二维实时剪切波弹性成像与血清微小核糖核酸-122评估乙型肝炎患者肝纤维化的作用

王立美 张玉卓 李洁 谷培 秘景慧

乙型肝炎患者肝脏的去氧化，储存肝糖原，合成分泌性蛋白质等功能异常，随着肝纤维化程度的加重，严重者会进展为肝硬化，造成不可逆的肝脏损伤，严重降低患者的生存率及生存质量[1，2]。因此在肝纤维化早期明确疾病诊断及分期，及时采取有效的治疗手段，将有助于阻止病情进展，提高治疗效果，改善患者预后。既往对乙肝肝纤维化的诊断，多采用肝组织病理学活检，并将检查结果作为乙肝肝纤维化诊断及分期的金标准。但肝脏穿刺活检属于创伤性的检查手段，存在一定的并发症，部分并发症可危及生命，使得患者对该检查方法接受程度较低，并且肝脏穿刺活检存在一定的主观性差异性和取样误差，造成该检查结果重复性差、不能动态观察肝纤维化进展情况[3]。近年来，对乙肝肝纤维化的诊断技术越来越完善，其中二维实时剪切波弹性成像，并配合血清微小核糖核酸-122检测的诊断技术也在不断成熟[4，5]，能有效反应乙型肝炎肝纤维化的疾病程度及进展。对此，本研究探讨了二维实时剪切波弹性成像与血清微小核糖核酸-122测定评估乙型肝炎患者肝纤维化的应用价值，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取我院2019年10月至2022年2月收治的80例乙型肝炎患者，作为观察组，根据肝纤维化分期对观察组进行分组(S0组、S1组、S2组、S3组)。另选取同期60例健康体检者作为对照组，2组均接受二维实时剪切波弹性成像检查以及血清微小核糖核酸-122检测。观察组男46例，女34例；年龄22～69岁，平均年龄(45.38±9.26)岁；病程2～10年，平均病程(5.35±2.65)年。对照组中男30例，女30例；年龄22～70岁，平均年龄(45.25±10.55)岁。纳入对象的性别比、年龄差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 纳入与排除标准

1.2.1 纳入标准：观察组患者均符合慢性乙型肝炎防治指南中对该疾病诊断的相关标准[6]；观察组患者经肝组织活检确诊为乙型肝炎；观察组患者血清学指标及肝功能检查资料完整；观察组患者在6个月内无降酶、抗病毒、免疫调节、抗纤维化药物的用药史；所有纳入对象及其家属对研究的方法与目的知情，自愿签署知情同意书；研究通过本院伦理委员会批准。

1.2.2 排除标准：同时感染丁型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒、戊型肝炎病毒、丙型肝炎病毒者；患代谢性、血吸虫性、酒精性、胆汁淤积性肝病者；自身免疫性疾病者；中途退出或不配合研究者。

1.3 方法 观察组乙型肝炎患者进行肝穿刺活检，参照METAVIR分级，将患者分为S0组(无肝纤维化)、S1组(轻度肝纤维化)、S2组(明显肝纤维化)、S3组(进展性肝纤维化)及S4组(肝硬化)[7]。

1.4 二维实时剪切波弹性成像检查 观察组与对照组均接受二维实时剪切波弹性成像检查。检查前告知受检者空腹≥6 h。采用mindray ResonanceR9超声诊断仪，腹部SC6-1凸阵探头，调整探头频率至1～6 MHz。患者处平卧位，右上肢上举置于头部。于肝S5、S6段肋间隙，避开肝脏大血管、肿块及胆囊等结构，选择SWE模式，将 4 cm×3 cm取样框上缘置于肝包膜下约1 cm。嘱患者屏气，待图像稳定且颜色均匀填充90%以上时选取直径≥1 cm感兴趣区测量LSM值，测5次后取中位数作为结果。

1.5 实验室检查 清晨抽取受试者静脉血,利用miRNA试剂盒提取血清总RNA；miRNA-122 采用美国ABI ProFlexTM PCR系统进行分析；miRNA-122反转录采用美国GeneCopoeia 试剂盒进行反应,将miRNA反转录生成cDNA,所有操作均在试剂盒说明的指导下进行。根据PCR 仪配备系统，得到miRNA-122的Ct值。

2 结果

2.1 观察组与对照组LSM值比较 S0组与对照组LSM值差异无统计学意义(P>0.05)；S1、S2、S3、S4组LSM值均显著高于对照组，S4组显著高于S0、S1、S2、S3组，S3组显著高于S0、S1、S2组，S2显著高于S0、S1组，S1组显著高于S0组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 观察组与对照组LSM值比较

