rhIL-2联合冷冻疗法对子宫颈炎合并HPV感染患者免疫功能、氧化应激的影响

张裕龙 张裕斌 姜俊敏

HPV 作为双链DNA 病毒，是诱发女性子宫颈癌及癌前病变的主要危险因素，主要表现为白带异常、性交痛等，且极易复发，对患者身心健康及生活质量产生严重影响[1]。目前，现代医学治疗HPV尚未完全明确。冷冻疗法作为临床常见手段，其主要利用制冷剂快速产生的低温对宫颈病变组织局部的血液循环产生阻滞，从而促进组织修复。而西药作为临床主要治疗手段，其疗效表现不一[2-3]。注射用重组人白介素-2（rhIL-2）作为常用药物可有效促进淋巴细胞生长、分化，具有良好抗病毒感染作用，在改善HPV 感染方面发挥显著效果。但有研究指出，单一治疗方案虽可有效改善患者症状，但仍有部分患者难以达到预期疗效，为进一步提高治疗效果，多考虑联合治疗方案[4-5]。本研究通过rhIL-2 结合冷冻疗法治疗HPV 感染患者，研究其对氧化应激、炎症因子水平的影响，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2020 年1-12 月泰和县中医院收治的97 例子宫颈炎合并HPV 感染患者。纳入标准：（1）符合文献[6]《HPV 感染疾病相关问题专家共识（2017）》中相关诊断标准，阴道B 超、细胞学及病理活检等检查确诊为子宫颈炎合并HPV 感染；（2）存在接触性出血、白带异常等症状；（3）高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）为阳性。排除标准：（1）心肾等器质性功能不全；（2）合并子宫颈异常出血、子宫颈上皮内瘤变；（3）合并子宫内膜或子宫颈恶性病变；（4）妊娠期、哺乳期妇女；（5）合并免疫缺陷类疾病；（6）近1 个月接受过相关治疗；（7）对本研究药物存在禁忌证。使用随机数字表法将患者分为对照组48 例和观察组49 例。本研究经医院伦理委员会批准，严格遵循伦理原则，患者及其家属知情同意。

1.2 方法 对照组采用单纯冷冻疗法（ErbokoCA多功能冷冻治疗仪）治疗，于月经周期结束后3 d接受治疗。根据病变范围及深度确定不同型号的探头，探头消毒，将探头面覆盖病灶，通电制冷后接触宫颈，使用CO2气体冷冻病灶组织表面。治疗时需将冷冻探头接触子宫颈2 次，3 min/次，间隔5 min 施以解冻，1 次/月。观察组给予冷冻疗法联合rhIL-2（生产厂家：北京四环生物制药有限公司，批准文号：国药准字S10970017，规格：20 万IU）治疗，将100 万U 注射用rhIL-2 结合2 mL 灭菌注射用水，经皮下注射给药，1～2 次/周。冷冻疗法同对照组。两组均连续治疗2 个月。

1.3 观察指标及判定标准

1.3.1 比较两组治疗前后临床体征评分 包括阴道分泌物异常、子宫颈炎症深度、子宫颈炎症面积。阴道分泌物异常：阴道分泌物白带正常颜色为白色、透明且无异味，而子宫颈炎患者的白带为有颜色或有异味。子宫颈炎症深度：根据患者炎症沿阔韧带底部蔓延深度判断子宫颈炎症深度。子宫颈炎症面积：根据患者炎症沿子宫骶韧带扩展范围判断子宫颈炎症面积。根据患者临床特征的严重程度进行打分，每项评分的范围为0～5 分，评分越低，说明症状越轻，表示患者经治疗后不良体征的改善情况越好，治疗效果越好。

1.3.2 比较两组疾病转归情况 包括HPV-DNA 载量和转阴情况。HPV-DNA 载量测定：以无菌棉拭子于子宫颈管内旋转停留几秒后取出，以1 mL 无菌生理盐水洗脱，提取细胞总RNA，对其含量、纯度进行检测，逆转录处理后获得cDNA，使用Primer 5.0 软件设计引物，采用2-△△Ct方法计算，内参U6。设置反转录反应条件：25 ℃ 10 min，40 ℃60 min，85 ℃ 5 min；设置扩增条件：94 ℃ 20 s、72 ℃30 s、60 ℃ 30 s，35个循环。RLU/CO 是HPV 检测中的判断标准。如果检测样本中RLU/CO≥1.0，则为宫颈的人乳头瘤病毒感染为阳性，通常RLU/CO 的值越高，则表示感染的越严重。如果RLU/CO<1.0，则为宫颈的人乳头瘤病毒感染为阴性。

