寿胎丸对不明原因复发性流产患者外周血Th1/Th2细胞的影响

施后渊，钟丽君，张 婷

(四川省西南医科大学附属中医医院 妇产科，四川 泸州 646000)

复发性流产(recurrent spontaneous abortion，RSA)是产科中常见的疾病，其中约50%不清楚原因，称不明原因复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion，URSA)。因病因不明确，治疗缺乏循证依据，多数治疗存在争议。中医药在URSA治疗中初现优势，寿胎丸在该疾病中有显著疗效。本研究致力于研究寿胎丸对URSA的外周血辅助型T细胞1(ThelperI cell，Th1)/辅助型T细胞2(Thelper 2 cell，Th2)细胞的影响，从而探讨寿胎丸治疗URSA的作用机制，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019年1月-2020年10月西南医科大学附属中医医院门诊收治正常妊娠60例(正常组)、URSA患者妊娠60例(URSA患者组)作为研究对象。将URSA组随机分成实验组(寿胎丸联合地屈孕酮组)及对照组(地屈孕酮组)。正常组(60例)、实验组28例(失访2例)与对照组29例(失访1例)基础情况比较，具有可比性(P>0.05)，见表1。

表1 正常组、实验组与对照组基础指标对比

1.2 纳入标准和排除标准

1.2.1 纳入标准

符合西医和中医诊断标准，平素月经周期规律(周期约28～30 d)，经自然受孕，停经42 d，彩超提示宫腔内见妊娠囊者；(1)西医诊断标准：参照2020年《复发性流产诊治的专家共识》[1]：2次及以上在妊娠28周之前的胎儿丢失，排除母亲免疫学因素、易栓症、生殖道结构异常、内分泌异常以及染色体异常者诊断为URSA。(2)中医诊断参照十一版《中医妇科学》：滑胎：凡堕胎、小产连续发生2次及以上者；肾气亏虚主症：屡孕屡堕，甚或如期而堕，期间阴道出血，色暗淡，质薄，头晕耳鸣，腰酸膝软，夜尿频多，或面色晦暗，舌淡，苔白，脉沉弱。

1.2.2 排除标准

平素月经周期不规律，受试者拒绝加入此次研究，或其他原因需终止妊娠者。此次研究获得伦理委员会的批准。

1.3 方法

实验组予寿胎丸(桑寄生10 g，菟丝子20 g，川续断10 g，阿胶10 g。免煎剂，1剂/d，兑水300 mL，早中晚分服各100 mL，连服6周；地屈孕酮片(国药准字H20090470)：1片/8 h，服用6周。对照组予以地屈孕酮片，服用方法同实验组，治疗6周。所有对象门诊随诊，并给于饮食指导及心理支持。

所有研究对象入组时抽取空腹肘静脉血5 mL，URSA组于治疗6周后再次抽取空腹肘静脉血5 mL。所有血液标本均经离心后取上层血清，采用ELISA法检测(Adlitteram Diagnostic laboratories)IL-2和TNF-α(Th1细胞因子)、IL-4和IL-10(Th2细胞因子)，检测方法按照试剂盒说明书进行。

1.4 观察指标

1.4.1 每3周查血孕酮及HCG，治疗结束后复查彩超。若期间出现阴道流血、腹痛，根据情况给予必要处理。若确诊胚胎丢失，则终止实验。

1.4.2 中医症候评分

参照《中药新药临床研究指导原则(2002版)》中早期先兆流产肾虚证的症状分级量化：包括：阴道出血时间、出血量、出血色质、头晕耳鸣，腰酸膝软，夜尿频多。单项“1～3分”分别对应轻中重，无症状则评“0分”。

