H，s，6-CH3），1.41（3H，t，J＝7.1 Hz，H-9）。13C-NMR（151 MHz，CDCl3）δ：171.7（C-7），165.6（C-2），163.8（C-3），143.1（C-6），111.1（C-5），105.4（C-1），98.7（C-3），61.2（C-8），55.3（4-OCH3），24.4（6-CH3），14.2（C-9）。以上波谱数据与文献报道[6]一致，故鉴定化合物1 为扁枝衣酸乙酯。

化合物2：无色结晶。HR-ESI-MS：m/z183.0655 [M＋H]＋（Calcd.183.0657），分子式为C9H10O4。1H-NMR（500 MHz，CDCl3）δ： 11.54（1H，s，2-OH），6.35（1H，d，J＝2.4 Hz，H-5），6.33（1H，d，J＝2.4 Hz，H-3），3.82（3H，s，4-OCH3），2.58（3H，s，6-CH3）。13C-NMR（125 MHz，CDCl3）δ：175.7（C-7），166.6（C-4），165.0（C-2），144.7（C-6），111.7（C-5），103.8（C-1），98.8（C-3），55.4（4-OCH3），24.4（6-CH3）。以上波谱数据与文献报道[14]一致，故鉴定化合物2 为扁枝衣酸。

化合物3： 无色结晶。HR-ESI-MS：m/z197.0805 [M＋H]＋（Calcd.197.0814），分子式为C10H12O4。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：12.03（1H，s，2-OH），6.21（1H，s，H-5），5.14（1H，s，4-OH），3.92（3H，s，7-OCH3），2.46（3H，s，6-CH3），2.10（3H，s，3-CH3）。13C-NMR（151 MHz，CDCl3）δ：172.6（C-7），163.2（C-4），158.0（C-2），140.1（C-6），110.5（C-5），108.5（C-3），105.2（C-1），51.8（7-OCH3），24.1（6-CH3），7.7（3-CH3）。以上波谱数据与文献报道[15]一致，故鉴定化合物3 为atraric acid。

化合物4： 无色油状。HR-ESI-MS：m/z293.2475 [M＋H]＋（Calcd.293.2481），分子式为C19H32O2。IR（KBr）：νmax2929，2853，1732，1266，729 cm－1。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：5.32～5.40（6H，m，H-9，10，12，13，15，16），3.66（3H，s，1-OCH3），2.81（4H，t，J＝5.6 Hz，H-11，14），2.30（2H，t，J＝7.5 Hz，H-2），2.07（4H，m，H-8，17），1.64（2H，m，H-3），1.29～1.37（8H，m，H-4，5，6，7），0.98（3H，t，J＝7.5 Hz，H-18）。13C-NMR（151 MHz，CDCl3）δ：174.3（C-1），132.0（C-16），130.3（C-9），128.3（C-13），128.3（C-12），127.7（C-10），127.1（C-15），51.5（1-OCH3），34.1（C-2），29.7（C-7），29.6（C-6），29.2（C-5），29.1（C-4），27.2（C-8），25.6（C-11），25.2（C-14），25.0（C-3），20.6（C-17），14.3（C-18）。以上数据与文献报道[16]一致。根据红外光谱（IR）数据，νmax2929，2853 cm－1为亚甲基（C-H）伸缩振动信号，1732 cm－1为羰基（C＝O）伸缩振动信号，1266 cm－1为C-O 伸缩振动信号，729 cm－1为顺式烯烃面外C-H 弯曲振动信号（顺式：730～665 cm－1；反式：980～960 cm－1）。顺式脂肪酸室温下呈液态、油状，而反式脂肪酸室温下呈固态[17]。根据波谱数据以及理化性质，鉴定化合物4 为α-亚麻酸甲酯。

