鲁西南地区男性HPV分型分布研究

王彤，王杰，陆书华，解媛，项玉涵，金呈强

（济宁医学院附属医院检验科，山东 济宁 272000）

0 引言

人乳头状瘤病毒（HPV）是当前世界范围内最常见的性传播病毒，是女性宫颈癌的高危引发因素之一，并与男性和女性多部位的癌症发展有关[1]。宫颈癌因其高发病率和病死率成为世界范围内严重威胁人类生命健康的恶性肿瘤之一，世界卫生组织于2020年11月17日正式启动《加速消除宫颈癌全球战略》，为2020-2030这十年制定了明确的目标和指标[2]。研究表明，高危型HPV持续感染是宫颈癌发生、发展的必要原因。而HPV感染不仅限于女性群体，近年来，男性HPV感染阳性率也在逐年升高，且男性HPV的感染对其配偶HPV感染的治疗、转归极为不利，甚至会引起自身尖锐湿疣，肛门癌，阴茎癌等。本研究旨在了解鲁西南地区男性HPV感染的情况及型别分布，为HPV感染引起的相关男性疾病早期预防筛查和诊断提供一定的理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2020年1月17日至2021年3月16日来济宁医学院附属医院行H P V分型检查的门诊男性患者600例，年龄2～74岁，平均（33.88±11.03）岁。按年龄段划分标准分为5个年龄组，分别为少年组（≤18岁），青年组（19～34岁），壮年组（35～49岁），中年组（50～64岁），老年组（≥65岁）。患者来源皮肤科531例，泌尿外科65例，其他科室4例。

1.2 试剂与仪器

采用HPV分型检测试剂盒（PCR+膜杂交法），来自潮州凯普生物化学有限公司，可检测21种HPV亚型，属于高危亚型的有16种（16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、cp8304），低危亚型的有5种（6、11、43、42、44）。所用仪器为杭州博日科技股份有限公司生产的博日life express基因扩增仪,潮州凯普生物化学有限公司生产的凯普HHM-2医用核酸分子快速杂交仪。

1.3 方法

1.3.1 标本采集

由医生用男性专用棉拭子伸入尿道约2～4cm处，捻动拭子采集上皮细胞，或在龟头、冠状沟包皮远端黏膜上刮拭数次取材，取出后放入无菌管中密闭送检。医生将疣样组织标本采用无菌手术切除，放入装有细胞保存液的洗脱管中密闭送检。

1.3.2 HPV DNA提取

取保存液0.5mL，14000r/min离心3分钟，弃上清。加入400μL溶液Ⅰ，振荡混匀，100℃加热15min。点动离心，加入400μL溶液Ⅱ，振荡混匀后，室温下放置2 m i n，14000rpm离心5min，去上清液（务必去干净）。室温放置2min，加入60μL溶液Ⅲ充分溶解，静置10min，14000rpm离心3～5min。提取完毕后取2 μL样本用于扩增。

1.3.3 PCR扩增

按照试剂盒说明书配置好扩增用的反应体系（23.5μLPCR-Mix+0.5μLTaq酶），加入1-2μL提取好的DNA模板混匀，按扩增仪设定好的程序上机扩增。

20℃ 10min

95℃ 9min

95℃ 20sec ←—┐

55℃ 30sec 40个循环

72℃ 30sec ←—┙

72℃ 5min

4 ℃ HOLD

1.3.4 导流杂交分型

取PCR产物在95℃加热5min后立即用冰水浴至少2min，然后按试剂盒说明书在凯普HybriMax医用核酸分子快速杂交仪（HHM-2）上完成导流杂交并显色。检测结果阳性点为清晰可见的蓝紫色圆点，杂交膜条上的Biotin对照点和内对照（IC)点同时显色，此实验结果才有效。根据膜条HPV分型分布图判断阳性点为何种HPV病毒类型。有一个以上分型点阳性则为多重HPV感染。

1.4 统计学分析

采用IBM SPSS 20进行统计学分析：HPV感染采用绝对数和率相结合形式表示，组间比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HPV检测结果

鲁西南地区600例男性患者通过HPV分型检测，检出阳性316例，阳性率52.67%，其中单一感染197例，占总阳性率62.34%，双重感染83例，占总阳性率26.26%，三重感染21例，占总阳性率6.65%，四重及以上感染15例，占总阳性率4.75%。

