超高效液相色谱-串联质谱法测定鸡肉中磺胺甲基嘧啶残留量方法优化

李启卉，孙钰莹，钱 琪

（国家轻工业食品质量监督检测南京站，江苏南京 211816）

磺胺类药物是目前被广泛应用于畜禽抗感染治疗的重要药物之一，具有高效、毒性低、便于使用等特点，可预防和治疗一些动物疾病，以促进动物的生长。但若在饲养畜禽过程中不合理使用磺胺类药物，会导致药物在畜禽体内残留，进而对人体产生一定的危害[1-2]。

超高效液相色谱-串联质谱法具有高特异性、良好的检测灵敏度和分析速度快的特点[3]。碰撞反应池的工作原理是产物离子通过向移动的母离子施加额外能量，使母离子与反应池中的惰性气体分子发生碰撞，导致母离子碎裂。因此，形成的产物离子数与碰撞能量大小密切相关。碰撞能量越小，碎片越多，离子越少，形成的产物离子越少；碰撞能量越大，更多的母离子被碎片化，但并非所有的子离子都会更多。由于碰撞能量不同，母离子会碎裂成不同的子离子，碰撞能量越高，碎片离子越多，使其分裂成其他质量数较低的产物离子。设置MRM使用模式获取方法时，需要设置一个最优的碰撞能量，使碰撞池中质量数为265的母离子在裂解后形成质量数为156和172的子离子数量最多。本文通过改变碰撞能量，采用超高效液相色谱-串联质谱法对鸡肉中磺胺甲基嘧啶残留量进行快速测定。

1 材料与方法

1.1 试剂与材料

乙腈（色谱级）；甲酸（色谱级）；乙腈（默克）；超纯水（北京普析-GWA-UN1-F40）；磺胺甲基嘧啶标准品（坛墨公司）。

1.2 仪器

Waters Xevo TQ-S cronos超高效液相色谱-串联质谱仪（沃特世公司）；离心机（上海安亭-GL-20G-Ⅱ）；BSA124S-CW 电子天平[赛多利斯科学仪器（北京）有限公司]；涡旋仪（其林贝尔仪器-Vortex QL-861）；BFAA-DC24-RT加热氮吹仪（上海安谱实验科技股份有限公司）；移液器（艾本德中国有限公司）。

1.3 标准溶液制备

准确吸取100 μL磺胺甲基嘧啶标准品溶液于10 mL容量瓶中，用甲醇配制成浓度为1 μg·mL-1的标准中间液。准确吸取标准中间液10 μL、50 μL、100 μL、200 μL、500 μL、1 000 μL 和 2 000 μL 于10 mL容量瓶中，用含0.1%甲酸的乙腈溶液稀释至刻度，配制成浓度为 1 ng·mL-1、5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、20 ng·mL-1、50 ng·mL-1、100 ng·mL-1和 200 ng·mL-1的系列标准工作溶液。

1.4 样品前处理

称取5 g捣碎的样品于50 mL离心管中，加入10 mL 乙腈，涡旋 3 min，10 000 r·min-1离心3 min。取全部上清液至25 mL容量瓶中，加入10 mL乙腈，重复提取，合并上清液，用乙腈定容至刻度。取5 mL上清液，氮吹近干，用2 mL 0.1%酸化乙腈复溶，过 0.22 μm 滤膜。

1.5 仪器条件

液相条件：ACQUITY UPLC® HSS T3色谱柱；柱温40 ℃；梯度洗脱程序如表1所示。

表1 梯度洗脱条件程序

质谱条件：电喷雾正电离、多反应监测模式；毛细管电压0.5 kV；脱溶剂温度500 ℃；脱溶剂气流量800 L·h-1；锥孔气流量 150 L·h-1；锥孔电压 30 V。

2 结果与分析

2.1 色谱柱的确定

HSS T3色谱柱为亲水性化合物保留专用柱，不仅可增强待测物的保留能力，还可与LC-MS兼容，可耐受100%水相流动相，分离重现性较好。T3是采用三官能团键合技术，低配基密度C18烷基链键合和专利的封端技术，T3对C18色谱柱的稳定性有了更好的提升。

2.2 液相条件的确定

乙腈为非质子溶剂、强洗脱剂，低粘度，截止波长为190 nm。在正离子电喷雾液相色谱-质谱联用分析流动相中添加甲酸，可使溶液中的分析物质离子化，产生更强的电喷雾信号。流动相使用梯度洗脱能增加峰容量，可增强待测物的分离效果，且能缩小峰型，增强分离能力，更有效地缩短分析时间。

2.3 质谱条件的确定

电喷雾电离是液体从导电毛细管喷出，毛细管加高电压，从而产生带电液滴的喷雾，液滴蒸发、分裂直至离子蒸发称气相离子。正离子喷雾是电喷雾液滴从毛细管出来时带正电荷，为了平衡正电流，毛细管也生成了电子，由靠近毛细管壁表面的负离子发生电化学氧化，产生电子，电喷雾可被理解成电化学过程。由图1可知，碰撞能量在15 V下，磺胺甲基嘧啶物质的响应最高，峰面积最大。

图1 不同碰撞能量下鸡肉中磺胺甲基嘧啶色谱图

2.4 方法线性范围及定量限

当鸡肉样品量为5 g、最终定容体积为10 mL时，根据定量限为10倍信噪比，从而确定本方法中磺胺甲基嘧啶的定量限为1.0 μg·kg-1。制作好系列标准曲线后，按此方法进行测定，以浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准工作曲线，线性图谱如图2所示。结果表明，磺胺甲基嘧啶在浓度1～200 ng·mL-1，与峰面积有较好的线性关系，相关系数R2＞0.99。

图2 鸡肉中磺胺甲基嘧啶校准曲线

2.5 方法加标回收率

选择3个阴性鸡肉样品，添加70 μg·kg-1的磺胺甲基嘧啶标准物，按照本实验前处理方法进行实验。通过改变碰撞能量测定样品中磺胺甲基嘧啶的含量。磺胺类药物的回收率如表2所示。

表2 不同碰撞能量下样品回收率

当碰撞能量为5 V时，回收率为70.5%～75.0%；当碰撞能量为15 V时，回收率为93.3%～99.1%；当碰撞能量为40 V时，回收率为77.9%～79.2%；当碰撞能量为50 V时，回收率为81.7%～84.9%。由此可得出，在其他条件不变时，不同碰撞能量下，样品回收率也不同，在碰撞能量为15 V时，回收率最好。

3 结论

本实验通过改变质谱条件，运用超高效液相色谱-串联质谱法分析鸡肉中磺胺甲基嘧啶残留量。结果表明，鸡肉中磺胺甲基嘧啶在1～200 ng·mL-1线性良好，定量限为1.0 μg·kg-1。通过改变碰撞能量，得出鸡肉样品在碰撞能量为15 V时，回收率最好，为93.3%～99.1%。由此可得出，在其他条件不变时，当碰撞能量为15 V时，鸡肉中磺胺甲基嘧啶响应最好。本方法前处理较为简单，定量限较低，适用于鸡肉中磺胺甲基嘧啶残留量的快速测定[4-5]。