“三步消毒法”对豁眼鹅种蛋消毒效果的研究

邱文然

（辽宁职业学院，辽宁铁岭 112099）

豁眼鹅是我国优秀的地方良种，其突出的优点是年产蛋量多，繁殖能力强，是最理想的育种素材和杂交综合利用的首选品种[1]。因其趾间有蹼、圈舍潮湿，使脚底特别污浊，产蛋时会污染产蛋箱中的其他种蛋，导致种蛋污染严重。据本课题组2016 年对铁岭市部分豁眼鹅养殖场种蛋污染状况调查，重度污染的脏蛋率达2%～5%，中、轻度污染的脏蛋率高达90%以上主要是种蛋消毒不当，导致受精卵孵化率和健雏率较低。

本试验从提升和规范豁眼鹅种蛋消毒技术着手，参考家禽种蛋消毒的相关研究成果，精选碘液浸洗、福尔马林熏蒸和新洁尔灭喷洒3 种种蛋消毒方法，依据种蛋保存和孵化过程特点，依次排列为：种蛋收集后浸洗、入孵前熏蒸和孵化过程中喷洒的三步消毒，并规范种蛋消毒操作技术，构建豁眼鹅种蛋“三步消毒法”，并与传统消毒方法对比，探讨种蛋“三步消毒法”消毒效果及其对孵化效果的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 种蛋

种蛋购自昌图金秋豁鹅原种场。每天收集种蛋经初选和试验处理后，送到蛋库种保存7d，保存温度12～18℃，相对湿度70%～75%[2]。

1.1.2 仪器设备

箱体式孵化出雏一体机(型号为EIFTPC-YM1500)购自青岛兴仪电子设备有限责任公司；三用恒温水浴槽（型号为HH-600）购自由上海百碘仪器设备有限公司。

1.1.3 药品

甲醛溶液（批号为2020072101），碘化钾（批号为2020010601）购自成都市科隆化学品有限公司；高锰酸钾（批号为20071019）购自沈阳瑞丰精细化学品有限公司；碘片（批号为20150922）购自天津市瑞丰特化学品有限公司；新洁尔灭（批号为200302）购自山东利尔康医疗科技股份有限公司；营养琼脂（批号为20201102，普通琼脂平板及萨布罗氏琼脂平板）购自北京奥博星生物技术有限责任公司。

1.2 方法

随机选取1000 枚合格种蛋，随机分为两组后编号，每组500 枚。对照组收集种蛋后在蛋库保存7d，在种蛋入孵前实施福尔马林熏蒸消毒。将种蛋放置在孵化机的蛋盘内，送到消毒柜中，按照消毒柜容积称量消毒药品，即含甲醛40%的福尔马林30mL/m3、高锰酸钾15g/m3；将称量好的高锰酸钾放置于广口瓷盆中，送入消毒柜内备用，将称量好的福尔马林迅速倒入装有高锰酸钾瓷盆内，并置于消毒柜内下方，关闭消毒柜，保持消毒柜内温度为25～27℃、相对湿度为70%～80%。消毒30min 后开启消毒柜通风系统，排除消毒气体，打开消毒柜门，取出种蛋，检测消毒效果[3]。

试验组种蛋采用“三步消毒法”消毒。第一步收集种蛋后实施碘液浸洗消毒：下午14 点开始收集种蛋，初选后进行蛋壳细菌数量检测。配制0.1%碘液：10g 碘片和15g 碘化钾，研磨后溶解于1000mL 清水中，然后再加入9000mL 温水（37～40℃）。将配制好的碘液置于水浴槽中，保持水温在40℃左右。将收集后的种蛋分批放入0.1%的温碘液中，浸泡30～60s，洗净污物后取出晾干，检测消毒效果后送到蛋库中保存7d，保存温度12～18℃，相对湿度为70%～75%。第二步在种蛋入孵前实施福尔马林熏蒸消毒，消毒步骤同对照组。消毒30min 后开启消毒柜通风系统，排除消毒气体，打开消毒柜门，取出种蛋，检测消毒效果[3]。第三步在种蛋入孵第16d 结合凉蛋实施新洁尔灭喷洒消毒1 次：用5%的新洁尔灭原液加25倍30℃温水配制成0.2%溶液；关闭孵化器，拉出蛋车，消毒前检测蛋壳细菌数量，用喷雾器将配制好的0.2%新洁尔灭温溶液均匀喷洒在种蛋表面；将种蛋凉约30min 左右，待蛋温降至30℃左右时，检测消毒效果后送至孵化器内继续孵化[4]。