1.3.3 比较两组免疫功能指标 分别于两组治疗前后采集空腹外周静脉血5 mL，常温静置，高速离心（转速：3 000 r/min，半径：12 cm）10 min，分离上清，采用双抗体夹心ELISA 法测定血清IgA、IgG、IgM 水平，设置酶标板为空白孔、标准孔、待测样品孔，每孔内均加入50 μL 稀释液，后依次加入样品稀释液、标准品、待测样片各50 μL，轻晃均匀，酶标板覆膜，室温孵育2 h。弃孔内液体，甩干，清洗反应板。加入IgA、IgG、IgM 检测液100 μL/孔，覆膜，常温孵育60 min，弃液体，甩干、洗涤反应板，加入100 μL/孔底物溶液，遮光显色0.5 h，加入终止液，轻弹酶标板终止反应。酶标仪（型号iMark，Bio-RAD 公司）450 nm 处测定吸光值，由高资历检验医生严格遵循试剂说明书进行操作。

1.3.4 比较两组超氧化物歧化酶（SOD）水平 分别采集两组治疗前后空腹外周静脉血5 mL，常温静置，高速离心（转速：3 000 r/min，半径：12 cm）10 min，分离上清，采用黄嘌呤氧化酶法测定，取聚苯乙烯试管，将其分为测量管、对照管。提取样品后，于上清中加蒸馏水，体积是上清的10 倍，将样品配制为浓度1%。加1.0 mL 试剂盒内试剂于测量管、对照管，在试剂1、2、3、4 内各加入0.1 mL，然后测量管加入样品50 μL，在对照管内加50 μL 蒸馏水，待加样后，利用旋涡混匀器混匀，恒温水浴箱内放置40 min。显色：加入2 mL 显色剂于对照管、测量管内，室温放置10 min。在波长550 nm，1 cm 光径条件下比色，根据分光光度计算。

1.3.5 比较两组治疗前后丙二醛（MDA）水平 采用硫代巴比妥酸法测定，取用聚苯乙烯试管，将其分为标准管、标准空白管及测量管、测量空白管，分别在标准管中加入10 nmol/L 四乙氧基丙烷0.1 mL与试剂盒试剂，加0.1 mL 无水乙醇、试剂于标准空白管，加入0.1 mL 肌肉组织匀浆上清液、试剂于测量管，测量空白管加肌肉组织匀浆0.1 mL 的上清液与试剂，充分混匀，标准管、标准空白管、测量管均置入3 mL 的硫代巴比妥酸与1 mL 的双蒸水，依次加入3 mL 硫代巴比妥酸与50%冰醋酸1 mL 于测量空白管内。混匀，保鲜薄膜扎紧试管口，留一针孔，95 ℃水浴40 min，使用后流水进行冷却，高速离心10 min，分离上清，加入比色皿内待检，使用蒸馏水调零分光光度计算出MDA 值。

1.3.6 比较两组疗效 治疗后评估两组临床疗效，显效：子宫颈光滑、阴道分泌物恢复正常，两组子宫颈糜烂面积缩小≥80%；有效：阴道分泌物减少，子宫颈糜烂面积缩小≥50%；无效：阴道分泌物未减少甚至增加，子宫颈症状无明显变化甚至加重。总有效=显效+有效。

1.4 统计学处理 采用SPSS 20.0 软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（±s）表示，比较采用t检验；计数资料以率（%）表示，比较采用χ2检验。以P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料比较 两组一般资料比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性，见表1。

表1 两组一般资料比较

2.2 两组临床体征评分比较 治疗前，两组阴道分泌物异常、子宫颈炎症深度、子宫颈炎症面积评分比较，差异均无统计学意义（P>0.05）；治疗后，观察组阴道分泌物异常、子宫颈炎症深度、子宫颈炎症面积评分均低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表2。

表2 两组临床体征改善评分比较[分，（±s）]

表2 两组临床体征改善评分比较[分，（±s）]

2.3 两组疾病转归情况比较 治疗前，两组HPVDNA 载量比较，差异无统计学意义（P>0.05）。治疗后，观察组HPV-DNA 载量低于对照组，HPV 转阴率高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表3。

