万寿菊茎叶提取物对肉鸡生产性能及其免疫系统的影响

曾 益，孙艺秋，何梦雪，殷中琼

（四川农业大学动物医学院，成都 611130）

在畜禽养殖业饲料全面禁止添加抗生素的大环境下，替代抗生素类饲料添加剂（如植物提取物等）是畜禽营养的重要研究方向。万寿菊（Tagetes erectaL.）作为菊科万寿菊属一年生草本植物，除具有一定的观赏价值外，还因其含有黄酮、叶黄素等多种生物活性物质而具有药用价值，故也是饲料添加剂的选择之一[1-2]。目前，万寿菊主要采集部位为花，常用于叶黄素的提取，其茎叶却往往被当做废弃物，未得到充分的利用。万寿菊茎叶中黄酮类化合物不仅可以显著增加肉鸡饲料效率及平均日增重[3]，还能在肉鸡生产中能够发挥抗炎、抗氧化和免疫调节等多种生物学作用[4-6]。我们前期研究[7]发现，万寿茎叶醇提物能够有效降低LPS致炎小鼠肝和肺的脏器指数，维持血液的稳定，下调血清中促炎因子的含量和提高抗炎因子水平，从而起到抗炎活性；王金等[8]从万寿菊茎叶中提取得到了3种黄酮类化合物，均具有较强的抗氧化活性。已有研究表明，万寿菊茎叶可用于肉牛饲养[9]，但有关万寿菊茎叶及其提取物在家禽领域的研究在国内外均未有报道。本试验以万寿菊茎叶提取物作为试验对象，研究其对肉鸡生长指标、免疫功能以及血液相关指标等方面的影响，为其在鸡饲料添加剂生产中的应用提供参考。

1 材料和方法

1.1 试验材料

试验所用的材料为万寿菊茎叶提取物，由晨光生物科技集团股份有限公司采用超声波提取法提取，以70%乙醇为提取液，料液比为1:30，超声温度为70℃、一共提取2次，每次提取1 h。经过抽滤、合并滤液，再将滤液减压浓缩后，放于50℃烘箱干燥至恒重，得万寿菊茎叶浸膏。提取物为粉状的万寿菊茎叶浸膏，总黄酮含量为13.29%。ELISA IL-1试剂盒、ELISA IL-1β试剂盒、ELISA IL-6试剂盒、ELISA IL-8试剂盒、ELISA IL-10试剂盒、ELISA IgM试剂盒、ELISA IgG试剂盒、ELISA IgA试剂盒，均购自上海酶联生物科技有限公司。

1.2 实验动物与实验设计

15日龄健康青脚麻鸡240只，随机分为4组，每组3个重复，每个重复20只鸡。对照组饲喂基础日粮，试验低、中、高剂量组在饲喂基础日粮的基础上分别添加400、800和1 200 mg/kg万寿菊茎叶提取物，试验期28 d。

1.3 试验饲粮

试验基础日粮以玉米豆粕为主原料，依据我国鸡饲养标准定制配方，日粮组成及营养水平见表1。

表1 基础日粮配方及营养水平Table 1 Diet Ingredient and Nutrient Concentration

1.4 饲养管理

试验在成都市金深港农业开发有限公司下属肉鸡养殖场进行，试验期为2021年8月21日至9月12日，试验肉鸡采用3层鸡笼饲养，上下交错排列，饲喂颗粒饲料，定时上料，自由采食和饮水，昼夜不间断光照，鸡舍第1周温度调控在35℃，其后每周下降2℃，直至温度降至25℃，相对湿度保持在45%～55%，鸡舍定期开展带鸡消毒，饲养管理按照成都市金深港农业开发有限公司的肉鸡饲养管理标准进行。

1.5 样品采集

于开始饲喂前以及饲喂后第7、14、21和28天空腹称重，再于试验结束后进行放血屠宰（屠宰前1 d晚上开始禁食，大约禁食12 h），颈静脉采血，3 000 r/min离心10 min分离血清后，于-20℃冰箱中保存备用。取下免疫器官（胸腺、脾脏、法氏囊）去除脂肪组织后称重。

1.6 指标测定

1.6.1 生产性能的测定

记录正式饲喂第0、7、14、21和28天肉鸡的体重，以每个重复组为单位称量体重，计算平均日增重。

1.6.2 免疫相关指标的测定

1.6.2.1 免疫器官指数

免疫器官指数/（g·kg-1）=免疫器官重量×100/肉鸡活体重。

1.6.2.2 免疫球蛋白的测定

按照ELISA试剂盒说明书分别检测血清中免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）和免疫球蛋白G（IgG）。将标准品的OD值绘制标准曲线，根据曲线方程计算各待测因子在血清样品中的浓度。