1.2.1 蛋壳细菌数量检测

在消毒操作前后每组随机抽取10 枚种蛋，进行蛋壳细菌数量测定。在无菌操作下，分别用灭菌纯净水沾湿棉签擦洗被检样本钝端蛋壳1.0cm2面积内的细菌，用灭菌纯净水进行1∶10、1∶100、1∶1000 倍稀释，最后将稀释后的液体加至培养基上，37℃培养24h，统计消毒前后每枚种蛋蛋壳1.0cm2面积内的细菌数量[4]。

1.2.2 孵化处理

将消毒处理的种蛋放入同一台孵化机进行孵化，将各试验处理后的种蛋预热后码盘入孵。孵化过程温湿度见表1；随着胚龄增大逐渐开大通风口；每2h 翻蛋1 次，翻蛋角度为90°；16 胚龄开始上午、下午各凉蛋1 次，每次30min 左右，待蛋温降至30℃左右时放回孵化器内继续孵化；在孵化到第8、21 和28天时各进行1 次照蛋[5]。种蛋入孵前逐个编号，分别统计对照组和试验组的入孵蛋数、受精蛋数、受精卵孵化率、出雏数、健雏数、健雏率和胚胎死亡率。

表1 豁眼鹅种蛋孵化过程温湿度设置情况表

1.3 数据统计分析

采用SPSS 软件对种蛋蛋壳表面细菌数量、细菌减少率、授精卵孵化率、健雏率、胚胎早期死亡率、胚胎后期死亡率等数据进行t 检验。

2 结果与分析

2.1 消毒效果分析

不同消毒方式种蛋蛋壳细菌数量情况见表2，从表中可以看出，在种蛋进入蛋库前，对照组和试验组鸡蛋表面细菌数差异不显著，但由于对照组在种蛋收集时未进行消毒，入孵前蛋壳表面细菌数量（21320±2499 个/cm2）显著高于试验组，即使经过福尔马林熏蒸，细菌数仍在十万级以上。而试验组在种蛋收集时经碘液浸洗消毒，细菌数量减少81.5%（3940±993），种蛋在蛋库保存7d 后细菌增殖1 倍左右（8320±2295 个/cm2），入孵前经福尔马林熏蒸消毒后，细菌数减少了72.5%，不足3000 个/cm2，远低于对照组的细菌数。试验组孵化过程中细菌虽有增殖，但由于细菌基数较低，入孵后16 天也未超过10000 个/cm2，而对照组则仍在十万级以上。试验组种蛋通过“三步消毒法”的消毒，蛋壳表面细菌综合减少率为91.0%，对照组种蛋通过福尔马林熏蒸消毒，蛋壳表面细菌减少率为66.7%，试验组显著高于对照组。

表2 不同消毒方式种蛋蛋壳细菌数量情况

表3 孵化试验结果统计表

2.2 孵化试验结果分析

对照组与试验组种蛋放入同一台孵化器内进行孵化，孵化结果见表4。从表中可以看出，试验组比对照组受精卵孵化率高出8.5 个百分点，健雏率高出7.2个百分点，胚胎早期死亡率低7.0 个百分点，胚胎后期死亡率低1.6%。

3 结论

与仅在入孵前采用福尔马林熏蒸消毒相比，实施“三步消毒法”消毒豁眼鹅种蛋可大幅度减少种蛋保存与孵化过程中蛋壳表面的细菌数量，可明显提高种蛋受精卵孵化率及健雏率，降低种蛋胚胎早期死亡率。

本试验精选碘液浸洗、福尔马林熏蒸和新洁尔灭喷洒3 种种蛋消毒法，依据种蛋保存和孵化特点，依次排列为：种蛋收集后浸洗、入孵前熏蒸和孵化过程中喷洒的三步消毒，并规范操作技术，构建豁眼鹅种蛋“三步消毒法”，获得显著的消毒效果和孵化效果。随着新型种蛋消毒药物的研制，也可用新型种蛋消毒药物替代上述消毒药物，其消毒效果和孵化效果有待进一步研究。种蛋“三步消毒法”及规范消毒技术的消毒效果和孵化效果显著优于种蛋入孵前熏蒸消毒，但增加了消毒药物及用量，进而增加了消毒成本，有关种蛋“三步消毒法”的经济效益有待进一步研究。