多囊卵巢综合征患者外周血长链非编码NTF3-5表达及与胰岛素抵抗关系

李永乐 张 丽 申小静 杨 光 王婷婷

1.河南省生殖健康科学技术研究院(河南省生殖妇产医院)，国家卫生健康委出生缺陷预防重点实验室(郑州，450000)；2.河南省省直第三人民医院

多囊卵巢综合征(PCOS)是世界卫生组织排卵障碍分类中的II型排卵障碍，患病率8%～13%，诊断和管理仍具有挑战性[1-2]。胰岛素抵抗(IR)在PCOS的发病机制中起关键作用[3]。据研究报道，机体的慢性炎症状态会加速IR的形成，参与PCOS疾病的发生发展[4]，但PCOS患者IR的发生机制仍不完全明确。长链非编码RNA(LncRNA)被发现作为功能性RNA参与生物学、发育和病理过程[5]；LncRNA在患有PCOS女性卵泡液中表达存在异常，可能在IR中起关键作用，为了解PCOS病理生理机制提供新视野[6]。Lnc-NTF3-5参与多种疾病的进展，可作为靶点抑制胰岛细胞凋亡、氧化应激和炎症，促进胰岛细胞增殖和胰岛素分泌[7]。然而Lnc-NTF3-5在PCOS中的表达及与IR的关系尚不清楚。本研究分析了PCOS患者外周血Lnc-NTF3-5的表达情况，探讨与IR的关系，为PCOS的临床诊治提供新方法和治疗靶点。

1 资料与方法

1.1 资料

PCOS组研究对象来源于2017年12月—2020年12月在本院妇产科门诊治疗的PCOS患者108例，年龄21～35岁，首次确诊，依据ESHRE/ASRM的鹿特丹专家会议推荐的诊断标准[8]，近期未服用过激素药物；排除因其他原因(如甲状腺、雄激素分泌肿瘤)导致发生高雄激素症或排卵不正常，合并糖尿病或者其他恶性肿瘤及伴有急性或慢性炎性疾病患者。对照组为年龄匹配，无多囊卵巢，无月经不调和高雄激素，体质指数(BMI)<30(kg/m2)体检的108例健康女性，年龄22～34岁。本研究方案经院伦理委员会批准，研究对象均获得书面知情同意书。

1.2 检测方法

1.2.1样本采集与保存采集研究对象晨外周静脉血液样本，离心取上层血清收集到收集管中，一部分用于临床指标检测，一部分-80℃保存待测。

1.2.2临床指标空腹血糖使用血糖检测仪(海聚慕医疗器械有限公司)测定，全自动化学发光免疫分析系统(西门子医疗诊断产品(上海)有限公司)测定内分泌相关指标，包括黄体生成素(LH)、促卵泡激素(FSH)、睾酮(T)、雌二醇(E2)水平。IR的评估采用稳态模型评估法(HOMA-IR)[9]，HOMA-IR指数≥2.5为IR组，<2.5为NIR组。

1.2.3Lnc-NTF3-5利用TRIzol试剂(上海联硕生物科技有限公司)提取血清总RNA，TIAN ScriptcDNA第一链合成试剂盒[天根生化科技(北京)有限公司]进行cDNA合成，以cDNA为模板，使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测Lnc-NTF3-5表达水平。定量引物根据基因序列应用Primer5.0软件设计(表1)，干粉由上海英军生物科技有限公司合成。试剂盒采用SYBR Green Realtime PCR Master Mix(上海研卉生物科技有限公司)。qRT-PCR检测反应共40个循环，条件为预变性95℃ 60 s，变性95℃ 15 s，退火60℃ 60 s，延伸72℃ 45 s，在ABI 7700 PCR仪上(美国ABI生物公司)进行，以GAPDH作为内源参考，采用2-ΔΔCt法进行定量分析。

表1 引物序列

1.2.4 C-反应蛋白(CRP)采用人CRP酶联免疫吸附试剂盒(北京索莱宝科技有限公司)检测血清CRP表达水平。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 基本临床特征

如表2所示，两组年龄无差异(P>0.05)；BMI、收缩压、舒张压、LH、T、E2、空腹血糖、空腹胰岛素水平及HOMA-IR PCOS组高于对照组，FSH水平低于对照组(均P<0.05)。

表2 两组基本临床特征比较

2.2 Lnc-NTF3-5及CRP表达水平

PCOS组Lnc-NTF3-5(1.98±0.35)和CRP(5.21±1.06 ng/ml)水平均高于对照组(1.03±0.16、3.19±0.94 ng/ml)(t=25.654、14.814，均P=0.000)。