化合物5： 无色油状。HR-ESI-MS：m/z303.1223 [M＋H]＋（Calcd.303.1232），分子式为C17H18O5。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：6.71（1H，s，H-4'），6.63（1H，s，H-6'），6.61（1H，s，H-2'），6.42（1H，d，J＝2.4 Hz，H-3），6.39（1H，d，J＝2.4 Hz，H-5），3.84（3H，s，4-OCH3），3.80（3H，s，3'-OCH3），2.62（3H，s，6-CH3），2.36（3H，s，5'-CH3）。13C-NMR（151 MHz，CD3OD）δ：171.3（C-7），166.4（C-2），165.9（C-4），162.0（C-3'），152.3（C-1'），144.3（C-6），141.7（C-5'），115.7（C-6'），113.6（C-4'），112.0（C-5），106.7（C-1），106.0（C-2'），99.9（C-3），55.9（4-OCH3），55.9（3'-OCH3），24.3（6-CH3），21.5（5'-CH3）。氢谱数据与文献报道[18]一致，结合HSQC 和HMBC 谱经SciFinder数据库检索确定化合物5 为2'-O-methylevernol。

化合物6： 无色油状。HR-ESI-MS：m/z279.2321 [M＋H]＋（Calcd.279.2324），分子式为C18H30O2。IR（KBr）：νmax2925，2854，1712，1260，722 cm－1。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：5.32～5.40（6H，m，H-9，10，12，13，15，16），2.81（4H，t，J＝5.6 Hz，H-11，14），2.35（2H，t，J＝7.5 Hz，H-2），2.09（2H，m，H-8），2.05（2H，m，H-17），1.64（2H，m，H-3），1.29～1.37（8H，m，H-4，5，6，7），0.98（3H，t，J＝7.5 Hz，H-18）。13C-NMR（151 MHz，CDCl3）δ：178.8（C-1），132.0（C-16），130.2（C-9），128.3（C-12），128.2（C-13），127.7（C-15），127.1（C-10），33.8（C-2），29.6（C-7），29.1（C-5），29.1（C-6），29.0（C-4），27.2（C-8），25.6（C-11），25.5（C-14），24.7（C-3），20.6（C-17），14.3（C-18）。以上数据与文献报道[19]一致。根据红外光谱（IR）数据，νmax2925，2854 cm－1为亚甲基（C-H）伸缩振动信号，1712 cm－1为羰基（C＝O）伸缩振动信号，1260 cm－1为C-O伸缩振动信号，722 cm－1为顺式烯烃面外C-H 弯曲振动信号。根据波谱数据以及理化性质，鉴定化合物6 为α-亚麻酸。

化合物7： 无色油状。HR-ESI-MS：m/z281.2487 [M＋H]＋（Calcd.281.2481），分子式为C18H32O2。IR（KBr）：νmax2930，2855，1710，1220，725 cm－1。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：5.32～5.38（4H，m，H-9，10，12，13），2.77（2H，t，J＝6.8 Hz，H-11），2.35（2H，t，J＝7.6 Hz，H-2），2.05（2H，m，H-14），2.04（2H，m，H-8），1.62（2H，m，H-3），1.28～1.37（14H，m，H-4，5，6，7，15，16，17），0.89（3H，t，J＝6.9 Hz，H-18）。13C-NMR（151 MHz，CDCl3）δ：179.3（C-1），130.2（C-13），130.0（C-9），128.1（C-10），127.9（C-12），33.9（C-2），31.5（C-16），29.6（C-7），29.4（C-15），29.2（C-6），29.1（C-5），29.0（C-4），27.2（C-14），27.2（C-8），25.6（C-11），24.7（C-3），22.6（C-17），14.1（C-18）。以上数据与文献报道[20]一致。根据红外光谱（IR）数据，νmax2930，2855 cm－1为亚甲基（C-H）伸缩振动信号，1710 cm－1为羰基（C＝O）伸缩振动信号，1220 cm－1为C-O 伸缩振动信号，725 cm－1为顺式烯烃面外C-H 弯曲振动信号。根据波谱数据以及理化性质，鉴定化合物7 为亚油酸。

化合物8：白色粉末。HR-ESI-MS：m/z153.0433 [M＋H]＋（Calcd.153.0552），分子式为C8H8O3。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：10.07（1H，s，H-7），6.22（1H，d，J＝2.2 Hz，H-5），6.11（1H，d，J＝2.2 Hz，H-3），2.51（3H，s，6-CH3）。13C-NMR（151 MHz，CD3OD）δ：194.3（C-7），167.5（C-4），167.2（C-2），146.3（C-6），114.1（C-1），111.8（C-5），101.5（C-3），18.3（6-CH3）。以上波谱数据与文献报道[21]一致，故鉴定化合物8 为苔色醛。