1.4.3 疗效评定标准

参照《中药新药临床研究指导原则(2002版)》，见表2。

表2 先兆流产疗效评定标准

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 实验组与对照组治疗结果比较

2.1.1 2组治疗前后中医症候量化评分总和比较

治疗前后评分下降表示患者症状好转(治疗前后差值越大，症状好转越明显)。比较中医症候量化评分差值，2组差异有统计学意义(P<0.001)。

2.1.2 2组治疗效果比较

其中实验组有效率(治愈+显效+有效)(92.9%)高于对照组(72.4%)，差异有统计学意义(P<0.05)，见表3。

2.2 各组治疗前后细胞因子比较

2.2.1 治疗前，正常组与URSA组相比较，IL-2和TNF-α、IL-4和IL-10值差异有统计学意义(P<0.05)，URSA组Th1细胞因子高于正常组，Th2细胞因子低于正常组，提示URSA患者存在Th1/Th2失衡，见表4。

表3 URSA实验组与对照组治疗效果对比[n(%)]

表4 治疗前RSA正常组与URSA组细胞因子对比(pg/mL)

2.2.2 治疗前，实验组与对照组IL-2和TNF-α、IL-4和IL-10差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性，治疗后，2组血清Th1细胞因子均下调，Th2细胞因子均上调，与治疗前相比有统计学意义(P<0.05)，提示寿胎丸联合地屈孕酮或单用地屈孕酮均对Th1/Th2细胞因子有调节作用，细胞因子比较见表5。

表5 URSA实验组与对照组治疗前后细胞因子比较(pg/mL)

2.2.3 实验组治疗前后细胞因子差值与对照组差值比较，差异有统计学意义(P<0.05)。提示寿胎丸联合地屈孕酮下调Th1细胞因子、上调Th2细胞因子，较单用地屈孕酮明显(见表6)。

表6 URSA实验组与对照组治疗前后细胞因子差值比较(pg/mL)

3 讨论

URSA发病近年来呈上升趋势，严重影响育龄期妇女身心健康。URSA因其病因不明确，其治疗以经验性、实验性治疗为主，主要是抗血小板抗凝、免疫调节、地屈孕酮等[1，2]，缺乏足够的循证医学证据，且治疗作用有限。本病属于中医学的“滑胎”，中医药治疗具有优势，寿胎丸是防治滑胎的代表方剂，具有固肾安胎的功效，临床疗效显著。经证实，寿胎丸联合地屈孕酮治疗URSA，较单用地屈孕酮，可改善阴道流血等症状，改善中医证候评分[3，4]。寿胎丸或是治疗URSA的新方向。

但寿胎丸对URSA的作用机制尚不明确。近年来寿胎丸治疗URSA的作用机制有一定的进展。经证实[5，6]，寿胎丸可靶向调节miR-374c-5p/ATG12信号轴，减轻滋养细胞自噬、上调RSA大鼠蜕膜组织AQP1、AQP2 mRNA及蛋白的表达水平等。但这也仅仅是寿胎丸对URSA作用机制的部分认识，仍需继续探讨。

研究表明URSA的发生可能与免疫因素密切相关[7]，其中主要与Th1/Th2细胞失衡关系尤为密切。Th1细胞主要分泌IL-2、TNF-α等，可对滋养层细胞产生细胞毒性作用，从而形成免疫损伤，引起胚胎丢失；而Th2主要分泌IL-4、-10等，可维持母体与胚胎间的免疫耐受。妊娠成功时母胎界面以Th2为主，若Th1/Th2平衡向Th1偏移，免疫耐受失衡，则可能出现流产。Th1/Th2失衡是URSA发病的重要机制[8]。因此，调节Th1/Th2平衡，可维持生理免疫耐受，从而维系妊娠的继续。研究致力于研究寿胎丸对URSA患者Th1/Th2细胞失衡的影响。

本研究验证了寿胎丸对URSA的疗效，证实Th1/Th2平衡是URSA发生的重要机制。寿胎丸联合地屈孕酮较单用地屈孕酮，能更有效下调Th1细胞因子，上调Th2细胞因子。本研究表明，寿胎丸可通过维持Th1/Th2平衡，重建母胎免疫耐受，对妊娠具有保护作用。该研究为寿胎丸调节Th1/Th2平衡提供了实验室数据，阐释了寿胎丸对URSA的治疗机制，具有重要意义。