2.3 Lnc-NTF3-5的表达水平及HOMA-IR指数

IR组Lnc-NTF3-5(2.07±0.47)及HOMA-IR(4.83±1.23)水平均高于NIR组(1.89±0.20、2.42±0.64)(t=2.555、12.628，P=0.012、0.000)。

2.4 PCOS组Lnc-NTF3-5与HOMA-IR、CRP和性激素水平相关性

PCOS组Lnc-NTF3-5水平分别与HOMA-IR、CRP、LH、T、和E2呈正相关(r=0.424、0.456、0.425、0.508、0.459，均P=0.000)，与FSH呈负相关(r=-0.410，P=0.000)。

3 讨论

PCOS是一种严重的生殖和内分泌疾病，临床多表现为月经不规律、高雄激素且多伴有肥胖等代谢紊乱，而IR在PCOS发病机制中具有核心作用，影响70%的PCOS女性[10]。通过胰岛素增敏药物和(或)生活方式治疗降低IR可改善PCOS患者生殖和代谢结果，但部分PCOS患者可能具有正常的胰岛素敏感性，且PCOS中IR的潜在机制尚未完全了解[11]。因此，寻找反映PCOS患者IR的循环生物标志物至关重要。

既往研究显示，IR可调节PCOS患者体内性激素分泌，性激素水平异常是引起PCOS的发病特征之一[12]。本研究临床资料显示，PCOS患者LH、T、E2水平相对升高，而FSH相对降低，说明性激素分泌紊乱是PCOS发生原因之一；此外，PCOS的发生还与其他因素(收缩压、舒张压、BMI、空腹血糖、空腹胰岛素水平及HOMA-IR)有关。研究表明，PCOS的发病机制与慢性炎症有关，多种炎症因子的表达影响PCOS病情发展，与IR的形成和发展关系密切。CRP是一种急性期反应物，调控免疫系统，其水平与PCOS患者的IR有关且随病情发展而升高[4]。本研究结果与以往报道一致，PCOS患者CRP水平升高，进一步证明了慢性炎症在PCOS的发病机制和IR的发生过程中起重要作用。

LncRNA可在不同水平上调节基因表达，与多种人类疾病和紊乱有关，在疾病发展过程中发挥关键作用，包括内分泌紊乱、肿瘤甚至转移等。Qin等[13]首次证明LncRNA H19与PCOS相关，其表达水平升高可能是PCOS内分泌和代谢紊乱关键因素。既往研究发现了PCOS患者卵巢颗粒细胞中LncRNA RP11-151A6.4水平高于对照组，可能是PCOS患者IR、雄激素过多和脂肪组织功能障碍的重要介质[10]。表明LncRNA测定可能为PCOS提供候选生物标志物和潜在治疗靶点。最近，Zhang等[6]研究发现，在高糖环境下Lnc-NTF3-5在胰岛β细胞中表达增加，可影响氧化应激和炎症因子分泌，从而影响高糖环境下胰岛β细胞的增殖和胰岛素分泌，说明Lnc-NTF3-5对胰岛功能有一定调节作用。本研究检测PCOS患者外周血中Lnc-NTF3-5水平上升，与NIR组相比IR组水平更高，说明Lnc-NTF3-5在PCOS的发生发展中起积极作用，可能对PCOS中IR的形成有影响。

HOMA-IR指数用于评估IR，PCOS患者的HOMA-IR显著上调，是PCOS临床评估重要的参考指标之一[14]。PCOS的慢性低度炎症可通过炎症介质的释放促进PCOS的发生发展和诱导IR产生[15]；另外IR诱导大多数PCOS患者内分泌紊乱，雄激素水平升高最终引起排卵障碍[11]。本研究分析了PCOS患者Lnc-NTF3-5表达与HOMA-IR、CRP和性激素水平相关性，结果显示Lnc-NTF3-5与HOMA-IR、CRP、LH、T、和E2均呈正相关，与FSH水平呈负相关，表明Lnc-NTF3-5可能影响PCOS的炎症反应，同时调节性激素分泌发生异常，在IR中发挥重要作用，为阐明PCOS患者IR的潜在机制提供新的思路。

综上所述，PCOS患者外周血Lnc-NTF3-5表达上调，与PCOS的发生发展可能有关，可能影响PCOS的炎症反应和性激素分泌，在IR中发挥重要作用。为更好了解PCOS中IR的潜在机制并确定新的治疗靶点提供新思路。但由于研究受到参与者人数较少限制，今后将进行更大样本进行临床观察。