Finkler超声评分联合LMTK2基因在诊断上皮性卵巢癌中的应用

范方裕， 蒲英梅， 周柱玉， 辛艳芬， 夏纪筑

1. 西南医科大学临床医学院， 四川泸州 646000； 2. 德阳市人民医院超声科， 四川 德阳 618000

卵巢癌(OC)是一种致命的妇科癌症，全世界每年有23万名妇女确诊，15万人死亡[1]。卵巢癌是世界上第7种最常见的确诊癌症，确诊后5年存活率为46%[2]，造成高死亡率的主要因素之一是确诊时疾病处于晚期。晚期患者的5年相对存活率为29%，而早期患者的相对存活率为92%[3]。上皮性卵巢癌(EOC)是主要的卵巢癌类型(85%)，上皮性卵巢癌的症状没有特异性，包括腹胀、恶心、肠功能改变、尿路症状、背痛、疲劳和体重减轻，这些症状通常在确诊前几个月出现[4]。由于上皮性卵巢癌的无特异性症状性质，大约75%的患者在晚期被诊断出来[5]。因此，制定有效的EOC早期诊断手段对患者的治疗和预后改善具有重要意义。影像学检查联合实验室血清肿瘤标志物被肿瘤研究工作者关注。目前，由于超声具有无创、易操作、可重复等优势已经成为EOC的常规检查方法[1]，基于超声二维图像制定的Finkler超声评分在诊断EOC方面具有较高的价值[6,7]，而Finkler超声评分与其他生物标志物的联合诊断可有效提高EOC的早期诊断准确性[8]。多项研究报道，EOC的基因组易感性直接决定癌细胞功能，从而影响EOC的进展。狐猴酪氨酸激酶2(LMTK2)属于蛋白激酶和酪氨酸激酶家族，LMTK2调控细胞内转运、神经生长因子信号转导、细胞凋亡等多种关键的细胞事件[9]。2019年，Lalremmawia等[10]曾报道LMTK2在卵巢癌中上调，并且可能与患者生存期相关。因此，本研究考察Finkler超声评分联合LMTK2基因在EOC诊断中的价值，旨在进一步优化EOC的早期诊断手段。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本研究共纳入2019年1月至2022年1月期间在本院经术后病理证实且接受治疗的EOC患者112例(EOC组)，年龄25～77岁，平均年龄(46.18±7.86)岁，其中包括黏液性癌36例、浆液性癌42例、透明细胞癌22例、混合上皮性癌12例。根据FICO病理分期标准对患者进行分期：Ⅰ期32例、Ⅱ期36例、Ⅲ期27例、Ⅳ期17例。同时，将76例在本院经术后病理证实且接受治疗的卵巢良性上皮性肿瘤患者纳入良性组，年龄22～73岁，平均年龄(45.43±8.04)岁，其中，黏液性囊腺瘤25例、浆液性囊腺瘤21例、纤维瘤17例、炎性包块13例。两组患者基线资料具有可比性。纳入标准：术后病理证实病变类型；入院前未接受过妇科手术治疗；病历资料完整；患者知情同意。排除标准：合并其他部位的恶性肿瘤；心肝肾功能障碍；病历资料缺失。

1.2 方法

1.2.1超声检查及Finkler超声评分

使用三星HS70A彩色多普勒超声诊断仪，进行经腹部、阴道超声检查，探头频率分别为3.5 Hz(C5-1探头)和7.5 Hz(C10-3探头)。腹部检查前嘱咐患者饮水充盈膀胱，取平卧位对子宫附件进行检查，观察肿瘤位置、形状、大小、边界、内部回声、盆腔积液等。阴道检查时嘱咐患者排空膀胱，取截石位观察肿瘤周边及内部血管形态、血流分布。根据Finkler超声评分法[11]对肿瘤进行评分。

1.2.2RT-PCR法检测血清LMTK2水平

术前抽取患者空腹静脉血5 mL于试管中，室温下静置30 min后4 ℃离心(3000 r/min，15 min)。使用RNeasy Mini试剂盒(货号74104，美国Qiagen)分离总RNA，并使用High Capacity RNA-to-cDNA反转录试剂(货号4489328C，美国Thermo Fisher Scientific)将其转化为互补DNA(cDNA)。使用含有引物的PowerUp SYBR Green Master Mix(货号A25742，美国Applied Biosystems)在ABI Quantstudio 6 Real-Time PCR System上进行RT-PCR。引物序列如下：LMTK2：正向5′-CCGAACACAAACAGCAGAGA-3′，反向5′-GCCTCCCAGACATACTCGAA-3′；GAPDH：正向5′-CCATCTTCCAGGAGCGAGATC-3′，反向5′-GCCTTCTCCATGGTGGTGAA-3′。PCR扩增程序如下：95 ℃ 10 min，95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，40个循环。甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)用作内部对照。使用Quantity One软件对凝胶条带进行半定量分析，LMTKmRNA的相对表达量=LMTK的灰度值/GAPDH的灰度值。

1.3 统计分析

2 结果

2.1 良性组及EOC组的Finkler超声评分和血清LMTK2 mRNA相对表达量比较

表1显示，EOC组的Finkler超声评分和血清LMTK2mRNA相对表达量显著高于良性组(P<0.001)。

表1 良性组和EOC组的Finkler超声评分和血清LMTK2 mRNA相对表达量结果

2.2 Finkler超声评分和血清LMTK2 mRNA相对表达量之间的相关性

相关性分析显示(图1)，Finkler超声评分和血清LMTK2mRNA相对表达量显著正相关(r=0.563，P<0.001)。

图1 Finkler超声评分和血清LMTK2 mRNA相对表达量之间的相关性

2.3 Finkler超声评分联合血清LMTK2诊断EOC的价值

ROC曲线见图2。Finkler超声评分诊断EOC的曲线下面积(AUC)为0.964，敏感性为83.93%，特异性为98.68%；血清LMTK2mRNA相对表达量诊断EOC的AUC为0.907，敏感性为84.82%，特异性为90.79%。二者联合诊断EOC的AUC为0.986，敏感性为94.64%，特异性为97.37%(P<0.001)。