2.2 观察组与对照组血清miRNA-122指标比较 观察组中S0、S1、S2组肝纤维化(轻中度纤维化)患者血清miRNA-122水平比S3、S4组(重度纤维化)患者显著增高(P<0.05)。见表2。

2.3 二维实时剪切波弹性成像肝脏纤维化分期相关性分析 经过相关性分析得出，二维实时剪切波弹性成像与肝纤维化分期呈正相关。见表3。

2.4 二维实时剪切波弹性成像诊断效能分析 以活检穿刺病理结果为金标准，各个观察组分期AUC结果分别为0.800、0.791、0.774、0.814，≥S1阈值为80.61，≥S2阈值为88.39，≥S3阈值为90.77，s4阈值为 94.59。见表4。

表2 观察组与对照组血清miRNA-122指标比较

表3 二维实时剪切波弹性成像肝脏纤维化分期相关性分析

表4 二维实时剪切波弹性成像诊断效能分析

2.5 血清miR-122对肝纤维化的预测价值 以活检穿刺病理结果为金标准，各个观察组分期血清miR-122的AUC结果分别为0.795、0.782、0.761、0.802，≥S1最佳界值为80.61，≥S2最佳界值为88.39，≥S3最佳界值为90.77，S4最佳界值为3.483。见表5。

表5 血清miR-122对肝纤维化的预测价值

3 讨论

乙肝患者的肝脏纤维化，是乙型肝炎向肝硬化发展的必经阶段，是一个发展变化的病理过程。如果能在发病早期就明确诊断并给予对症治疗，可及时阻止疾病向中-重度发展，减少患者医疗成本，减轻痛苦、延长寿命[8，9]。近年来实时二维剪切波弹性成像技术在临床广泛应用，并逐渐成为监测肝纤维化程度及评价治疗后反应的重要诊断手段[10]。该技术原理为利用高速声辐射脉冲使不同深度的组织同时产生横向位移，继而在聚焦部位产生剪切波来评估肝脏的硬度值，弹性数值越大，表示肝组织硬度值越大[11]。

本次研究结果显示，乙肝肝纤维化患者的肝脏硬度测定值显著高于对照组与观察组中的S0组者(P<0.05)；二维实时剪切波弹性成像与肝纤维化分期、LSM指标呈正相关；患者的肝硬度值随着肝纤维化病理分期加重而增大，实时二维剪切波弹性成像技术，通过剪切波获知组织弹性模量，量化表现出肝纤维化的程度，提升了检查结果的精准度。已有研究发现该检测方法和肝活组织检查的检查结果无显著性差异，不能接受肝穿的患者可通过二维剪切波弹性成像检查获得准确的检测结果[12，13]。本研究中观察组患者血清miRNA-122水平显著高于对照组(P<0.05)；观察组中S0、S1、S2组肝纤维化(轻、中度纤维化)患者血清miRNA-122水平比S3、S4组(重度纤维化)患者显著增高(P<0.05)。血清 miRNA-122已成为肝脏活动性损伤和组织修复的潜在生物标志物之一。血清中miRNA-122含量可作为肝硬化、肝纤维化患者分级的生化标记物。乙肝肝纤维化患者血清中miRNA-122含量降低，可能是因为肝细胞在疾病影响下数量大幅减少，抗肝纤维化的作用降低，使得肝纤维化加重[14，15]。临床常用患者丙氨酸氨基转移酶和天门冬氨酸氨基转移酶来评估肝功能，但这2个标志物用于临床诊断肝损伤，并不能区分引起慢性肝病的原因。有研究表明乙型肝炎病毒及肝癌等引起的慢性肝病中，miRNA均出现不同程度的变化，其中miRNA-122是变化特征最显著的指标之一[16]。miRNA-122在肝脏特有，特异性表达在成人肝脏总miRNA中接近七成，肝病患者血清中miRNA-122表达量升高，是因为miRNA对翻译进程产生了干扰。慢性肝炎、肝细胞癌患者血清中miRNA-122表达量显著较高,对肝纤维化有重要影响。miRNA-122对肝纤维化发生风险有预测价值，未来临床有望通过检测miRNA-122,分析乙肝患者肝纤维化、肝硬化的发生风险,且可考虑将miRNA-122作为肝纤维化新的治疗靶基因。

结合以上分析内容，可见对乙型肝炎肝纤维化者进行二维实时剪切波弹性成像与miRNA-122检查，对于客观评估肝纤维化程度有一定的诊断价值，且能动态观察抗病毒及抗纤维化药物治疗的效果，临床应用价值较高。本研究为实时二维剪切波弹性成像与血清miR-122应用于乙肝肝纤维化的诊断提供了一定科学依据。