1.6.2.3 血清细胞因子的测定

按照ELISA试剂盒说明书分别检测血清中细胞因子IL-1、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10和PGE2吸光度（OD值）。将标准品的OD值绘制标准曲线，根据曲线方程计算各待测因子在血清样品中的浓度。

1.7 万寿菊茎叶提取物成分分析

为探究万寿菊茎叶提取物中所含有效成分，按照各类天然药物有效成分的常规检识方法[10-11]，对万寿菊茎叶提取物进行有效成分检测。

1.8 数据统计分析

使用SPSS软件对数据进行处理，采用student’s-test检验显著性分析，P＜0.05视为具有统计学差异，P＜0.01视为差异极显著，所有数据均以“平均值±标准差”来表示。

2 结果与分析

2.1 万寿菊茎叶提取物对肉鸡生产性能的影响

由表2可得，与对照组相比，万寿菊茎叶提取物各剂量组在饲喂的前14 d，其肉鸡体重虽有增长，但差异不显著（P＞0.05）。当饲喂21～28 d后，万寿菊茎叶提取物中剂量组肉鸡的体重与对照组相比，显著增长（P＜0.05），其平均日增重也显著高于对照组（P＜0.01）。其余各组无明显差异（P＞0.05）。由此可见，万寿菊茎叶提取物中剂量组能提高肉鸡的生产性能。

表2 万寿菊茎叶提取物对肉鸡体重的影响Table 2 Effects of the extract of stem and leaves of Tagetes erecta L.on body weight of broilers g

2.2 万寿菊茎叶提取物对肉鸡免疫器官的影响

由表3可知，与对照组相比，万寿菊茎叶提取物高剂量组能显著提高肉鸡脾脏的免疫器官指数（P＜0.05），其余剂量组对脾脏的免疫器官指数无显著的影响（P＞0.05）；万寿菊茎叶提取物各剂量组对法氏囊和胸腺的免疫器官指数有提高效果，但差异不显著（P＞0.05）。

表3 万寿菊茎叶提取物对肉鸡免疫器官的影响Table 3 Effect of the extract of stem and leaves of Tagetes erecta L.on organ indexes of broilers

2.3 万寿菊茎叶提取物对肉鸡血清中免疫球蛋白的影响

肉鸡血清中免疫球蛋白检测结果如图1所示：

图1 万寿菊茎叶提取物对肉鸡血清中免疫球蛋白的影响Figure 1 Effect of the extract of stem and leaves of Tagetes erecta L.on serum immunoglobulin in broilers

与对照组相比，万寿菊茎叶提取物中剂量组肉鸡血清中IgG含量显著上升（P＜0.05），其余各剂量组虽有所上升，但差异不显著（P＞0.05）；万寿菊茎叶提取物高剂量组与对照组相比，其肉鸡血清中IgM含量显著上升（P＜0.05），其余各剂量组肉鸡上升差异不显著（P＞0.05）。万寿菊茎叶提取物各剂量组肉鸡血清中IgA含量与对照组相比，无显著差异（P＞0.05）。

万寿菊茎叶提取物低、中、高剂量组间的IgA和IgG均无显著差异（P＞0.05）；但与万寿菊茎叶提取物高剂量组相比，万寿菊茎叶提取物低剂量组肉鸡血清中IgM含量极显著下降（P＜0.01），万寿菊茎叶提取物中剂量组肉鸡血清中IgM含量显著下降（P＜0.05）。

2.4 万寿菊茎叶提取物对肉鸡血清细胞因子的影响

肉鸡血清中细胞因子检测结果如图2。与对照组相比，万寿菊茎叶低、中剂量组肉鸡血清中PGE2的含量显著下降（P＜0.05），其高剂量组肉鸡血清中PGE2含量则极显著下降（P＜0.01）；万寿菊茎叶提取物高剂量组肉鸡血清中IL-1β的含量与对照组相比，也显著下降（P＜0.05），而其余各剂量组肉鸡血清中IL-1β与对照组相比虽有所下降，但差异不显著（P＞0.05）。此外，万寿菊茎叶中剂量组肉鸡血清中的IL-10含量与对照组相比，显著上升（P＜0.05）；其余各剂量组肉鸡血清中IL-10含量虽有所上升，但差异不显著（P＞0.05），万寿菊茎叶提取物各剂量对肉鸡血清中IL-1、IL-6和IL-8含量无明显影响（P＞0.05）。