2.2 HPV感染亚型分布

诊断试剂中的21种亚型均有检出，主要以亚型6，11，16为主，其中 低危亚型6型感染最多共98例，感染率16.33%；高危亚型45型感染最少仅有一例，感染率0.17%。差异具有统计学意义。见表1。

表1 鲁西南地区男性感染HPV亚型分布

2.3 HPV阳性感染者年龄段分布

根据年龄划分标准将阳性患者年龄分为五个年龄组，分别为少年组（≤18岁）15例占阳性感染率4.75%，青年组（19～34岁）166例占阳性感染率52.53%，壮年组（35～49岁）93例占阳性感染率29.43%，中年组（50～64岁）35例占阳性感染率11.08%，老年组（≥65岁）7例占阳性感染率2.22%。青年组＞壮年组＞中年组＞少年组＞老年组，差异具有统计学意义。见表2。

表2 鲁西南地区不同年龄段HPV分型分布 例(%)

3 讨论

HPV是闭合双链嗜上皮性DNA 病毒，其基因型种类繁多，目前已经发现130多种HPV型别，不同型别的HPV，其生物学行为及致病能力各不相同，根据不同亚型的HPV与肿瘤发生的危险性高低，分为低危型和高危型。其中，高危型HPV主要与宫颈癌、宫颈上皮内瘤病变和阴茎癌有关；而低危型的HPV主要与外生殖器尖锐湿疣等良性病变有关[3]。近几年研究发现，女性HPV感染与其男性性伴侣的HPV感染也存在一定关系[4]，故男性HPV的感染问题也得到了重视[5]。而HPV的致病性与其分型有密切关系，因此针对HPV的分型检测及其评价具有重要的临床意义。本文采用凯普核酸分子导流杂交分型检测技术对鲁西南地区600例男性患者尿道口标本进行HPV分型检测，统计分析所有受检者HPV分型结果及其特点。

本研究表明：（1）600例男性患者中，检出阳性感染者316例，阳性率52.67%（316/600），表明在本院就诊的男性患者中有超过1/2的感染HPV，感染比例较大；（2）其中单一感染占总阳性率62.34%，双重感染占总阳性率26.26%，三重感染占总阳性率6.65%，四重及以上感染占总阳性率4.75%，说明单一型别的感染和多型别的混合感染共同存在，且以单一型别感染为主，混合型感染为辅，单一型（197例）和混合型（119例）比例为1.65:1。这可能与此次研究的被检人群及其取材部位有关，本研究的取材部位不仅对男性患者尿道口取材，也对其龟头、冠状沟包皮远端黏膜等部位取材；在600例被测样本中，其中皮肤性病科尖锐湿疣患者居多，共有531例，占88.50%，而检测结果中排名前两位的型别是HPV6和HPV11这两种亚型，这与以往报道结果一致[6-7]；（3）本研究中，男性HPV感染出现频率前6位的型别为HPV 6型（98人次），HPV 11型（68人次），HPV 16型（55人次），HPV 52型（32人次），HPV 39型（31人次），HPV 51型（26人次），这6种型别是鲁西南地区男性患者HPV感染出现频率最高的亚型。在HPV各亚型中，高危型的致癌力比低危型高出10倍，故我们在关注和监测HPV低危型别的同时，更应重视HPV16型、52型、39型和51型，相关部门在研发HPV疫苗时，可有所偏重和扩大覆盖范围，这样有针对性的且多价的疫苗接种对减少HPV的传播会起到至关重要的作用[8]；（4）本组316例阳性结果中，低危亚型6型感染最多共98例，占总阳性率31.01%其次以HPV 11，16，52，39，26等亚型为主。这与文献报道的东莞地区[9]（11，6，16，52，58，33）相似。

有研究表明[10]，男性HPV感染与女性性伴侣的HPV感染有一定关系，谢莉莉等也发现[11]被HPV感染的女性其男性性伴也有较高的HPV感染率，且男女感染型别有较高的一致性，说明男性在女性HPV感染过程中充当了“载体”和“桥梁”的作用，因此，对性活跃期的男性进行HPV监控，并对HPV阳性的男性患者予以及时的治疗，对HPV的防控和宫颈 癌的防治具有十分重要的意义。