四川省达州市2021年猪瘟疫苗免疫抗体监测与分析

杨 青 徐倚天 刘俐君 赵小波 李清竹 张 蕾 黎丁箕

（达州市动物疫病预防控制中心，四川达州 635000）

猪瘟（Classical swine fever,CSF），俗称“烂肠瘟”，在欧美一些地区被称为猪霍乱（Hog Cholera）、猪热病或古典猪瘟，是由猪瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）引起猪的一种高度接触性传染病，被世界动物卫生组织（OIE）列为必须报告的传染病[1]。

猪瘟于1833年在美国首次被发现，1903年确定病原体是猪瘟病毒，随后在世界各地广泛流行。欧盟、北美和日本等通过免疫预防措施和逐级净化，控制和消灭了猪瘟。我国将猪瘟列为一类动物疫病，是目前危害我国养殖业健康发展的主要疫病之一，也是我国重点防范的病种。2017年猪瘟退出了国家强制免疫计划，但疫苗免疫仍然是预防猪瘟的主要手段，其效果直接影响该病的综合防控[2,3]。

抗体水平检测是有效评价动物防疫工作的重要指标，加强对辖区内某种动物疫病的抗体水平监测，可以为制定动物疫病免疫程序和防控措施提供科学的依据。为掌握四川省达州市2021年猪瘟疫苗的免疫效果，达州市动物疫病预防控制中心实验室对全市抽检的1 605份猪血清进行了猪瘟免疫抗体水平监测，并进行了数据统计与分析，以期为今后猪瘟的免疫工作开展及猪瘟防治与净化工作提供有力的数据支撑和建议。

1 材料与方法

1.1 材料

样品采集：从四川省达州市9个县（市、区）下辖69个规模场、13个屠宰场、20个散养村里的100户散养户共采集猪血样1605份。每头猪前腔静脉采血3～5mL，室温自然凝固后分离血清，进行抗体检测。

1.2 仪器设备

主要使用仪器有THERMO酶标仪（型号：Multi-skan FC），37℃恒温培养箱，美国伯腾高通量微孔板洗板机，Eppendorf电动八道可调间距移液器、8道微量移液器、单道微量移液器等。

1.3 试剂与方法

采用猪瘟病毒间接ELISA抗体检测试剂盒，试剂均购自青岛立见诊断技术发展中心，生产批号分别为020012003、020012102、020012106、020012111。

原理及用途：试剂盒由预包被CSFV E2Ⅰ抗原的微孔板和抗CSFV E2Ⅰ酶标记物及其组分配套组成，应用间接酶联免疫法检测猪血清或血浆中猪瘟病毒抗体，适用于猪瘟病毒的免疫效果监测和抗体水平调查。

操作步骤：试剂盒使用前恢复室温（20～25℃）并充分摇匀；向抗原包被板加入待检猪血清20 μL及样品稀释液80μL，每孔100 μL；阴性、阳性对照各加2孔，每孔100 μL；轻轻振匀孔中样品后置37℃恒温箱中孵育30 min；反复洗板5次；加酶标抗体100 μL，置37℃恒温箱中孵育30 min；洗板5次，滴加显色液，A、B各50 μL；置37℃恒温箱避光孵育10～15 min；每孔加终止液50 μL，用酶标仪测定450 nm波长处的OD值。

结果判定：阴性对照平均值（ODnc）≤0.3，阳性对照平均值（ODpc）≥0.6，试验才能成立。阈值Cut Off=ODnc×2.1（若ODnc≥0.05则按实际值计算；若ODnc＜0.05则按0.05计算），样品OD值≥Cut Off值，为阳性；反之为阴性。

2 结果

根据《2021年达州市动物疫病监测与流行病学调查计划》方案，2021年共采集免疫猪血清1 605份，合格1 548份，合格率为96.45%。其中监测规模养殖场猪血清1 245份，合格1 219份，合格率97.91%；监测屠宰场猪血清260份，合格241份，合格率92.69%；监测散养户猪血清100份，合格88份，合格率88%。共监测场点102个，合格94个，合格率92.16%，其中监测规模养殖场点69个，合格67个，合格率97.1.16%；监测屠宰场13个，合格12个，合格率92.31；监测散养村20个，合格15个，合格率75%。检测结果见表1。

表1 2021年达州市不同场点类型猪瘟免疫抗体合格率

从不同地区来看，达州市的9个县（市、区）的猪瘟疫苗免疫抗体合格率分别为92.96%、93.48%、96%、100%、100%、92.8%、99.52%、99.52%、99.33%，均在90%以上，其中渠县合格率最低，为92.8%，经开区、开江县最高，为100%，见表2。