化合物9： 无色结晶。HR-ESI-MS：m/z289.1070 [M＋H]＋（Calcd.289.1076），分子式为C16H16O5。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：11.48（1H，s，2-OH），6.59（1H，s，H-6'），6.58（1H，s，H-4'），6.50（1H，s，H-2'），6.38（1H，d，J＝2.5 Hz，H-3），6.36（1H，d，J＝2.5 Hz，H-5），3.83（3H，s，4-OCH3），2.63（3H，s，6-CH3），2.33（3H，s，5'-CH3）。13C-NMR（151 MHz，CDCl3）δ：170.4（C-7），166.3（C-2），164.6（C-4），156.3（C-3'），150.6（C-1'），143.5（C-6），141.0（C-5'），114.8（C-6'），114.2（C-4'），111.8（C-5），106.5（C-1），104.5（C-2'），98.9（C-3），55.4（4-OCH3），24.6（6-CH3），21.4（5'-CH3）。以上波谱数据与文献报道[6]一致，故鉴定化合物9 为3-羟基-5-甲基苯基-2-羟基-4-甲氧基-6-甲基苯甲酸酯。

化合物10：无色结晶。HR-ESI-MS：m/z169.0495 [M＋H]＋（Calcd.169.0501），分子式为C8H8O4。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）δ： 6.19（1H，d，J＝2.4 Hz，H-5），6.14（1H，d，J＝2.4 Hz，H-3），2.48（3H，s，6-CH3）。13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：175.1（C-7），167.0（C-4），163.7（C-2），145.3（C-6），112.3（C-5），105.4（C-1），101.6（C-3），24.3（6-CH3）。以上波谱数据与文献报道[22]一致，故鉴定化合物10 为苔色酸。

化合物11： 无色结晶。HR-ESI-MS：m/z275.0906 [M＋H]＋（Calcd.275.0910），分子式为C15H14O5。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）δ：6.55（1H，s，H-6'），6.49（1H，s，H-4'），6.43（1H，s，H-2'），6.28（1H，d，J＝2.4 Hz，H-5），6.21（1H，d，J＝2.4 Hz，H-3），2.56（3H，s，6-CH3），2.29（3H，s，5'-CH3）。13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：174.3（C-7），166.6（C-4），164.4（C-2），159.4（C-3'），152.2（C-1'），144.7（C-6），141.8（C-5'），114.8（C-6'），114.5（C-4'），112.8（C-5），107.3（C-2'），105.4（C-1），101.8（C-3），24.3（6-CH3），21.4（5'-CH3）。以上波谱数据与文献报道[23]一致，故鉴定化合物11 为瘤网地衣素。

化合物12：白色粉末。HR-ESI-MS：m/z125.0595 [M＋H]＋（Calcd.125.0603），分子式为C7H8O2。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）δ：6.12（1H，d，J＝2.1 Hz，H-4），6.12（1H，d，J＝2.1 Hz，H-6），6.07（1H，t，J＝2.1 Hz，H-2），2.17（3H，s，5-CH3）。13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：157.8（C-1，3），139.7（C-5），107.1（C-4，6），99.2（C-2），20.1（5-CH3）。以上波谱数据与文献报道[24]一致，故鉴定化合物12 为苔黑酚。

化合物13：黄色油状。HR-ESI-MS：m/z127.0388 [M＋H]＋（Calcd.127.0395），分子式为C6H6O3。1H-NMR（500 MHz，CD3OD），9.53（1H，s，H-6），δ：7.38（1H，d，J＝3.6 Hz，H-3），6.58（1H，d，J＝3.6 Hz，H-4），4.61（2H，s，H-7）。13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：179.4（C-6），163.2（C-2），153.9（C-5），124.8（C-3），110.9（C-4），57.5（C-7）。以上波谱数据与文献报道[25]一致，故鉴定化合物13 为5-羟甲基糠醛。