表3 两组疾病转归情况比较

2.4 两组免疫功能比较 治疗前，两组IgA、IgG、IgM 水平比较，差异均无统计学意义（P>0.05）；治疗后，观察组IgA、IgG、IgM 水平均高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表4。

表4 两组免疫功能比较[g/L，（±s）]

表4 两组免疫功能比较[g/L，（±s）]

2.5 两组氧化应激指标比较 治疗前，两组氧化应激指标水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）；治疗后，观察组SOD 水平高于对照组、MDA 水平低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表5。

表5 两组氧化应激指标比较（±s）

表5 两组氧化应激指标比较（±s）

2.6 两组疗效比较 观察组治疗总有效率为93.88%，高于对照组的77.08%，差异有统计学意义（χ2=5.538，P<0.05），见表6。

表6 两组疗效比较[例（%）]

3 讨论

有研究指出，HPV 感染与化学刺激、病毒感染或宫颈损伤等因素具有紧密关联，其发病率相对较高；另外，机体发生HPV 感染后侵犯炎症组织，从而引发子宫颈疾病[7-8]。目前，临床尚无可根治HPV 感染的手段，多以药物为主要原则，但单一使用疗效欠佳，故寻求合理的诊疗对策对改善预后具有重要意义[9-10]。

冷冻疗法利用温度变化对病变组织血液循环产生阻滞，继而破坏病变组织细胞，达到治疗目的[11]。有研究指出，对子宫颈炎合并HPV 感染患者给予冷冻疗法，可在降低神经敏感性、不适感的同时达到收缩血管止血的目的[12-13]。rhIL-2 作为趋化细胞因子，在诱导细胞毒性T 细胞、自然杀伤细胞等活性增加清除机体内肿瘤细胞的同时增强抗病毒、抗菌感染作用；另外，rhIL-2 具备免疫调节作用，可监视机体免疫状态，加速机体免疫力提升[14-15]。有研究指出，rhIL-2 可促进宫颈糜烂上皮的修复，控制疾病进展，加速疾病转归[16-17]。本文研究结果显示，采用rhIL-2 联合冷冻疗法治疗，子宫颈炎合并HPV 感染患者临床体征评分、HPV-DNA 载量降低，提示联合治疗可显著提升临床疗效，有效改善HPV-DNA 载量，提高HPV 转阴率。分析其原因可能与rhIL-2 对病毒感染产生的抵抗作用有关，可抑制病毒、细菌感染，可由此证实药物联合治疗方案的可行性。

本研究指出，rhIL-2 联合冷冻疗法治疗子宫颈炎合并HPV 感染，患者IgA、IgG、IgM、SOD 水平升高，MDA 水平降低，且联合疗效优于单纯冷冻疗法治疗，可改善机体免疫能力，减轻氧化应激反应，对促进疾病转归具有重要意义。分析其原因或与rhIL-2 改善巨噬细胞或浆细胞的活性激活相关。由此推测机体免疫及氧化应激可能参与宫颈HPV 感染进展，并发挥重要作用。作为体液免疫功能指标，IgA、IgG、IgM 水平变化与机体免疫状态存在相关性[17-18]。有研究指出，免疫功能改善对降低HPV感染复发风险具有重要裨益。rhIL-2 联合冷冻疗法治疗子宫颈炎合并HPV 感染过程中能增强细胞免疫，从而使患者IgA、IgG、IgM 水平升高[19]。研究指出，HPV 感染致使机体处于高氧化应激状态，造成氧化-抗氧化防御失衡，从而影响各种疾病的发生、发展[20]。SOD、MDA 作为临床常用氧化应激指标，临床可通过测定其水平变化对机体氧化应激程度做出直观反应。其中SOD 可清除机体内氧自由基，MDA 在反映机体脂质过氧化程度的同时对氧自由基水平做出反映。SOD 水平升高，可以起到防止细胞和组织受到氧化性损伤的作用；MDA 水平的下降，可以提高抗氧化酶的活性，减少组织细胞自由基生成增加及失控的可能[21-22]。

综上所述，rhIL-2 联合冷冻疗法治疗子宫颈炎合并HPV 感染，改善患者症状体征，提升机体免疫力，减轻氧化应激反应，降低病毒载量。分析其机制可能与调节免疫功能及氧化应激指标水平相关，值得临床推荐与应用。虽研究认为给予子宫颈炎合并HPV 感染患者rhIL-2 联合冷冻疗法联合治疗效果显著，但本文研究中未对远期预后进行分析，致使研究存在不足，需进一步研究评估。