生当归水煎液对血虚小鼠体重、脏器指数及葡萄糖-6-磷酸脱氢酶含量的影响

孙万奎，胡 冰

(凉州区畜牧兽医技术推广中心，甘肃 武威 733000)

本试验选取乙酰苯肼和环磷酰胺联合造模的方法，通过测定不同组小鼠给药前后体重、胸腺指数、脾指数及全血中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的含量，进而分析生当归水煎液的补血作用及其作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料

当归由甘肃中医药大学提供。

1.2 药物、试剂

环磷酰胺(注射型)、乙酰苯肼、山东阿胶浆、双蒸水、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶试剂盒(南京建成)等。

1.3 实验器械与仪器

小鼠代谢笼、剖检常用器械、血细胞全自动分析仪、超声波清洗机、旋转蒸发仪、分析天平、电热套、离心机、烧杯、圆底烧瓶、电子天平、冰箱(海尔)、移液枪等。

1.4 动物

清洁级雄性昆明小鼠80只，每组20只，体重20±2 g，由甘肃中医药大学提供。

2 实验方法

2.1 当归水煎液的制备

生当归25 g，加入2倍蒸馏水，浸泡2 h，然后加热煮沸2次，1 h/次，混合两次水煎液，纱布过滤，旋转蒸发仪浓缩为0.5 g生药/mL，即浓缩到50 mL。

按此方法制备150 mL水煎液。

2.2 分组与造模

实验小鼠随机分为4组：正常对照组、阳性对照组(0.4 mL/20 g，每隔24 h灌阿胶浆1次)、模型组、生当归水煎液组，每组20只小鼠。生当归水煎液组剂量均为10 g/kg(按生药量计算，每日一次，每只小鼠早上灌胃0.4 mL)，模型组小鼠和正常对照组均灌给相同量的蒸馏水，每24 h一次，连续9 d。模型组、阳性对照组、生当归水煎液组在灌药的第2天和第5天注射(皮下)乙酰苯肼生理盐水溶液20 mg/kg、40 mg/kg，从第5天起,每天注射(腹腔)环磷酰胺生理盐水溶液40 mg/kg，连续注射(腹腔)4 d。正常对照组同时注射相同量的生理盐水。

2.3 血液的采集、检测及免疫机能的检测

2.3.1 血液的采集 各组于最后一次给药24 h后，摘除眼球取血同时收集血液，并在标记后按照葡萄糖-6-磷酸脱氢酶试剂盒进行检测。

2.3.2 血液中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶试剂盒检测 血液在标记后按照葡萄糖-6-磷酸脱氢酶试剂盒进行检测。

2.3.3 免疫器官的采集及机能检测 小鼠用脱颈椎法处死，然后采集脾脏和胸腺并称取重量，计算脾脏指数和胸腺指数，脾脏指数=脾重(mg)/鼠重(g)×10；胸腺指数=胸腺重(mg)/鼠重(g)×10。

2.3.4 数据处理 用Spss17.0统计软件对实验数据进行方差分析，各组数据结果以均数±标准差(±s)表示，比较各组间差异的显著性。

3 结果与分析

3.1 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶结果及分析

按上述方法测定其葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的含量，结果见表1，图1。从表1、图1可以看出，与正常组比较，模型组高铁血红蛋白还原率明显降低，具有显著差异(P<0.05)，而正常血红蛋白是亚铁血红蛋白，可被氧化成为高铁血红蛋白，当G-6-PD的含量正常时，通过戊糖旁路形成的NADPH可作为辅酶，在递氢体参与下，高铁血红蛋白被还原成血红蛋白。但红细胞内缺少G-6-PD时，高铁血红蛋白不能被还原，由此可以说明环磷酰胺和乙酰苯肼损伤小鼠血液系统较明显，使得小鼠血虚，进一步说明血虚小鼠建模是正确的。相比较模型组，阳性对照组与生当归水煎液组小鼠的高铁血红蛋白还原率明显升高，特别是生当归水煎液组具有统计学显著差异(P<0.05)，表明生当归水煎液可以显著改善乙酰苯肼和环磷酰胺对小鼠血液的破坏作用，具有一定的补血功效。

表1 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶检测结果

图1 高铁血红蛋白还原率

3.2 不同组小鼠的体重和脏器指数的结果

从表2、图 2可知，在联合造模之后，模型组、阳性对照组、生当归水煎液组的小鼠都出现了不同程度的血虚证，外观表现为：精神不振，聚堆不愿走动，乏力疲倦，食欲减退，被毛无光泽，耳部皮肤苍白，小鼠血虚证表现最明显的为模型组，随给药天数的增加，模型组小鼠恢复较慢，其它两组逐渐恢复，回复较明显的为生当归水煎液组。由表3可见，模型组小鼠体重、胸腺指数、脾指数降低，与正常组比较差异具有统计学意义(P<0.05)，表明小鼠血虚模型建立成功;相比较模型组，阳性对照组和生当归水煎液组小鼠体重、胸腺指数、脾指数升高，有统计学差异(P<0.05)，表明生当归水煎液可以改善血虚小鼠体重及免疫器官功能的损伤作用。

表2 各组小鼠体重、胸腺指数、脾脏指数检测结果

图2 各组小鼠体重、胸腺指数、脾脏指数检测结果

4 讨论

近年来，关于血虚证动物模型研究较多，造模方法也各不相同 。实验中小鼠给予环磷酰胺和乙酰苯肼联合造模后，模型组、阳性对照组、生当归水煎液组的恢复主观情况，即小鼠的外观表现、进食和皮毛色泽等，客观情况，即生化指标分析表现不同，证明小鼠血虚模型在此次实验中建立成功。正常情况下，高铁血红蛋白可以被还原为血红蛋白。但红细胞内G-6-PD缺少时，则不能被还原。本实验显示血虚小鼠的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶含量显著升高，从而显示小鼠体内的高铁血红蛋白显著降低，而血红蛋白含量显著升高，由此表明生当归水煎液的补血机制可能与提高血红蛋白的含量有关。

胸腺和脾脏都是重要的免疫器官，在免疫系统中发挥着重要作用，笔者以小鼠胸腺、脾脏作为免疫器官的试验指标，研究生当归水煎液对小鼠机体免疫功能的影响。结果表明生当归水煎液可以使血虚小鼠的胸腺、脾脏指数提高，并对小鼠的胸腺和脾脏的免疫活性有增强作用，对免疫抑制的血虚小鼠的免疫力有改善作用，可见还有增强机体的免疫的功能。

综上所述，生当归水煎液对血虚小鼠具有一定的补血作用，其补血机制可能与提高血红蛋白的含量有关；同时，它还可能增强机体免疫机能。