荧光偏振测定法在布鲁氏菌病抗体检测中的应用

王玉恒，吉哈利，于子淇，旦增卓玛

（1.西藏自治区兽医生物药品制造厂，西藏 拉萨 850000；2.西藏莲茎生物科技有限公司，西藏 拉萨 850000）

布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的一种以流产和发热为主要临床特征的人畜共患病，以牛、羊、猪等家畜最易感染[1-2]。该病具有传染速度快、感染范围大等特点，给人类身体健康和畜牧业可持续发展带来严重威胁[3-4]。世界动物卫生组织（OIE）将其列为B类动物疫病，我国将其列为二类动物疫病。目前，布鲁氏菌病的防控形势依然十分严峻，前期抗体检测是防控的关键环节[5-6]。

荧光偏振抗体检测法（FPA）是检测布鲁氏菌病抗体的常用方法[7-8]。其原理是以分子旋转特性为基础，利用荧光偏振仪测量抗原与抗体结合后的旋转速率，从而判定血清样品中是否含有布鲁氏菌病抗体[9-10]。目前，该检测技术备受科研者及检疫人员关注，已广泛应用于药学[11-12]、生物学[13-14]、医学[15-16]及动物医学[17-18]等学科。但FPA测定法用于牦牛布鲁氏菌病抗体检测的研究鲜见报道。因此，本研究利用FPA测定法对129份牦牛血清进行布鲁氏菌病抗体检测，并与试管凝集试验（SAT）进行数据比对，从而分析评价FPA测定法的性能，为布鲁氏菌病抗体检测提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 血清 选取129 份牦牛血清样品，置于西藏莲茎生物科技有限公司检测中心-20 ℃保存。

1.1.2 主要试剂 布鲁氏菌病荧光偏振抗体检测试剂盒，采购于哈尔滨平河生物技术有限公司，批号20211106；试管凝集试验（SAT）阳性标准、阴性标准及抗原，均购于中国兽医药品监察所，批号20210716。

1.1.3 主要仪器 布鲁氏菌荧光偏振检测仪（哈尔滨平河生物技术有限公司，FLUPO），恒温培养箱（上海鸿都电子科技有限公司，SHP-300），高速冷冻离心机（湖南星科科学仪器有限公司，TGL16），微量振荡器（海门市麒麟医用仪器厂，MH-2），生物安全柜（苏州安泰空气技术有限公司，BSC-04B2），其他耗材均为国产。

1.2 检测方法

1.2.1 试管凝集试验 按照GB/T 18646-2018《动物布鲁氏菌病诊断技术》进行操作及结果判定。

1.2.2 荧光偏振测定法 严格按照试剂盒说明书进行操作，取硼硅玻璃试管加入1 ml样品稀释液，再加入10 μl待检牛血清样品，充分振荡混匀，测定样品空白密度值；加入10 μl的FPA标记抗原，充分振荡混匀，测定样品毫偏振值。在阳性标准、阴性标准成立的条件下，样品毫偏振值＜95为阴性，96～116为可疑，＞116为阳性。

1.3 数据统计及分析

采用Microsoft Excel 2010版软件中四格表法（表1）对FPA测定法与SAT试验法的数据进行比较分析。

表1 评价诊断试验的四格表法

2 结果与分析

采用荧光偏振抗体检测法与试管凝集试验对129份牦牛血清样品进行布氏杆菌病抗体检测。由表2可知，试管凝集试验筛选出51份抗体阴性样品和78份抗体阳性样品，而荧光偏振抗体检测法筛选出41份抗体阴性样品和88份抗体阳性样品。

表2 荧光偏振测定法检测结果

以试管凝集试验数据为参照，对荧光偏振抗体检测法测定结果进行分析。由表3可知，荧光偏振抗体检测法敏感性（100.00%）、特异性（80.39%）、符合率（92.25%）和约登指数（80.39%）较高，表明其诊断准确性较好；阴性似然比值（0.00）和阴性预测值（100.00%）表明检测结果阴性时为真阴性的概率高；阳性似然比值（5.10）和阳性预测值（88.64%）表明检测结果阳性时存在假阳性的可能性。

表3 数据分析表

3 讨论

目前，布鲁氏菌病常规实验室检测方法有血清学和细菌学，但细菌学检测对实验室的生物安全要求条件高并存在一定安全隐患，因此布鲁氏菌病常规检测技术为凝集反应、补体结合、沉淀反应、酶联免疫吸附试验以及荧光偏振检测方法等血清学方法[8]。2001年Nielsen和Gall根据荧光偏振原理建立了一种适用于布鲁氏菌病检测的FPA技术[9]。因FPA技术具有简便、客观、快速等优点，得到了国内外学者的广泛研究[10-18]。OIE《陆生动物诊断试验和疫苗手册》将FPA技术指定为国际贸易试验方法，我国也将FPA技术纳入《2020年国家动物疫病监测与流行病学调查计划》。采用试管凝集试验和荧光偏振抗体检测法对129份牦牛血清样品进行布氏杆菌病抗体检测，结果显示试管凝集试验筛选出51份抗体阴性样品和78份抗体阳性样品，而荧光偏振抗体检测法筛选出41份抗体阴性样品和88份抗体阳性样品。再根据试验结果进行数据分析，结果显示荧光偏振抗体检测法的敏感性和阴性预测值均为100%，符合率达90%以上，特异性和约登指数均达80%以上，与任燕斌[19]、孙翠丽[20]研究结果基本一致，进一步表明荧光偏振抗体检测法适用于牦牛血清的布鲁氏菌病抗体检测，且诊断准确性较高。