表2 2021年达州市各县 （市、区）猪瘟免疫抗体合格率

根据监测计划，2021年3—11月达州市分别进行了猪瘟疫苗免疫抗体采样、检测，其中3月份共检测猪血清60份，合格50份，合格率83.33%；4月份共检测猪血清140份，合格132份，合格率94.29%；5月份共检测猪血清270份，合格269份，合格率99.63%；6月份共检测猪血清230份，合格225份，合格率97.83%；7月份共检测猪血清60份，合格54份，合格率90.00%；8月份共检测猪血清70份，合格62份，合格率88.57%；9月份共检测猪血清60份，合格55份，合格率91.67%；10月份共检测猪血清420份，合格408份，合格率97.14%；11月份共检测猪血清295份，合格293份，合格率99.32%，见表3、图1。

表3 2021年达州市各月份猪瘟免疫抗体合格率

图1 2021年四川达州各月份猪瘟疫苗免疫抗体对比图

3 讨论与分析

从免疫抗体合格率来看，四川省达州市2021年猪瘟疫苗的群体免疫抗体合格率均在70%以上，全部达到了农业农村部70%的规定标准。猪瘟疫苗能够对猪群提供免疫保护，表明达州市猪瘟疫苗强制免疫工作达到了预期效果，免疫效果较好，猪瘟疫情风险发生概率较低。

从不同场点猪瘟疫苗免疫抗体检测结果分析，免疫抗体合格率最高的是规模养殖场，其次是屠宰场，散养户最低，说明猪瘟疫苗免疫存在不均衡性。主要原因可能是规模养殖场有专职的技术人员，能按照规范的免疫程序积极主动做好疫苗免疫工作；屠宰场生猪主要来源于养殖场，猪瘟免疫抗体水平相应也比较高；而散养户缺乏防疫意识，主要依靠春季、秋季的集中免疫时期村级防疫员来开展免疫，也可能存在漏免的情况，从而达不到理想的效果。

从场点合格率来看，个别规模养殖场猪瘟疫苗免疫抗体也存在不合格的情况，可能与养殖场补栏过程中是否及时进行猪瘟疫苗免疫有关；某些屠宰场、散养户免疫抗体不合格，说明猪瘟散发风险仍不可忽视。

从不同地区来看，各地方猪瘟疫苗免疫抗体合格率存在一定差异。可能原因有2点，一是基层撤乡并镇、畜牧兽医站“三权”下放、体制改革等因素，影响各地方免疫工作的确实展开；二是各地对猪瘟疫苗免疫工作的重视程度、防疫保障、人员配备及技术水平等存在差异，从而造成不同免疫结果。

从不同月份来看（见图1），达州市2021年猪瘟疫苗免疫抗体合格率全年保持在80%以上，整体呈现良好状态。其中3月份合格率最低，5月份、11月份合格率最高，分析原因，可能与免疫空档期有关，达州市秋防集中免疫工作11月底结束，到第2年3月才开始春防集中免疫，这期间可能存在漏免、补免不及时等情况，使得3月的免疫抗体水平最低；而5月、11月为春季、秋季集中防疫期。各县（市、区）春季、秋季集中免疫猪瘟疫苗取得了良好的效果，猪瘟免疫抗体合格率较高。

2020年达州市猪瘟免疫抗体合格率为95.76%，2021年与之相比，略微上升，近2年的猪瘟免疫抗体水平持续高位，说明养殖户防疫意识不断增强，免疫猪瘟疫苗积极性不断提高，猪瘟疫苗的免疫效果得到提升，对全市动物疫病防控起到了积极的促进作用。

4 总结

达州市是全国生猪生产的优势地区，是全国优质肉猪战略保障储备基地，现有全国生猪调出大县4个[4]。在党中央、国务院和省委、省政府统一部署下，达州市36个国家级、255个省级生猪产能调控基地也即将全部完成挂牌工作，以形成长期稳定的猪肉供应保障能力。而猪瘟的防控成效也将直接影响生猪产业能否持续健康发展。近年来，达州市对猪瘟疫苗实行全面强制免疫，有效预防了猪瘟的发生和流行，但也存在部分猪场免疫抗体较低的情况。

建议继续强化春季、秋季的猪瘟疫苗两防集中免疫和日常补免工作，切实构筑牢固的免疫屏障；进一步加强猪瘟防控知识宣传，切实提高养殖户的防疫意识和防控水平；完善免疫程序，制定更规范、更科学的免疫程序，确保免疫质量。针对部分免疫抗体合格率较低的场点和猪群，认真分析研究抗体水平不高的原因，开展补免工作，加大对猪瘟疾病的防控力度；切实落实相关的防控策略，保障全市畜牧产业健康持续发展；同时有计划地开展净化措施，倡导各养殖场不定期开展猪瘟疫苗抗体水平监测，制定出符合本场的净化措施，减少因患猪瘟带来的经济损失。