图2 Finkler超声评分、血清LMTK2及二者联合诊断EOC的ROC曲线

2.4 Ⅰ～Ⅱ期组和Ⅲ～Ⅳ期组的Finkler超声评分与血清LMTK2比较

Ⅲ～Ⅳ期组的Finkler超声评分和血清LMTK2mRNA相对表达量显著高于Ⅰ～Ⅱ期组(P<0.05)。见表2。

表2 Ⅰ～Ⅱ期组和Ⅲ～Ⅳ期组的Finkler超声评分和血清LMTK2 mRNA相对表达量结果

2.5 Finkler超声评分联合血清LMTK2诊断Ⅲ～Ⅳ期的价值分析

ROC曲线见图3。Finkler超声评分诊断Ⅲ～Ⅳ期的AUC为0.643，敏感性为61.36%，特异性为61.76%；血清LMTK2mRNA诊断Ⅲ～Ⅳ期的AUC为0.850，敏感性为72.73%，特异性为91.18%。二者联合诊断Ⅲ～Ⅳ期的AUC为0.851，敏感性为68.18%，特异性为91.18%。

图3 Finkler超声评分、血清LMTK2及二者联合诊断Ⅲ～Ⅳ期的ROC曲线

3 讨论

近年来，随着癌症治疗手段的进步，患者的存活率也在不断提高[12]。然而，OC患者的存活率几十年来变化不大，确诊后5年仍保持在46%[13]。目前，OC已成为第七大常见癌症，第八大女性癌症死亡原因，以及第二大妇科癌症死亡原因(仅次于宫颈癌)[14]，每6名女性中就有1人在确诊后的前90 d内死亡[13]。这些令人沮丧的数字部分是由于缺乏OC早期有效筛查方案[15,16]。目前，超声已经广泛应用于EOC的早期筛查中，并且因其无创、经济、对肿瘤特征、血流特征、腹腔积液的有效显现使其成为EOC筛查的主要影像学设备。钱林华等[17]报道，Finkler超声评分诊断早期OC的敏感性和特异性分别为88.1%和87.9%，李海鹏等[8]报道，Finkler超声评分诊断EOC的敏感性和特异性分别为78.13%和80.00%，这些研究结果证实了Finkler超声评分在OC中的诊断价值。本研究中，当Finkler超声评分>5时，诊断EOC的敏感性和特异性分别为83.93%和98.68%，不同文献之间的差异可能与患者样本数及主观判断差异有关。

本研究检测了卵巢良性上皮性肿瘤患者(良性组)和EOC患者的血清LMTK2mRNA水平。多项研究显示，LMTK2在某些癌症中发生突变[18]。前列腺癌组织中的LMTK2mRNA和蛋白表达水平显著降低，在前列腺癌细胞系LNCaP中敲除LMTK2增加了雄激素反应基因的转录。此外，LMTK2敲除导致LNCaP细胞中前列腺癌干细胞群和致瘤性增加[19]。LMTK2正向调控NF-κB的活力，可促进结肠癌细胞的增殖[20]。最近的文献研究表明LMTK2在OC组织中异常高表达，并且可能用于预测患者的生存期[10]。本研究显示，EOC患者的血清LMTK2mRNA水平显著高于卵巢良性上皮性肿瘤患者，并且Finkler超声评分和血清LMTK2mRNA相对表达量显著正相关。进一步分析发现，血清LMTK2mRNA诊断EOC的AUC为0.907、敏感性为84.82%、特异性为90.79%，表明其对EOC具有较高的诊断价值。

为了进一步提高EOC的早期诊断准确性，本研究考察了Finkler超声评分联合血清LMTK2诊断EOC的价值，结果显示，Finkler超声评分联合血清LMTK2诊断EOC的AUC和敏感性高于单独诊断，表明联合诊断可提高EOC诊断的敏感性，然而，临床应用中还应该结合超声影像特征来综合作出诊断。本研究进一步考察了Finkler超声评分和血清LMTK2与病理分期的关系，研究发现，Finkler超声评分和血清LMTK2mRNA相对表达量随着病理分期的升高而升高。当Finkler超声评分>7时，诊断Ⅲ～Ⅳ期的价值较低，AUC仅为0.643。然而，当血清LMTK2mRNA相对表达量>0.692时，诊断Ⅲ～Ⅳ期的AUC为0.850，敏感度和特异度均高于Finkler超声评分，血清LMTK2对病理分期的诊断价值可能高于Finkler超声评分，这可能与LMTK2对癌细胞的增殖、致瘤性及癌症发生相关信号通路的调节有关[19,20]。此外，二者联合诊断并未显著提高对Ⅲ～Ⅳ期的诊断价值。

综上所述，在EOC的早期诊断中，与单独诊断相比，Finkler超声评分联合血清LMTK2可有效提高诊断灵敏度，并且血清LMTK2对病理分期的诊断价值可能高于Finkler超声评分。因此，Finkler超声评分联合血清LMTK2在EOC的早期诊断中有较高的潜在临床应用前景。