小体系连续快速批量测定淡水亚硝酸盐氮分光光度法

李嘉敬，韦明肯，卢勇杰，陈心如，邝春议，朱 颖，孙 巍

广东石油化工学院，生物与食品工程学院，广东 茂名 525000

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试剂与仪器材料

福晨(天津)化学试剂有限公司生产的4-氨基苯磺酰胺(分析纯)，天津大茂化学试剂厂生产的N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐(分析纯)、亚硝酸盐钠(分析纯)、高锰酸钾(分析纯)、草酸钠(优级纯)，西陇科学股份有限公司生产的三氯甲烷(分析纯)、磷酸(分析纯)、硫酸(分析纯)。

实验室级超纯水机(南京易普达科技发展有限公司)、酶标仪(BIO-RAD imark酶标仪)、移液枪(Eppendorf艾本德)、移液器枪头(RonMark 荣码)。

1.1.2 试剂配制

显色剂：于100 mL烧杯中加入25 mL纯水，然后移入5 mL磷酸，再加入4 g 4-氨基苯磺酰胺，将0.2 g N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐溶解，转移到100 mL的容量瓶中定容，加纯水稀释到标线，摇匀，贮于一个棕色的试剂玻璃瓶中避光低温2～5 ℃保存。

磷酸：使用15 mol/L(质量浓度1.70 g/mL)磷酸。

高锰酸钾标准溶液(1/5 K2MnO4,0.05 mol/L)：于1 000 mL烧杯中将0.8 g高锰酸钾溶于600 mL的纯水中，再煮沸0.5～1 h，使体积降至500 mL左右，放置一个晚上后，用漏斗过滤，贮于一个棕色的试剂玻璃瓶中避光保存。

草酸钠标准溶液(1/2 Na2C2O4,0.050 mol/L)：于100 mL烧杯中将经烘箱105 ℃烘烧2 h的无水草酸钠(GR)0.335 g溶于75 mL纯水中，转移到100 mL的容量瓶中定容，加纯水稀释到标线，摇匀，贮于玻璃瓶中保存。

亚硝酸盐氮标准贮备液(质量浓度 250 mg/L)：于100 mL 烧杯中将0.123 2 g亚硝酸钠溶于15 mL纯水中，转移到100 mL的容量瓶中定容，加纯水稀释到标线，摇匀，贮于一个棕色的试剂玻璃瓶中避光低温2～5 ℃保存一个月。

硫酸：使用18 mol/mL(质量浓度 1.84 g/mL)硫酸。

1.2 实验设计

1.2.1 反应体系的体积优化设计

1.2.2 小体系反应的显色时间优化设计

1.2.3 小体系反应的显色剂用量优化设计

1.2.4 小体系反应适用的pH范围

1.3 标准工作曲线绘制与样品测定方法

按照国标的测定方法，绘制小体系下分光光度法的标准工作曲线。

2)加入20 μL显色剂，混匀，反应20 min。

3)用1 mL移液枪移0.3 mL待测样液到标准平底96孔酶标板中，放入酶标仪内在540 nm的波长下测定各个待测样液的吸光度(Ab)，记录待测样液的吸光度。

1.4.2 新方法实测环境样品的准确性验证

2 结果与讨论

2.1 小体系测定体积优化

图1 不同体积对测定含量的影响Fig.1 Effect of different volumes ondetermination of content

2.2 小体系测定显色时间优化

图2 不同显色时间对小体系测定含量的影响Fig.2 Effect of different color developmenttime on determination of content in small system

2.3 小体系测定显色剂用量优化

图3 不同显色剂用量对小体系测定含量的影响Fig.3 Effect of different amount of developer ondetermination of content in small system

2.4 pH对小体系反应的影响

图4 不同pH对小体系测定含量的影响Fig.4 Effect of different pH on determination of content in small system

2.6 小体系测定的线性检测范围

图5 小体系与国标法测定含量的线性拟合与正交拟合验证曲线Fig.5 Linear fitting and orthogonal fittingverification curve for determination of content by small system andnational standard method

2.7 样品中实测的准确性验证

图6 小体系快速测定淡水中的浓度范围Fig.6 Concentration range of in freshwater quickly determined by small system

表1 小体系与国标法测定环境样品含量的结果比较Table 1 Comparison of determination results of in environmental samples by small systemand national standard method

3 结论