KPNA2 在乳腺癌组织中的表达及临床病理意义

魏丽丽，郝瑞卿，王华瑛

（昌邑市妇幼保健院病理科1，儿科2，妇科3，山东 昌邑 261300）

乳腺癌（breast cancer）是女性最常见的恶性肿瘤之一，也是导致癌症死亡的主要原因，占确诊癌症的24%，女性癌症死亡原因中占15%[1，2]。我国近10年来乳腺癌的发病率和死亡率呈上升趋势[3]。随着医学研究的进展，乳腺癌患者的5 年生存率显著提高。从1989 年到2016 年，乳腺癌死亡率下降了40%[4]。但对于转移和复发的乳腺癌，至今为止仍是治疗的难点。寻找用于肿瘤早期诊断和指导预后的新的临床指标是近几年癌症研究的热点。在癌症发展中会出现细胞运输机制的功能障碍。蛋白质在细胞质和细胞核之间的转运是由核胞浆转运蛋白介导的。Karyopherin α2（KPNA2）是核胞浆素α 家族的成员之一。KPNA2 约为58 kDa，可能通过调节癌相关转运蛋白的亚细胞易位参与致癌作用[3-6]。有研究显示[7-10]，KPNA2 在多种恶性肿瘤中过度表达，如肝细胞肝癌、非小细胞肺癌、口腔鳞状细胞癌、肾脏透明细胞癌等，与肿瘤的发生发展有密切相关性。虽然KPNA2 在乳腺癌中的表达及其与各临床病理参数之间的关系，但目前国内报道较少[11，12]。本研究通过免疫组化方法检测乳腺癌组织中KPNA2和β-catenin、cyclinD1 蛋白的表达，并结合TCGA数据库资料探讨KPNA2 在乳腺癌中的表达水平与各临床病理参数之间的意义，进一步研究KPNA2在乳腺癌发生发展过程中的机制，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料 选取昌邑市妇幼保健院病理科2014 年1 月-2019 年8 月未经放化疗的乳腺浸润性导管癌标本120 例设为实验组，另选取50 例实验组的距离癌旁1 cm 的正常乳腺组织作为对照组。均为女性，年龄31～85 岁，中位年龄54 岁。病理诊断均为浸润性导管癌。

1.2 方法 采用免疫组化方法检测组织中KPNA2、β-catenin 及cyclinD1 的表达。所有标本中性福尔马林固定。KPNA2、β-catenin、cyclinD1 兔抗人多克隆抗体（工作浓度1∶100）购于武汉三鹰生物技术有限公司。即用型ER、PR、HER-2、Ki-67 抗体为福建迈新生物技术有限公司。所有乳腺癌蜡块标本均经临床、高年资病理医师确诊。常规石蜡4 μm 切片。免疫组化采用SP 法。用PBS 液替代一抗作为阴性对照。

1.3 结果判定 依据美国临床肿瘤学会ASCO 分级对KPNA2、β-catenin、cyclinD1、ER、PR、HER-2、Ki-67行结果判读。KPNA2、cyclinD1、ER、PR、Ki-67 阳性：呈棕黄色颗粒定位于细胞核。β-catenin、HER-2 阳性：呈棕黄色颗粒定位于细胞膜。染色阳性的肿瘤细胞面积＜5%、5%～25%、26%～50%、51%～75%、＞75%，分别计数0、1、2、3、4 分。肿瘤细胞着色强度分别标记-、+、++、+++，各计数0、1、2、3 分。两者相乘，＜6 分判读为低表达，≥6 分判读为高表达。

1.4 统计学分析 所有数据采用SPSS18.0 统计软件处理，计数资料以[n（%）]表示，比较行χ2检验；计量资料使用（）表示，组间比较行t检验。采用Pearson 相关性分析法分析KPNA2、β-catenin 及cyclinD1 与乳腺癌临床病理参数及预后的相关性。P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 KPNA2、β-catenin、cyclinD1 在乳腺癌中的表达KPNA2、cyclinD1 定位于细胞核，在正常乳腺组织中一般弱表达或者阴性，在低级别乳腺癌中呈低表达，在高级别乳腺癌中呈高表达。β-catenin 定位于细胞膜，在正常乳腺组织中一般弱表达或者阴性，在低级别乳腺癌中呈低表达，在高级别乳腺癌中呈高表达。Ki-67 定位于细胞核，在增殖活跃的乳腺癌细胞中呈高表达，见图1。

图1 正常乳腺组织及乳腺癌免疫组化表达（HE×400）

2.2 KPNA2、β-catenin、cyclinD1 与临床病理参数间的关系 KPNA2、β-catenin、cyclinD1 在乳腺癌中高表达率分别为53.30%（64/120）、49.10%（59/120）、50.80%（61/120）；KPNA2、β-catenin、cyclinD1 在 乳腺癌中的表达高于正常乳腺组织（P＜0.05）；KPNA2、β-catenin、cyclinD1 高表达与肿瘤TNM 分期、淋巴结转移、组织学分级、Ki-67 指数高密切相关（P＜0.05），但与ER、PR、HER-2 的表达、肿瘤大小、年龄无关（P＞0.05），见表1。

表1 乳腺癌中KPNA2 表达与临床病理参数的关系[n（%）]

