气相色谱法测定精制银翘解毒片中薄荷脑的含量

陈毓芳

(龙岩市市场监管综合执法支队,福建 龙岩 364000)

精制银翘解毒片含扑热息痛、薄荷脑、桔梗、荆芥穗、牛蒡子等十味药,主要功效为疏风散热、解表退烧,常用来治疗风热感冒,症见发烧,头痛,口舌生疮等[1-2]。薄荷脑为该制剂的主要活性成分,其药理作用包括止痛、止痒、抗炎、清凉、防腐等。精制银翘解毒片的执行标准为部颁标准中药成方制剂第三册WS3-B-0660-91[3],该执行标准未检测薄荷脑的含量。为了提高该药品的质量标准,保障该药品质量安全,本文通过实验确立了用GC检测精制银翘解毒片中薄荷脑的含量。该方法操作简单,柱效高、灵敏度高,准确度好,精密度高,分析快速、重现性好,可有效用于检测精制银翘解毒片中薄荷脑的含量,以提高该药品的质量标准。

1 仪器与试剂

仪器为岛津GC-2010Plus气相色谱仪。

试剂薄荷脑对照品购自中国食品药品检定研究院(批号:110728—201907,含量/限量测定用)[4],无水乙醇为西陇科学股份有限公司,优级纯,含量大于99.8%,精制银翘解毒片(市售,批号:20201115)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱条件见表1。

表1 色谱条件

2.2 供试品溶液的制备

取精制银翘解毒片10片,除去糖衣,精密称重为5.0988g,平均片重为0.5099g,研细,精密称取1#1.0568g,2#1.0535g,分别置于具塞锥形瓶中,精密加入无水乙醇25mL,称定重量为1#88.3681g,2#86.3764g,密塞,超声处理(功率300W、频率42kHZ)30分钟,放冷,再称定重量,用无水乙醇补足减失的重量,滤过,取续滤液,即得。

2.3 对照品溶液的制备

精密称取薄荷脑对照品1#0.01068g,2#0.01085g,分别置于100mL容量瓶中,加无水乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀;再分别精密吸取2mL,分别置于10mL容量瓶中,加无水乙醇定容至刻度,摇匀,即得。

2.4 样品的测定

分别精密吸取供试品溶液1μL、对照品溶液1μL,注入气相色谱仪,分别连续进样2次,测定峰面积,按外标法计算薄荷脑的含量,测得样品每片含薄荷脑0.30mg,每1g样品含薄荷脑的量为0.588mg。

2.5 线性关系考察

精密称取薄荷脑对照品0.05089g,置于100mL容量瓶中,加无水乙醇溶解至刻度,作为对照品储备液(508.9μg/mL)。分别精密吸取储备液1、2、5、10、20mL,分别置于50mL容量瓶中,加适量无水乙醇,振摇,使溶解,再加无水乙醇定容至刻度。分别得到S1(浓度为10.178μg/mL)、S2(浓度为20.356μg/mL)、S3(浓度为50.890μg/mL)、S4(浓度为101.78μg/mL)、S5(浓度为203.56μg/mL)及储备液S6(浓度为508.9μg/mL),作为标准曲线系列,进样量均为1μL。以薄荷脑浓度为横坐标,以相对应的薄荷脑峰面积为纵坐标[5],绘制校准曲线,得到校准曲线线性公式:Y=1914.51X-2798.99,r=0.9999。结果显示:所测组分薄荷脑的浓度在10.178～508.9μg/mL之间,与峰面积的线性关系良好。见图1。

表2 样品的含量测定计算表

图1 标准曲线绘制图

2.6 准确度试验

精密称取薄荷脑对照品0.02098g,置于100容量瓶中,加适量无水乙醇,振摇使溶解,再用无水乙醇定容至刻度,摇匀,作为加标用标准溶液(浓度为209.8μg/mL)。分别精取供试品溶液共6份,分别精密加入上述标准溶液各5mL,再分别精密加入无水乙醇20mL,操作同供试品溶液制备。实验结果表明:加标回收率在99.02%～100.89%之间,六份回收率RSD为0.80%。

表3 样品的加标回收率计算表

2.7 精密度试验

取标准曲线系列中S2(20.356μg/mL)溶液,重复6次进样,薄荷脑的峰面积分别为:39003、39416、39574、39213、39887、40653。计算相对标准偏差RSD为1.5%。

2.8 重复性试验

精密称取供试品粉末6份,测得薄荷脑的含量分别为:0.298mg/片、0.302mg/片、0.298mg/片、0.300mg/片、0.300mg/片、0.299mg/片,六份数据RSD为0.51%。

2.9 稳定性考察

取制备好的供试品溶液,12小时内每隔2小时测定薄荷脑含量[1],得到7组数据,薄荷脑的峰面积依次为:48660、48355、48064、47679、46573、47675、46719。相对标准偏差RSD为1.7%。

2.10 专属性试验

分别取无水乙醇、薄荷脑对照品溶液,供试品溶液、供试品加标溶液各1ul,注入气相色谱仪,进行专属性实验。测得结果如下图所示:无水乙醇GC图与薄荷脑对照品GC图,两者在薄荷脑峰位置有显著区别;供试品溶液GC图和供试品加标溶液GC图,两者薄荷脑峰面积有显著区别,故本方法专属性强。见图2、图3、图4、图5。

图2 无水乙醇GC图

图3 薄荷脑对照品溶液GC图

图4 供试品溶液GC图

图5 供试品加标溶液GC图

3 讨论

笔者在实验过程中分别尝试用无水乙醇、石油醚、乙酸乙酯这三种溶剂作为样品的提取溶剂,实验结果表明:上述三种提取溶剂中无水乙醇的提取效率最高,所以最终本方法采用无水乙醇作为提取溶剂。在制备供试品溶液的实验中,笔者曾分别尝试超声处理10分钟、20分钟、30分钟进行比较,结果发现超声30分钟提取已接近完全,加标回收率接近100%,所以本实验最终确定超声提取时间为30分钟。

本法采用GC检测精制银翘解毒片中薄荷脑的含量[3],操作简便、线性关系好,准确度、精密度高,专属性、稳定性强,薄荷脑同其他组分的分离度好,可较为准确测定精制银翘解毒片中薄荷脑的含量[6]。

薄荷脑是精制银翘解毒片中清热解表作用的主要活性成分,所以检测精制银翘解毒片中薄荷脑的含量具有重要意义[3]。建议在精制银翘解毒片的质量标准中,增加气相色谱法检测精制银翘解毒片中薄荷脑的含量[3],以提高药品质量标准,保障该药品质量安全。