外周血长链非编码RNA在不同病程2型糖尿病患者的表达及与胰岛β细胞功能的相关性

梁 健，刘 强，陈 燕，胡玉花，洪芸芸，张 燕 (珠海市第五人民医院内分泌科，广东 珠海 519055)

糖尿病作为一种慢性代谢性疾病，根据发病原因的不同可以分为1型糖尿病与2型糖尿病，其中2型糖尿病在全部糖尿病患者中占比超过90%，为最常见的糖尿病类型。2型糖尿病发生、发展的机制较为复杂，且早期症状较为隐匿，机体长时间处于高血糖环境中，进而促进冠心病、糖尿病肾病等多种并发症的发生，影响患者生活质量及生命健康[1]。随着科学技术的发展，众多研究发现2型糖尿病的发生、发展可能是由于相关基因表达异常造成胰岛功能异常，诱导相关信号通路功能发生变化，进而造成疾病的发展[2-3]。长链非编码RNA(LncRNAs)是一种功能性长链RNA分子，广泛参与了心脑血管疾病、糖尿病等多种病理及生理过程的发展[4]。此外，相关研究表明[5]，LncRNAs与胰岛β细胞的增殖、发育以及胰岛素的分泌具有重要关系，其可能参与胰岛的分化发育过程。但关于LncRNAs表达水平与胰岛β细胞功能的关系上不明确，本研究旨在探讨 外周血LncRNAs在不同病程2型糖尿病患者的表达及胰岛β细胞功能的相关关系。

1 资料与方法

1.1一般资料：随机选取2020年11月-2021年11月在我院住院治疗的2型糖尿病患者作为研究对象，根据患者2型糖尿病病程的不同分为<1年组24例，1～5年组18例，6～10年组20例，11～20年组24例。入组标准：①所有患者均符合关于2型糖尿病的相关诊断标准[6]，空腹血糖超过7.0 mmol/L或连续3次随机测量血糖超过11.1 mmol/L；②参与研究前8 w内未更换控制血糖的药物；③患者生活均可自理，执行力和理解力良好；④尊重患者的知情权，且患者签订知情同意书；⑤本研究通过本院伦理委员会审核批准。排除标准：①患者伴有精神疾病史或精神障碍性疾病；②患者存在乙肝、艾滋病等严重感染性疾病；③患者为1型糖尿病患者；④患者伴有甲状腺功能亢进或其他恶性肿瘤疾病；⑤妊娠期或哺乳期患者。选取同时期在本院进行健康体检的25例健康受检者作为对照组。

1.2实时荧光定量(PCR)法：所有研究对象均抽取晨起空腹肘正中静脉血3 ml，静置，加入细胞裂解液充分裂解，使用低温高速离心法以4 500 r/min在4℃条件下进行离心，取上层清液，分别加入适量氯仿、异丙醇，混匀、静置、离心，去除上清液，加入75%乙醇2 ml及适量磷酸盐缓冲液，离心，使用Trizol试剂盒提取RNA，使用分光光度计检测RNA纯度。配置反转录体系，使用Promega M-MLV试剂盒进行反转录，取6 μl，加入Total RNA直至最终反应体积为20 μl，合成cRNA，经反转录生成cDNA，在20 μl体系中使用基因扩增PCR仪以cDNA为模板，以GAPDH为内参进行扩增，根据目标基因合成引物(见表1)，所有步骤均严格按照操作说明书进行操作，每个样本设置至少3个对照，多次检测取平均值。以2-△△Ct进行计算分析。

表1 引物序列

1.3观察指标：①临床基本资料收集：收集所有研究对象临床基本资料，包括年龄、性别、体重指数(BMI)、血压、吸烟史、饮酒史 等。②外周血LncRNA TUG1、LncRNA MALAT1表达水平检测：采用PCR法检测各组外周血LncRNA TUG1、LncRNA MALAT1表达水平并进行记录对比。③胰岛β细胞功能相关指标检测：采用血糖仪检测所有研究对象空腹血糖(FBG)水平，采用高效液相层分析法检测糖化血红蛋白(HbA1c)水平，采用放射免疫法检测各组空腹胰岛素(FINS)含量，采用公式计算胰岛素功能指数(HOMA-β)变化。④相关性分析：采用Pearson相关性检验分析外周血LncRNA TUG1、LncRNA MALAT1与胰岛β细胞功能相关关系。