图2 万寿菊茎叶提取物对肉鸡血清细胞因子的影响Figure 2 Effects of the extract of stem and leaves of Tagetes erecta L.on serum cytokines in broilers

万寿菊茎叶提取物低、中、高剂量组间的IL-1、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10和PGE2均无显著差异（P＞0.05）。

2.5 万寿菊茎叶提取物的有效成分检测

万寿菊茎叶提取物中主要包含的有效成分为黄酮类化合物和酚类化合物，见表4。

表4 万寿菊茎叶提取物的有效成分检测结果Table 4 Results of active component detection of the extract of stem and leaves of Tagetes erecta L.

3 讨论与小结

现有研究表明植物黄酮可以提升肉鸡的生产性能，郑伟等[12]发现在饲料中添加0.05%沙棘叶黄酮后可使肉鸡的平均增重相对于对照组提升8.28%，李莉等[13]发现饲料中添加万寿菊黄酮可以显著提升4～6周龄的黄羽肉鸡平均日增重。万寿菊是一种常见的经济作物，具有抗炎、抗氧化、调节动物免疫性能等作用[14-15]。目前，关于万寿菊茎叶提取物对家禽的生产性能和免疫系统的影响还未见文献报道。在本实验中，给予肉鸡不同剂量的万寿菊茎叶提取物并检测其平均日增重，得到万寿菊茎叶提取物各剂量组均有所提高，其中万寿菊茎叶提取物中剂量组肉鸡的平均日增重与对照组相比，极显著提高，表明万寿菊茎叶提取物能提高肉鸡的生产性能，以中剂量组为最佳，不具备有量效关系。与万寿菊花提取物以及其他菊科植物相比，万寿菊茎叶提取物同样能提高肉鸡的生产性能[16-19]。植物黄酮具有提升肉鸡的生产性能的作用，且在本次实验中通过成分分析发现万寿菊茎叶提取物中主要含有黄酮类化合物，因此我们推测万寿菊茎叶提取物中起着提高肉鸡生产性能的活性成分可能为黄酮类化合物[20-22]。

免疫器官的发育状况及机能强弱直接决定着禽类的免疫水平。脾是禽类最大的外周免疫器官，参与机体的细胞免疫和体液免疫，其重量的增加可说明机体细胞免疫和体液免疫机能的增强[23-24]。除免疫器官外，免疫系统中的免疫因子在调节免疫反应中起着非常重要的作用。其中免疫球蛋白是能够决定体液免疫程度的重要因素[25]；免疫球蛋白的表达水平直接放反映了机体的抗病能力；免疫球蛋白的表达水平直接放反映了机体的抗病能力；细胞因子则是评估细胞免疫的重要指标[26]，其中IL-1、IL-6和IL-8与机体炎症反应有密切的联系，IL-10作为一种抗炎因子，可以抑制炎症的发生[27]。而PGE2作为一种强烈的血管扩张剂，则在炎症后期大量地表达。郑艳等[28]研究发现，在鸡的日粮中添加青刺果黄酮后，相较于对照组，其血清中的IgM和IgG的含量显著增加；朱红岗等[29]也发现鸡肝散总黄酮可以提升小鼠血清中的IgM的含量。而在本实验的研究中发现，与对照组相比，万寿菊茎叶提取物也能显著提高肉鸡脾脏的免疫器官指数，并上调肉鸡血清中IgG、IgM的表达水平，可能是因为万寿菊茎叶提取物中的黄酮类物质刺激了脾脏淋巴细胞的增殖，从而促进了免疫球蛋白的产生。同时万寿菊茎叶提取物显著上调抗炎因子IL-10的表达水平，显著降低血清中IL-1β和PGE2的含量。万寿菊茎叶提取物通过提升血清中的免疫球蛋白的浓度，增强机体的抗病能力，降低了外源物质入侵机体后带来的损害，从而降低了机体炎性反应，因此降低了炎性因子的水平，使肉鸡消化吸收的营养物质中用于抵抗疾病的部分减少，从而用于生长的部分增加，所以提高了动物的生产性能[30]。

综上，万寿菊茎叶提取物能显著提高肉鸡生产性能及其机体的免疫性能，可作为饲料添加剂应用于肉鸡日粮中，其最佳用量为800～1 200 mg/kg。