表1（续）

2.3 KPNA2、β-catenin、cyclinD1 之间的相关性分析KPNA2 的表达分别与β-catenin（r=0.350，P=0.010）、cyclinD1（r=0.370，P=0.010）呈正相关，β-catenin 的表达与cyclinD1 的表达呈正相关（r=0.320，P=0.030）。

3 讨论

KPNA2 是由一个N 端亲水结合区、一个中心疏水区和一个短的酸性的C 端组成。KPNA2 参与细胞膜与细胞核的物质转运过程，通过将DNA 双链断裂修复复合物MRN 导入细胞核参与DNA 损伤修复相关[4]。研究显示，在多种癌中存在细胞膜细胞核转运过程的异常。KPNA2 作为核转运蛋白家族成员之一，在多种恶性肿瘤中呈高表达，对肿瘤发生、细胞分化和转录调控有影响，其高表达与包括结直肠癌、食管鳞状细胞癌、胃癌、卵巢癌和肝细胞肝癌等多种上皮源性恶性肿瘤预后不良有关[8，13-15]。由此可见，KPNA2 很可能作为评估预后的独立指标。本研究前期通过分析TCGA 数据库结果显示，KPNA2 在乳腺癌组织中呈现高表达，并且KPNA2 高表达的乳腺癌患者预后不良，提示KPNA2 可能作为评估乳腺癌预后的指标。

对于KPNA2 在肿瘤中的作用机制，近几年也有一些深入的研究。KPNA2 的敲除降低了肝癌细胞的迁移和增殖能力，而KPNA2 的过度表达则增加了这些恶性特征，这可能是通过调节了细胞的周期和DNA 复制[8]。在口腔鳞状细胞癌中敲除KPNA2 基因减少了细胞的迁移和侵袭[10]，敲除KPNA2 会抑制舌鳞状细胞癌细胞的转移、凋亡和增殖。p53 可能是参与舌鳞状细胞癌cal-27 细胞KPNA2 功能的重要途径[16]。敲除胶质母细胞瘤细胞株U87 和U251 中KPNA2 基因，肿瘤的增殖和侵袭性也伴随着下调，表明KPNA2 调控c-Myc 转录中起着潜在的作用[17]。在头颈部鳞状细胞癌患者评估接受放射（化疗）治疗的细胞质和核位置KPNA2 表达的预后实验中发现，KPNA2 在细胞质和细胞核核低表达也可预测经放射治疗头颈部鳞状细胞癌的不良预后[18]。然而，KPNA2在乳腺癌中的表达研究甚少，尤其是联合β-catenin、cyclinD1 的研究探讨KPNA2 在乳腺癌中作用机制的报道少见。Wnt 信号通路在细胞的分化、增殖和凋亡等生理过程，以及在细胞癌变、肿瘤侵袭等病理过程中均发挥了重要的调控作用，已经成为细胞生物学和分子生物学研究的热点。β-catenin 介导的信号通路是Wnt 信号传导通路中的经典信号通路，cyclinD1 是β-catenin 的下游靶基因[19]。

本研究结果显示，KPNA2、cyclinD1 定位于细胞核，在正常乳腺组织中一般弱表达或者阴性，在低级别乳腺癌中呈低表达，在高级别乳腺癌中呈高表达。β-catenin 定位于细胞膜，在正常乳腺组织中一般弱表达或者阴性，在低级别乳腺癌中呈低表达，在高级别乳腺癌中呈高表达。Ki-67 定位于细胞核，在增殖活跃的乳腺癌细胞中呈高表达，这与TCGA 的数据库分析结果相吻合。KPNA2、β-catenin、cyclinD1 在乳腺癌中的表达高于正常乳腺组织（P＜0.05）；KPNA2、β-catenin、cyclinD1 高表达与肿瘤TNM 分期、淋巴结转移、组织学分级、Ki-67 指数高密切相关（P＜0.05），但与ER、PR、HER2 的表达、肿瘤大小、年龄无关（P＞0.05），表明KPNA2、β-catenin、cyclinD1 与乳腺癌的发生发展密切相关。

Pearson 相关性分析显示，KPNA2 的表达分别与β-catenin（r=0.350，P=0.010）、cyclinD1（r=0.370，P=0.010）呈正相关，β-catenin 的表达与cyclinD1 的表达呈正相关（r=0.320，P=0.030），这说明KPNA2在乳腺癌中的作用机制与β-catenin 和cyclinD1 的表达相关，分析原因为KPNA2 可能通过Wnt 通路作用于乳腺癌的侵袭发展过程。

目前乳腺癌的治疗主要通过传统的手术、放疗、化疗、内分泌治疗。并且近年来国家通过大力发展两癌普查工作，乳腺癌的早期发现和治疗明显提高了乳腺癌患者的预后。但是乳腺癌的复发和转移仍然是目前治疗的难点[20]。因此寻找新的用于临床治疗的基因靶点是当今乳腺癌研究的热点。本研究结果表明KPNA2 可能作为肿瘤治疗的研究方向。

综上所述，KPNA2、β-catenin 及cyclinD1 的表达与乳腺癌的恶性程度、高侵袭性及增殖指数高有关。KPNA2 高表达提示乳腺癌患者预后不良，可能用于临床预后指导，其作用于乳腺癌的发生发展机制可能与Wnt 通路相关。