2 结果

2.1各组基本资料比较：对照组、<1年组、1～5年组、6～10年组及11～20年组年龄、性别、血压、BMI、吸烟史、饮酒史等基本资料对比差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 各组基本资料比较[n(%)]

2.2各组外周血LncRNA TUG1、LncRNA MALAT1表达水平对比：与对照组比较，<1年组、1～5年组、6～10年组及11～20年组患者外周血LncRNA TUG1、LncRNA MALAT1表达水平均明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)；与<1年组比较，随着2型糖尿病患者病程的延长，外周血LncRNA TUG1、LncRNA MALAT1表达水平均逐渐升高。见表3。

表3 各组外周血LncRNA TUG1、LncRNA MALAT1表达水平对比

2.3各组胰岛β细胞功能相关指标对比：与对照组比较，<1年组、1～5年组、6～10年组及11～20年组患者FBG、HbA1c表达水平均明显升高，FINS、HOMA-β水平均明显降低，差异均有统计学意义(P<0.05)；与<1年组比较，随着2型糖尿病患者病程的延长，FINS、HbA1c、HOMA-β表达水平均逐渐降低，FBG水平逐渐升高。见表4。

表4 各组胰岛β细胞功能相关指标对比

2.4外周血LncRNA TUG1、LncRNA MALAT1与胰岛β细胞功能相关性分析：经Pearson相关性检验分析，外周血LncRNA TUG1、LncRNA MALAT1与FINS、HbA1c、HOMA-β呈明显负相关，与FBG呈明显正相关(P<0.05)。见表5。

表5 外周血LncRNA TUG1、LncRNA MALAT1与胰岛β细胞功能相关性分析

3 讨论

糖尿病是一种由多种因素造成的疾病，我国糖尿病患者主要以2型糖尿病为主。随着人们生活水平的提高及饮食习惯的改变，2型糖尿病的发病率呈逐年升高趋势。随着医学科技的不断发展，临床上对于糖尿病的治疗已取得重要进步，但在基因层面上仍具有一定限制。糖尿病发病人数的增加及病情的不断发展，不仅对患者的生活质量甚至生命健康造成了严重威胁，也对患者家庭及社会造成了巨大负担。因此，深入探讨糖尿病的调控机制，延缓疾病发展进程，降低并发症发生情况具有重要作用。

LncRNAs作为一种长链非编码RNA，其能够在表观遗传水平、转录水平及转录后水平等多种层面调控基因表达，进而广泛参与机体各种病理生理过程[7]。胰腺是一种弥散性器官，也是调节全身葡萄糖稳态的重要器官。胰岛β细胞为机体中唯一能够分泌胰岛素的细胞，研究表明[8]，2型糖尿病发生、发展的主要环节可能为由于胰岛β细胞功能缺陷造成的不同程度的胰岛素缺乏及胰岛素抵抗。胰岛β细胞功能出现障碍时，机体胰岛素分泌不足，造成胰岛β细胞数量减少，进一步促进了2型糖尿病的发生[9]。近年来有研究发现[10]，LncRNAs与糖尿病的发生具有一定关系，其可能通过影响胰腺发育、胰岛细胞功能以及胰腺外组织的糖代谢等从而对糖尿病的发生发展起到一定影响。本研究中通过检测不同病程患者外周血LncRNA TUG1、LncRNA MALAT1及胰岛β细胞功能的变化，结果发现，随着2型糖尿病患者病程的延长，外周血LncRNA TUG1、LncRNA MALAT1、FBG表达水平均逐渐升高，FINS、HbA1c、HOMA-β表达水平均逐渐降低。外周血LncRNA TUG1、LncRNA MALAT1及胰岛β细胞功能与2型糖尿病病程具有密切关系，这可能是因为随着患者病程的发展，胰岛β细胞负荷加重，机体血糖动态失衡，进而影响LncRNA TUG1、LncRNA MALAT1的表达[11]。此外，本研究结果发现，外周血LncRNA TUG1、LncRNA MALAT1与胰岛β功能具有相关性，均可作为反应患者病情的重要指标。

综上所述，随着病程的延长，外周血LncRNA TUG1、LncRNA MALAT1及胰岛β细胞功能出现变化，且外周血LncRNA TUG1、LncRNA MALAT1与胰岛β功能具有一定相关性。