非小细胞肺癌根治性放化疗后血清外泌体来源的microRNA-4429水平与预后的关系

张莹，陈军梅，陈名涛，郭晶，吴晓冬，陈欢

1.华润武钢总医院,a 肿瘤科，b 中医科，c 呼吸与危重症科,武汉 430080；2.武汉泰康楚园康复医院康复医学中心；3.武汉工程大学社区卫生服务站检验科

肺癌是较为常见的一种恶性肿瘤,在全世界范围内具有较高的发病率。其中非小细胞肺癌(NSCLC)占到肺癌的80%以上[1-2]。血清外泌体来源的microRNA-4429是microRNA中的一员,参与较多疾病的发生,肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭等以及放疗的敏感性等均与其有着密切的关系,因此部分医学专家认为microRNA-4429与NSCLC根治性放化疗患者的预后有着较大的关联[3-5],但相关的研究还比较少,尚未得到证实。本文旨在研究NSCLC根治性放化疗后血清外泌体来源的microRNA-4429水平与患者预后的关系。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取2015年10月至2020年10 月期间，华润武钢总医院收治的120例NSCLC根治性放化疗患者治疗前、治疗后的血液标本进行研究。随访调查120例患者1年后的生存率为70.00% (84/120),根据随访调查患者1年后生存情况,分为观察组(84例)、对照组(36例)。观察组:男性45例,女性39例;年龄范围45～70(61.4±1.5)岁;肿瘤分期[6]为Ⅲ期40例,Ⅳ期44例;分化程度为低分化35例、中高分化49例。对照组:男性20例,女性16例;年龄范围45～69(60.9±1.5)岁;肿瘤分期为Ⅲ期17例,Ⅳ期19例;分化程度为低分化10 例、中高分化26例。2组一般资料对比,差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。本研究方案经华润武钢总医院伦理委员会批准。

1.2 纳入与排除标准 纳入标准:(1)初次诊断为进展期NSCLC患者;(2)患者均接受根治性放化疗治疗;(3)根治性放化疗治疗前均接受免疫治疗或靶向治疗;(4)患者及家属对本次研究知情,且自愿签署知情同意书。排除标准:(1)患者心、肝、肾功能存在异常及重大疾病者;(2)合并血液系统、免疫系统功能疾病者;(3)转移性肺癌;(4) 长期服用糖皮质激素类药物患者;(5)伴有全身感染性疾病患者。

1.3 根治性放化疗治疗方法 患者在治疗前进行常规检查,确保患者的各项指标符合治疗标准。给予顺铂(75 mg/m2，通化茂祥制药有限公司生产)+长春瑞滨(5 mg/m2，齐鲁制药有限公司生产)化疗。采用调强适型放疗技术，根治性放疗剂量为60～70 Gy，2 Gy/次。

1.4 实时荧光定量(PCR)技术检测方法 采用PCR技术检测方法检测患者血清外泌体来源的microRNA-4429水平,分别提取120例NSCLC患者治疗前及治疗后1、3、6个月的血液标本,置于肝素抗凝管中,在3 000 r/min离心操作10 min后取上层血清,使用PCR技术检测血清microRNA-4429水平。按血清总RNA提取试剂盒说明书进行操作,在无菌无酶的环境下提取血清总RNA,使用紫外分光光度计检测总RNA纯度,将其反转录为cDNA,使用PCR仪扩增,条件为94℃预变性5 min、95 ℃变性45 s、60 ℃退火45 s、72 ℃扩增45 s,共进行35个循环,并采用2-Cr法计算MicroRNA-4429的相对表达水平。

1.5 观察指标 (1)血清外泌体来源的mircroRNA 水平:治疗前、治疗1个月、治疗3个月、治疗6个月血清外泌体来源的mircroRNA水平变化情况;(2)microRNA-4429水平、生存预后的相关性;(3)分析预后风险因素。

2 结果

2.1 microRNA-4429水平 2组患者在治疗前及治疗1个月后microRNA-4429水平对比,差异无统计学意义(P>0.05),治疗后3、6个月观察组microRNA-4429水平较对照组明显升高(P<0.05)。见表1。

表1 2组患者microRNA-4429水平比较

2.2 microRNA-4429水平与生存预后的关系 治疗1个月后NSCLC患者生存预后ROC曲线下面积、最佳截断点、灵敏度及特异度分别为0.58、0.49、59.12%、91.23%;治疗3个月NSCLC患者生存预后ROC曲线下面积、最佳截断点、灵敏度及特异度分别为0.61、0.62、90.05%、56.82%;治疗6个月后NSCLC患者生存预后ROC曲线下面积、最佳截断点、灵敏度及特异度分别为0.88、0.64、62.93%、98.24%。治疗6个月诊断NSCLC生存预后效能明显高于治疗1个月及治疗3个月(Z=3.587、2.608,P值均<0.05)。治疗6个月NSCLC约登指数为最大值,因此将治疗6个月NSCLC生存预后作为最佳截断点将NSCLC患者分为高MicroRNA组及低MicroRNA组,高microRNA组NSCLC患者生存预后的不良风险发生率较低。

2.3 影响预后的危险因素分析 将NSCLC生存预后作为因变量,将年龄、性别、吸烟史、肿瘤直径、肿瘤分期、分化程度、靶向治疗和microRNA-4429作为自变量,分别纳入COX回归分析,结果显示分化程度、靶向治疗和microRNA-4429均与NSCLC生存预后有相关性,是NSCLC患者生存预后的独立危险因素(P<0.05)。见表2。

表2 NSCLC患者生存预后风险因素的COX回归分析

3 讨论

对NSCLC的治疗,放疗是其治疗的主要手段,但并非所有患者对放疗治疗均具有较高的敏感度[7-8]。由于缺乏有效的早期诊断能力,大部分NSCLC患者在接受治疗时已经处于中晚期阶段,化疗的效果并不理想,患者的生存率比较低,在治疗后常会出现复发以及转移等风险[9-11]。研究表明,microRNA是一种内源性非编码序列,在真核生物中普遍存在,在癌症细胞的增殖及分化中均有着重要的参与作用[12-14],microRNA-4299作为其中一员,同样具有相应的作用,但当前关于microRNA-4299与NSCLC患者生存预后关系的研究还比较少。

本研究表明，治疗3个月及6个月观察组的microRNA-4299水平明显高于对照组,且在ROC曲线分析及COX相关性分析中发现,microRNA-4299水平与NSCLC患者生存预后效果存在线性关系,高microRNA组预后不良风险性低于低microRNA组。这主要是因为microRNA-4299能够有效调控肿瘤细胞的增殖、迁移以及侵袭等过程,从而调节放化疗对NSCLC患者的敏感性,因此能够在一定程度上反映出患者放化疗后的疗效。此外，本次研究显示分化程度、靶向治疗以及microRNA-4299水平是影响NSCLC患者生存预后的独立危险因素,与纪奇峰等[15]、龙涛等[16]的研究结果一致。

综上所述,microRNA-4299表达水平高表明患者预后不良风险较低,且分化程度、靶向治疗及microRNA-4299水平是NSCLC患者生存预后的独立危险因素,能够作为NSCLC患者生存预后效果的辅助评价指标。