化合物14：无色油状。HR-ESI-MS：m/z167.0787 [M＋Na]＋（Calcd.167.0796），分子式为C6H12N2O2。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）δ：3.12（2H，t，J＝7.0 Hz，H-4），2.15（2H，t，J＝7.5 Hz，H-2），1.86（3H，s，H-6），1.71（2H，m，H-3）。13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：178.4（C-1），173.4（C-5），39.9（C-4），33.7（C-2），26.6（C-4），22.5（C-6）。以上波谱数据与文献报道[26]一致，故鉴定化合物14 为4-（乙酰氨基）丁酰胺。

化合物15：无色油状。HR-ESI-MS：m/z245.0759 [M＋H]＋（Calcd.245.0774），分子式为C9H12N2O6。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）δ：8.03（1H，d，J＝8.1 Hz，H-6），5.90（1H，d，J＝4.6 Hz，H-1'），5.70（1H，d，J＝8.1 Hz，H-5），4.17（1H，m，H-2'），4.14（1H，m，H-3'），4.00（1H，m，H-4'），3.84（1H，dd，J＝12.2，2.0 Hz，H-5'a），3.73（1H，dd，J＝12.2，2.6 Hz，H-5'b）。13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：164.8（C-4），151.1（C-2），141.3（C-6），101.2（C-5），89.2（C-1'），84.9（C-4'），74.3（C-3'），69.9（C-2'），60.8（C-5'）。以上波谱数据与文献报道[27]一致，故鉴定化合物15 为尿嘧啶核苷。

3.2 分子对接结果

基于分子对接虚拟筛选环裂松萝中与PBP2a结合能力较强的化学成分，对接结果如表1。打分值高于苯唑西林的有候选化合物6、7、11，其中化合物11 的打分值最高。化合物11 与PBP2a对接的相互作用力分析如图2。

表1 配体与PBP2a 的对接结果Tab 1 Docking results of the ligands with PBP2a

PBP2a 与头孢洛林酯（原配体）结合的关键氨基酸残基LYS273、ASN146、TYR105 形成常规氢键。由图2可知，在配体与蛋白的相互作用中，化合物11 可与PBP2a 的氨基酸残基ARG298形成盐桥，与TYR105、SER306、ASN307 之间形成常规氢键、与ASN146 之间形成π-供体氢键、与ILE309 之间形成π-烷基作用。

图2 化合物11 与PBP2a 的相互作用分析图Fig 2 Analysis plot of the interaction between compound 11 and PBP2a

3.3 抗菌活性测定结果

采用纸片扩散法对化合物1～15 进行活性测试。结果表明化合物5、8、9 对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径分别为6.4、6.6、6.6 mm，小于阳性对照药（硫酸庆大霉素）的12.3 mm。其余化合物未表现出明显的抑菌圈。

4 讨论

环裂松萝作为传统地衣类中药，具有广谱抗菌活性，但其药效物质基础仍然需要进一步明确。本研究从环裂松萝的乙醇提取物中分离得到15个化合物，包括多取代单苯环类1～3、8、10、12，缩酚酸类5、9、11，脂肪酸类4、6、7，糠醛类13，氨基酸类14，核苷类15。化合物4、5、8、13～15 为首次从松萝属中发现。

采用分子对接虚拟筛选与PBP2a 亲和力较高的配体。化合物6、7 和11 与PBP2a 的结合能力强于阳性药苯唑西林，证明其可能具有抗MRSA 的活性，有一定的开发潜力。化合物6、7 广泛存在于自然界，可与PBP2a 特异性结合以及与MRSA 体内的烯酰-ACP 还原酶（FabI）、FabI-NADPH 复合物结合以改变细菌细胞膜结构从而发挥抗菌作用，其顺式构型以及长链结构能增加抗MRSA 的活性[28-32]。化合物11 与PBP2a 的结合能力最强，而相关的抑制MRSA 活性研究尚未报道，本课题组正在对其进行研究。化合物5、8、9 对金黄色葡萄球菌有一定的抑制作用。3 个缩酚酸类化合物，2 个脂肪酸类化合物，1 个单苯环类化合物可能对金黄色葡萄球菌或变异后的耐药菌有抑制活性。根据分子对接结果，预测羟基是其发挥抗菌作用的关键活性基团。上述化合物结构中不含内酰胺基团，单独或与抗菌药物协同使用以及探索构效关系可作为进一步研究方向。